专利名称：一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测中药中非法添加西药成分的器具，特别涉及一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡，属于中药非法添加西药成分检测技术领域。
背景技术：
糖尿病降糖中药或保健品中最常非法添加的降糖西药成分是格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪。据五个省市对市面上销售的32种宣称具有降糖作用中药及中药保健品进行的抽样化验检查发现，70%的药物中都添加有降糖西药成分。如果患者在不知情的情况下， 私自服用过量号称纯中药的药物，就会出现病情加重或恶化的情况。例如格列苯脲的降糖作用为甲苯磺丁脲的100 200倍，治疗量范围大，降糖作用强，半减期12 14小时，维持时间长，易引起低血糖昏迷，特别是老年人。低血糖昏迷如持续6小时以上引起大脑功能损害可能是不可逆的，主要是神经元广泛变性、坏死，大小神经胶质细胞浸润。神经系统中大脑皮质、海马回，小脑、尾状核，苍白球处低血糖最为明显。目前，检测中药中非法添加西药成分的主要方法有高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测中药中西药成分的分析方法是非常必要的。
发明内容本实用新型的目的在于提供一种操作简便快捷、成本低、携带方便、非专业人员也能操作及可进行现场检测的胶体金试纸，且能同时检测三类西药降糖成分，克服现有技术操作繁琐、专业要求高的缺陷。本实用新型的技术方案一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡，在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4，测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、14、15、硝酸纤维素膜6和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜7、14、15 ；胶体金膜依次为含抗格列苯脲抗体、抗格列齐特抗体、抗格列吡嗪抗体的胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有三条检测带和一条质控带，依次是含格列苯脲蛋白质偶联物检测带10，含格列齐特蛋白质偶联物检测带11，含格列吡嗪蛋白质偶联物检测带12，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带13 ；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。应用免疫学的方法直接检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪的含量，检测样品为胶囊、片剂或药丸降糖中药样品，处理方法如下(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；[0008](2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震荡反应30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后的上清液；上清液澄清，按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液IOOyL加入 300 μ L样品稀释液，混合均勻后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上清液，按上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；样品稀释液为ρΗ7. 6、IOmmol PBST溶液。如果显示检测带10、11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪含量没有超过允许值。如果检测带10、11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪含量同时超过允许值。如果检测带10、11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲和格列齐特含量超过允许值，而格列吡嗪含量没有超过允许值。如果检测带10、12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲和格列吡嗪含量超过允许值，而格列齐特含量没有超过允许值。如果检测带11、12不显示颜色，检测带10和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列齐特和格列吡嗪含量超过允许值，而格列苯脲含量没有超过允许值。如果检测带10不显示颜色，检测带11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲含量超过允许值，而格列齐特、格列吡嗪含量没有超过允许值。如果检测带11不显示颜色，检测带10、12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列齐特含量超过允许值，而格列苯脲、格列吡嗪含量没有超过允许值。如果检测带12不显示颜色，检测带10、11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列吡嗪含量超过允许值，而格列苯脲、格列齐特含量没有超过允许值。如果检测带10、11、12和质控带13均不显色，则表明测试条失效。本发明的有益效果本发明三联检测卡能同时检测出中药样品中含有的格列苯脲、格列齐特及格列吡嗪，本三联检测卡易于制备且节省检测费用，使用方便快速，结果准确。
图1格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡的外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条，3、检测窗孔，4、加样孔。图2格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜，7、含格列本脲抗体的胶体金膜，14、含格列齐特抗体的胶体金膜，15、 含格列吡嗪抗体的胶体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。图3格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡的硝酸玻璃纤维膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、含格列苯脲蛋白质偶联物检测带，11、含格列齐特蛋白质偶联物检测带，12、含格列吡嗪蛋白质偶联物检测带，13、质控带。
具体实施方式
本实用新型结合具体实施例参见附图进一步说明如下实施例1 格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长7cm，宽2cm，厚0. 5cm，薄壳壁厚0. 1cm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约6. 0cm，片宽约0. km，厚度小于2. 5mm。 测试条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长6. Ocm,宽 0. 4cm ；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm，长2_2. 5cm,宽 0. 4cm0硝酸纤维素膜6上有三条间隔开的横向显示印迹带，参见附图3，三条显示印迹带中，第一条是检测带10，含格列苯脲蛋白质偶联物，第二条检测带11，含格列齐特蛋白质偶联物，第三条是检测带12，含格列吡嗪蛋白质偶联物，第四条是质控带13，含抗兔抗体或抗鼠抗体。调节三种蛋白质偶联物浓度大约为lmg/mL，抗兔抗体或抗鼠抗体浓度大约为 0. lmg/mL时喷膜。支承背板5 —端上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6—端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜7、14、15，胶体金膜7、14、15依次是含抗格列苯脲抗体、抗格列齐特抗体和抗格列吡嗪抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜 7、14、15 均厚 0. 5-0. 8mm,长 0. 5-0. 6cm,宽 0. 4cm。样品垫 8 厚 0. 5-0. 8mm,长 2cm, 宽0. 4cm0吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,长1. 6-2cm,宽0. 4cm0胶体金膜是将抗体与胶体金颗粒标记后，调节浓度大约为ID涂布胶体玻璃纤维膜，烘干后备用金。金膜7、14、15、样品垫8 及吸水膜9与硝酸纤维素膜6搭接长度为0. 1-0. 2cm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。实施例2本实用新型格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡用于检测胶囊、片剂、药丸等降糖中药样品中是否含有格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪，据此鉴别降糖中药有无违法添加西药降糖成分。处理方法如下(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震荡反应30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后的上清液；上清液澄清，按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液100 μ L加入 300 μ L样品稀释液，混合均勻后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上清液，按上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；样品稀释液为ρΗ7. 6、IOmmol PBST溶液。使用格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔中4滴注入格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡的样品垫8，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗格列苯脲、抗格列齐特和抗格列吡嗪单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结
^ ο检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与含格列苯脲蛋白质偶联物、含格列齐特蛋白质偶联物、含格列吡嗪蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。当样品中有相应的待检格列苯脲、格列齐特及格列吡嗪存在，则样品加入后即与相应的抗体发生反应， 而不会与相应的检测带所含的格列苯脲蛋白质偶联物、格列齐特蛋白质偶联物、格列吡嗪蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有以下9种情况1、如果显示检测带10、11、12和质控带13同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪含量没有超过允许值。2、如果检测带10、11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪含量同时超过允许值。3、如果检测带10、11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲和格列齐特含量超过允许值，而格列吡嗪含量没有超过允许值。4、如果检测带10、12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲和格列吡嗪含量超过允许值，而格列齐特含量没有超过允许值。5、如果检测带11、12不显示颜色，检测带10和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列齐特和格列吡嗪含量超过允许值，而格列苯脲含量没有超过允许值。6、如果检测带10不显示颜色，检测带11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲含量超过允许值，而格列齐特、格列吡嗪含量没有超过允许值。7、如果检测带11不显示颜色，检测带10、12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列齐特含量超过允许值，而格列苯脲、格列吡嗪含量没有超过允许值。8、如果检测带12不显示颜色，检测带10、11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列吡嗪含量超过允许值，而格列苯脲、格列齐特含量没有超过允许值。9、如果检测带10、11、12和质控带13均不显色，则表明测试条失效。
权利要求1. 一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4)，测试条 (2)是由支承背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、(14)、(15)、 硝酸纤维素膜(6)、和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜(7)、(14)、(15)；胶体金膜(7)、(14)、(15)依次是含抗格列苯脲抗体、抗格列齐特抗体、 抗格列吡嗪抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有三条检测带和一条质控带，依次是含格列苯脲蛋白质偶联物检测带(10)，含格列齐特蛋白质偶联物检测带(11)， 含格列吡嗪蛋白质偶联物检测带(12)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(13)；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
专利摘要一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡，属于中药中非法添加西药成分检测技术领域。本实用新型三联检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、数段胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；数段胶体金膜依次是含抗格列苯脲抗体、抗格列齐特抗体、抗格列吡嗪抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有3条检测带，分别含格列苯脲蛋白质偶联物、格列齐特蛋白质偶联物、格列吡嗪蛋白质偶联物，另有1条含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本实用新型优点是能同时检测出降糖中药中非法添加的格列苯脲、格列齐特及格列吡嗪。检测卡易于制备且节省检测费用，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N33/558GK202075279SQ20102068145
公开日2011年12月14日 申请日期2010年12月27日 优先权日2010年12月27日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司