生物相关物质测定用管及定量系统的制作方法

专利名称：生物相关物质测定用管及定量系统的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于对生物相关物质进行测定的管、以及利用该管的定量系统。
背景技术：
在医疗领域的检查等中，经常进行如下检查对从被检查者采集的血清样品等检测样品中的特定成分的浓度进行测定。近年来，在这样的检查中，正在逐渐普及使用那些由血清样品中自动地计算出特定成分的浓度的装置，检查所消耗的时间和劳动等正逐渐减少。即使在使用这样的装置的情况下，为了确实地对检测样品中目标物质进行定量，需要通过多种测试对所使用的试剂的性能、批次(口 7卜)、特征等进行确认。在对检测样品中的目标物质进行定量时，现有技术是分别进行阴性对照、阳性对照、测定值校正等，然后，与由目标物质得到的测定值进行比较以把握准确的值。为此，可能会存在难以迅速对目标物质进行定量的情况，或存在准确性低的情况。此外，为了保证测定精度，在测定前制作校正曲线，再对检测样品中的成分进行测定，对目标成分的定量需要耗费时间，难以提高操作效率。另外，对多个目标生物相关物质进行定量时，大多需要耗费时间和工夫。

发明内容
发明要解决的问题本发明是鉴于上述问题而进行的，其目的在于通过更简便的操作，来实现对生物相关物质更为准确的定量。此外，本发明的目的在于提供一种定量系统，该系统可以更为准确地对目标生物相关物质进行定量。解决问题的方法本发明人等为了解决上述问题进行了深入的研究，结果发现通过在1个生物相关物质测定管中具备目标生物相关物质测定用粒子，以及用于提高测定值准确性的校正用粒子，可以更为准确地对目标生物相关物质进行定量。S卩，本发明涉及生物相关物质测定管，其特征在于，在该管内排列有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒，固定有一定量的所述生物相关物质的第 2微粒，以及阴性对照用第3微粒。在此，阴性对照用微粒是指，不与目标生物相关物质结合的粒子。作为这样的阴性对照用微粒，可以使用例如从检测样品中除去了目标生物相关物质后的检测样品空白。在本发明的生物相关物质测定用管中，所述第2微粒是用来对生物相关物质的测定数据进行校正的微粒，优选固定有分级的不同量的生物相关物质的多个微粒。该微粒用来制作校正曲线。另外，在本发明中，在所述第1 第3微粒之间，还可以具备具有遮光性的部件。期望在生物相关物质的定量中使用校正曲线，期望在生物相关物质定量时制成该校正曲线，或者在进行生物相关物质的定量前，预先制成该校正曲线。
在对目标生物相关物质进行定量时，使用固定有能够与目标生物相关物质结合的物质的微粒，以及阳性对照用微粒和阴性对照用微粒来确认定量的准确度。此外，本发明的定量系统的特征在于具有上述管；对从上述管内的微粒发出的信号进行检测的检测部；基于所述检测的信号制成校正曲线的校正曲线制成部；参照所述制成的校正曲线对生物相关物质进行定量的演算部。此外，本发明的定量系统具有荧光强度演算装置，其在能够与目标生物相关物质结合的第1微粒、预先结合有一定量的目标生物相关物质作为阳性对照发挥功能的第2微粒、以及作为阴性对照发挥功能的第3微粒上赋予荧光标记，向这些赋予了荧光标记的第1 第3微粒照射激发光，并对荧光强度进行演算；演算装置，其接收由荧光强度演算装置送出的荧光强度信号，对与第1微粒结合的所述生物相关物质进行定量。为了制成用于对与第1微粒结合的目标生物相关物质进行定量的校正曲线，第2 微粒可以预先结合有分级的不同量的生物相关物质，或者为了对第1微粒的发光强度进行校正，第2微粒可以结合已知量的生物相关物质。第1 第3微粒可以预先在管内排列固定成一列，也可以在测定生物相关物质时排列形成为一列。优选排列第1 第3微粒的管可以自由地安装与拆卸。另外，本发明涉及生物相关物质的测定方法，其特征在于，使检测样品与所述管接触，从而对检测样品中的目标生物相关物质进行测定。在本发明中，测定可以同时进行对目标生物相关物质的定性检测及定量。发明的效果通过本发明的生物相关物质测定用管，可以针对生物相关物质的测定进行校正， 从而可以更为准确地对生物相关物质进行定量。此外，通过使用阳性对照用第2珠、阴性对照用第3珠、校正用第4珠，即使在测定用管的批次编号和制造编号、定量系统的形式和类型、定量时所使用的试剂等不同的情况下，也可以省去系统校正所花费的工夫，同时更为准确地对目标生物相关物质进行定量。这样一来，通过使用本发明的管及系统，不仅可以定性地检测目标生物相关物质的有无，而且还可以对目标生物相关物质的量进行定量，从而可以提供方便性更高的定量系统。这意味着，可以对通过免疫色谱法等进行的定性反应进行确认，同时，由于可以对反应产物的量进行定量，因此作为替代免疫色谱法的测定体系是有用的。因此，通过使用本发明的测定用管及定量系统，可以提供方便性更高的定量系统。另外，就本发明的测定用管和使用该测定用管的定量系统而言，可以节省系统的保养和维护所花费的工夫，能够充分地应对在患者的附近实施检查并迅速进行诊断的即时检测 (Point of Care)的实行。


[图1]为概略图，概略地示出排列有目标物质捕捉珠、阴性对照珠、校正珠的本发明的生物相关物质测定用管。[图2]为说明图，用于概略地说明使用校正珠的发光强度及浓度对测定值进行校正的方法。
[图3]为概略图，概略地示出排列有第1微粒、及多个第2微粒的本发明的生物相关物质测定用管。[图4]为说明图，概略地说明基于固定了不同量抗体的多个珠的各发光强度及已知浓度，从而制成校正曲线并对目标物质的浓度进行定量。[图5]为设置有遮光珠的生物相关物质测定用管的概略图。[图6]为对发光强度进行校正的本发明定量系统的功能框图。[图7]为剖面图，示出了用于从在生物相关物质测定用管内排列的各珠读取发光强度的测定机构。[图8]为示出了用于对与目标物质捕捉珠结合的目标物质进行定量的程序的流程图。[图9]为说明图，以抗原-抗体反应为例对本发明的作用进行概略说明。[图10]为用于制成校正曲线的、具有固定了不同量的抗体的多个珠的生物相关物质测定用管的概略图。[图11]为使用具有固定了不同量抗体的多个珠的生物相关物质测定用管进行目标物质进行定量的定量系统的功能框图。[图12]为概略图，对在各珠之间设置有遮光性过滤器的生物相关物质测定用管的概要进行说明。[图13]为测定用管的概略图，其具有作为第2微珠的用于对由测定用管的批次差和制造编号的差异所导致的测定误差、由定量系统的形式和类型的差异所导致的误差、由定量时使用的试剂的差异所导致的误差等进行校正的微粒和阳性对照用微粒。[图14]为使用测定用管对目标生物相关物质进行定量的定量系统的功能框图， 所述测定用管具有作为第2微珠的用于对测定用管的批次差和制造编号的差异所导致的测定误差、由定量系统的形式和类型的差异所导致的误差、由定量时使用的试剂的差异所导致的误差等进行校正的微粒和阳性对照用微粒。[图15]对使用2个测定体系、针对多项生物相关物质进行定量的实施方式进行说明的说明图。[图16]为说明图，其示出了向第1 3微粒照射照射光、基于由各微粒产生的荧光对目标生物相关物质进行定量的系统的概略。[图17]为功能框图，其示出了基于向第1 3微粒照射照射光、由各微粒发出的荧光对目标生物相关物质进行定量的系统。[图18]为说明图，其示出了排列有通过遮光珠而固定了NP-HSA的珠和固定了抗 OVA抗体的珠的管的概略。[图19]为图表，其示出了使用排列有固定了抗OVA抗体的珠的管而取得的赋予在 OVA上的标记的发光强度。[图20]为用于基于OVA的发光强度对OVA进行定量的校正曲线的图表。
具体实施例方式1.发明概要本发明的生物相关物质测定用管的特征在于，在管内排列有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒，固定有一定量的所述生物相关物质的第2微粒， 以及阴性对照用第3微粒。通过使用本发明的生物相关物质测定用管，可以实现关于生物相关物质的两种不同的定量方法。即，第1定量方法(i)，利用已经制成的校正曲线、对目标生物相关物质的测定值进行校正从而进行更为准确的定量，第2定量方法(ii)，同时进行校正曲线的制成和目标生物相关物质的定量从而进行更为准确的定量。在第1定量方法 (i)中，使用预先规定了测定目标生物相关物质量时的信号曲线作为校正曲线，考虑到相当于该校正曲线上的任何位置的量的生物相关物质固定在微粒上的情况，使用该微粒来校正测定值。此外，在第2定量方法(ii)中，考虑到不同量的生物相关物质固定在多个微粒上的情况，使用固定有各不同量的生物相关物质的微粒来制成校正曲线。如上所述，在第1定量方法⑴中，第2微粒用于对通过第1微粒捕捉的生物相关物质的测定值进行校正。关于本发明的生物相关物质测定用管的第1实施方式为如下方式第2微粒用于对通过第1微粒捕捉的生物相关物质的测定值进行校正，例如，可以列举如图1所示的生物相关物质测定用管。图1所示的生物相关物质测定用管2具有作为第 1微粒的目标物质捕捉珠3，作为预先固定有一定量的生物相关物质的第2微粒的校正珠4， 以及作为阴性对照用第3微粒的阴性对照珠5。在使用第2微粒对通过第1微粒捕捉的生物相关物质的测定值进行校正时，例如将检测样品放入到管中，使微粒与检测样品接触，在对与固定在第2微粒上的生物相关物质相关的信号(例如，发光强度)进行测定时，有时发光强度与由第2微粒的生物相关物质的固定量预先预测的值(校正曲线上的值)具有偏差。在这样的情况下，算出与校正曲线的偏差量△ (S)，获得将该偏差量△反映至目标物质捕捉珠的测定数据的生物相关物质的定量值。通过按照这样的程序对生物相关物质进行定量，可以进一步减少在对作为目标的生物相关物质的定量中的误差，能够进行更为准确的定量。例如，如图2所示，在第2微粒上固定预先确定量(与校正曲线上的任何位置相对应的量)的生物相关物质，与第2微粒相关的发光强度，例如期待被描绘在校正曲线上的对应于浓度A的位置点P。但是，当发光强度的实测值被描绘在校正曲线的上侧之外的位置Q时，该点P和点Q之间存在发光强度的偏差量Δ。该偏差量Δ可以作为发光强度的校正参数使用。例如，从固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒相关的发光强度的实测值中减去该偏差量Δ， 从而对发光强度进行校正。第1微粒的发光强度为β时，可以求出对应于从该β中减去偏差量△得到的值Y的浓度B作为更为准确的定量值。经由校正曲线求出对应于该减法处理的发光强度的浓度，可以精度更高地对与第1微粒结合的生物相关物质进行定量。此夕卜，当浓度A相对应的第2微粒的发光强度被绘制在校正曲线的下侧时，通过在与第1微粒相关的发光强度的实测值上加上该偏差量Δ来对发光强度进行校正。经由校正曲线求出， 对应于经该加法处理的发光强度的浓度，可以精度更高地对与第1微粒结合的生物相关物质进行定量。需要说明的是，这样的发光强度的校正方法不仅可以适用于上述的发光强度， 也可以适用于吸光度等其它的测定量，可以根据定量系统的构成进行适当地改变。此外，在第2定量方法(ii)中，可以基本同时地进行校正曲线的制成，以及基于该校正曲线对目标生物相关物质进行定量。作为能够同时进行校正曲线的制成和对目标生物相关物质进行定量的生物相关物质测定用管的实施方式，可以举出例如图3所示的方式。 如图3所示，生物相关物质测定用管11具有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒7，预先固定有不同量的所述生物相关物质的多个微粒(第2微粒)8、9，以及作为阴性对照用第3微粒的阴性对照珠19。该固定有不同量的生物相关物质的多个微粒，如图所示，例如2个，分别测定预先固定在该2个微粒8、9上的生物相关物质的量，并绘制在图表上，由此可以制成校正曲线。需要说明的是，作为预先固定有不同量的生物相关物质的微粒的个数，例举了 2个，但该微粒的个数不限于2个，可以为3个、4个等2个以上。 伴随预先固定有不同量的生物相关物质的微粒的个数的增加，可以减少制作校正曲线时的分散值、制成更为准确的校正曲线。通过具有固定了能够与目标生物相关物质结合的物质的第1微粒7、预先固定有不同量的所述生物相关物质的多个微粒8、9，可以同时进行校正曲线的制成和目标生物相关物质的定量，能够在测定误差更小的条件下进行测定。在这样的实施方式中，例如图4所示，根据微粒8的发光强度Rl及已知浓度在图表上绘制点X，同样地，根据微粒9的发光强度及已知浓度在图表上绘制点Y。通过这些点X、Y可以制成校正曲线，可以使用制成的校正曲线对测定对象物质的浓度进行定量。即，使微粒与检测样品接触，可以基于微粒7的发光强度R3，经由校正曲线求出浓度E。如上所示，通过同时进行校正曲线的制成及作为目标的生物相关物质的定量，可以进行精度高的定量。通过实施以上这样的定量，可以进行与生物相关物质的测定相关的校正，从而能够更为准确地对生物相关物质进行定量。此外，通过使用捕捉生物相关物质的第1微粒、预先固定有一定量的生物相关物质的第2微粒、及阴性对照用第3微粒，即使在测定用管的批次编号和制造编号、定量系统的形式和类型、定量时所使用的试剂等不同的情况下，也可以省去系统校正所花费的工夫， 同时可以更为准确地进行目标生物相关物质的定量。这样一来，通过使用本发明的测定用管及定量系统，可以提供方便性更高的定量系统。另外，在使用本发明的测定用管以及使用该测定用管的定量系统中，可以节省系统的保养和维护所花费的工夫，能够充分地应对在患者的附近实施检查并迅速进行诊断的即时检测的实行。在此，微粒形成为近球形，粒径优选为0. 05 10. 0mm，更优选为0. 1 5. 0mm。作为微粒的材质，可以列举例如氮化硅、二氧化硅、玻璃、磁铁矿、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、尼龙、聚丙烯酰胺、葡聚糖、直链淀粉、琼脂糖、天然及改性纤维素、活性炭等。作为测定方法，有例如使用化学发光的测定、使用生物发光的测定、使用荧光的测定等。在使用化学发光对生物相关物质进行定量时，由化学反应激发的化学发光物质向基态跃迁时向外部放出电磁波。在对蛋白质进行定量时，作为产生这样现象的发光体系的代表实例，有使用氨基苯二甲酰胼的体系，以及使用二嚅丁环(dioxetane)的体系。在氨基苯二甲酰胼应用化学发光中，是在过氧化氢的存在下，氨基苯二甲酰胼分解而发光，通过以过氧化物酶作为催化剂，可以使发光更强。另外，通过添加碘苯酚化合物可以使发光强度增强约1000倍，通过利用这样的强化因子，不仅可以增强发光强度，还可以延长发光时间。作为这样进行发光的市售品，例如有Pierce Chemical 公司的Supersignal (注册商标)系列、和光纯药工业公司的ImmunoStar试剂盒、Roche-diagnostics 公司的 BMChemiluminescence 等。在二.喝丁环应用化学发光中，化学发光物质(例如，AMPPD(注册商标))与碱性磷酸酶反应生成中间体，该中间体自然开裂，生成金刚烷酮和激发态的发光物质，该发光物质移动至基态的过程中发光。作为用于这样进行发光的市售品，例如有Bio-Rad Laboratories &司的 IMMUNOSTARNewEngland Bio Labs &司的 Phototope ( 商标)等。另一方面，在使用荧光对目标生物相关物质进行定量的情况下，向目标生物相关物质赋予荧光标记，向该赋予的荧光标记照射特定波长的激发光，使荧光标记产生荧光。这样一来，与使用上述化学发光的测定装置的必要结构不同。通常来说，在利用荧光时，通过生物相关物质可以多重染色，以及在期望时随时可以产生荧光等特征，可以针对种类不同的多个生物相关物质同时进行检测。关于该使用荧光的测定装置将在下文中详细描述。这样一来，在本发明中不仅可以定性地对目标生物相关物质进行检测，还可以同时进行定量。2.生物相关物质在本发明中“生物相关物质”是指试料中所含有的作为定量或检测对象的物质，即是指微生物(细菌)、病毒、寄生物、细胞、核酸、多糖、蛋白质(肽、激素、受体、酶)、抗原、抗体、毒素、病原体、低分子等所有生物物质。微生物包括真菌及真细菌及古细菌。作为真菌，可以举出例如酵母属 (Saccharomyces)、曲霉属(Aspergillus)、假丝酵母属(Candida)等。作为真细菌，可以举出例如属于分枝杆菌属(Mycobacterium)、埃希氏菌属(Escherichia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、利斯特氏菌属(Listeria)、弧菌属(Vibrio)、沙门氏菌属(Salmonella)、 假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、枝原体属(Mycoplasma) > 立克次氏体属(Rickettsia)、衣原体属(Chlamydia)等的微生物。作为古细菌，可以举出例如热原体属(Thermoplasma)、盐杆菌属(Halobacterium)、甲烷杆菌属 (Methanobacterium)等。胃胃以歹[J·酉良胃―(Saccharomyces cerevlsiae) > 构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、白假丝酵母(Candida albicans)、结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、胞内分枝杆菌 (Mycobacterium intracellulare) > ifi ^feIf lif (Mycobacterium kansasii) 杆菌(Escherichia coli)、赌状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthrasis)、单核细胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemo 1 yticus)、霍舌匕弧菌(Vibrio cholerae)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、月市炎枝原体(Mycoplasma pneumoniae)、普氏立克次氏体(Rickettsia prowazekii)、砂目艮衣原 {φ (Chlamydia trachomatis)等。作为病毒，可以列举例如腺病毒科(Adenoviridae)、噬菌体科 (bacteriophage)、反转录病毒科(Retroviridae)等。具体来说，可以列举腺病毒 (Adenovirus)、T7样病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、诺罗病毒 (Norovirus)、人轮状病毒、流感病毒等。此外，细胞包括动物细胞、植物细胞、昆虫细胞中的任意细胞。
作为核酸，可以列举DNA、RNA、人工核酸等。作为多糖，可以列举淀粉、糖原、壳多糖、角叉藻聚糖等。作为蛋白质，可以列举抗原、抗体、酶、色素蛋白质、肽、多肽、激素、受体、变应原寸。作为低分子，可以列举核苷三磷酸或脱氧核苷三磷酸等核苷酸、葡萄糖或半乳糖等糖、谷氨酸或赖氨酸等氨基酸、荧光素或溴化乙锭等色素、肾上腺素或肽激素或类固醇等激素。但是，上述生物相关物质为示例，并不限定于这些物质。3.测定管(1)如上所述，本发明的生物相关物质测定用管在管内具有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒、固定有一定量的所述生物相关物质的第2微粒、以及阴性对照用的第3微粒，由此，可以同时并且一贯地进行目标生物相关物质的测定和对该测定值的校正，使得简单地进行更为准确的定量成为可能。作为关于这样的本发明的生物相关物质测定用管的第3实施方式，如图5所示的进一步设置具有遮光性的珠的生物相关物质测定用管。就生物相关物质测定用管13而言，在其内腔具有用于对检测样品中所含有的例如蛋白质等作为目标的生物相关物质进行检测并定量的目标物质捕捉珠(第1微粒)14、 阴性对照珠(第3微粒)15、校正珠(第2微粒)16、遮光珠17，在遮光珠17之间不透光。 由于在目标物质捕捉珠14、阴性对照珠15、校正珠16的彼此之间具备具有遮光性的遮光珠 17，可以使得自身发光的珠的测定/定量，不受旁边设置的珠的发光的干涉，高效准确地进行。图5所示的生物相关物质测定用管13是具有上述4种珠的管的一个实施方式，其形成中空圆筒状，具有朝向一侧端部收缩变细形成的开口 18a，另一侧的端部上还可以具有能够自由组装在安装部12的组装部18b。此时，在安装部12上具有与通过泵控制部控制驱动的泵相连通的喷嘴(图示省略)，将生物相关物质测定用管13安装在安装部12上从而使得该喷嘴与内腔连通，由此可以向管内吸入液体，并将吸入的液体排出到管外。4.定量系统(1)接下来，针对具有上述说明的本发明的生物相关物质测定用管13的定量系统(使用化学发光强度校正型测定用管的定量系统)进行说明。本发明的定量系统的特征在于， 除具有上述的生物相关物质测定管13之外，还具有对从该管13内的各珠(微粒)发出的信号进行检测的检测部，参照预先制成的校正曲线，对所述经检测的信号的数据进行校正的校正部，以及基于该经校正的数据对生物相关物质进行定量的演算部。下面，针对其一个实施方式进行说明。本发明的定量系统，例如可以自动地实施对检测样品中含有的作为目标的生物相关物质的定量。具有上述定量管的定量系统的概略功能框图如图6所示。定量系统30具有中央控制部32、端头位置控制部34、端头安装控制部36、温度控制部40、泵送控制部42、RAM46、R0M48、显示面板50、操作界面52、信号处理电路54、发光强度演算部56、校正定量演算部58、计时部(图示省略)等，以及具备可自由地安装与拆卸用于对目标生物相关物质进行检测定量的上述生物相关物质测定用管2。
端头位置控制部34具有相互垂直的XYZ轴，通过步进电机、伺服电机来控制喷嘴的位置。X轴及Y轴与孔板大致平行且相互垂直，Z轴与孔板大致垂直。在移动喷嘴时，可以按下述两个阶段移动喷嘴例如在与孔板大致平行的这些X轴上及Y轴上移动，以及在与孔板大致垂直的Z轴上移动。R0M48中容纳有各种控制程序。与使用者通过操作界面52选择的工作模式相对应，来自R0M48的控制程序在RAM46中开展，中央控制部32基于该RAM46所展开的控制程序，对定量系统30的各部分进行控制。显示面板50显示出对使用者进行提示所必须的项目。例如、样品(检测样品)的前处理时的泵送次数、泵送时流速的缓急、吸入量及排出量、生物相关物质测定用管2的移动速度的缓急等，可以显示在显示面板50上，使用者可通过该显示来确认。在希望改变各种设定内容时，可以通过操作界面52的操作而改变。图中未示出的计时部，针对由R0M48读出的程序来计时。例如，在进行温育时或进行泵送时计时，由此可准确地进行各工序。温度控制部40具有加热器60、热传感器62等，用来对收纳在生物相关物质测定用管中的液体的温度进行管理。加热器62利用来自温度控制部40的供给电力发热，热传感器62根据收纳在生物相关物质测定用管2内的液体的温度，向温度控制部40输送温度信号。温度控制部40基于来自热传感器62的温度信号，对温度进行检测并调节向加热器60 的电力供给。端头安装控制部36，进行生物相关物质测定用管13向安装部12的安装、以及生物相关物质测定用管13从安装部12的拆卸。端头安装控制部36设置在与排列着收纳有检测样品的孔的孔板相距一定程度的地方，从而在更换生物相关物质测定用管2时，一旦从生物相关物质测定用管13飞溅出液体，则可防止产生污染。端头安装控制部36例如具有 把持生物相关物质测定用管2的把持部，另准备新的生物相关物质测定用管13的端头准备部。把持部把持生物相关物质测定用管13，同时如果喷嘴沿Z轴升高则使体关联物质测定用管13脱离喷嘴。然后，露出的喷嘴在X轴及Y轴上移动，并移动到新的生物相关物质测定用管13的上方。在端头准备部，新的生物相关物质测定用管13保持如下姿势安装部在上侧、前端部在下侧的状态，喷嘴沿Z轴下降从而使新的生物相关物质测定用管13的安装部安装在喷嘴上。泵送控制部42具有泵20及压力传感器70，通过喷嘴及安装在该喷嘴上的生物相关物质测定用管13对检测样品的吸入和排出进行控制。泵20例如具有例如形成为圆筒状的外罩和可自由移动地嵌合在该外罩上的活塞、以及驱动该活塞的电机，外罩内与喷嘴的开口相连通。活塞的移动，通过例如伺服电机来控制，伺服电机的驱动通过来自泵送控制部42的驱动控制信号来控制。当活塞工作时则通过喷嘴的开口可以吸入或排出液体。在喷嘴的开口内设置有用于检测压力的压力传感器70，压力传感器70向泵送控制部42输送压力信号。泵送控制部42，基于来自该压力传感器70的压力信号进行压力的监控。通过这样的结构，例如当生物相关物质测定用管13的前端部浸渍在孔内的样品中时，通过泵送控制部42检测的压力高于预先设定的阙值，与其相应地向伺服电机输送驱动控制信号。吸入及排出检测样品时，也通常从压力传感器70向泵送控制部42输送压力信号，由此，泵送控制部42可以高精度地控制伺服电机的驱动，监控检测样品的吸入压力、排出压力以防止其变得过低或过高，由此可以进行管理使得在预先确定的范围内实施吸入及排出。信号处理电路54对来自受光部76的受光信号进行处理，例如形成经二值化的受光数据。受光部76可以具有例如PMT (光电倍增管)或CCD图像传感器、CMOS图像传感器这样的图像传感器。图7示出了在受光部76中使用PMT时的构成的一个实例。如图7 所示，发光强度的测定机构79具有PMT80、POF(塑料光纤)82、环部件84等。来自各珠的光(信号)被导入到P0F82，接收来自P0F82的光的PMT80输出受光信号。PMT80、P0F82、 环部件84沿生物相关物质测定用管13的长度方向移动，PMT80响应各珠的发光强度而输出受光信号。信号处理电路54具有图中未示出的取样电路、放大器、A/D转换电路等，放大从受光部76输出的受光信号并使其数字化从而形成受光数据。形成的受光数据由信号处理电路54输送至发光强度演算部56。从测定用管13的例如开口侧到组装部侧读取发光强度时，从受光部76输送对应于来自阴性对照珠15、目标物质捕捉珠14、校正珠16发出的光而形成的受光数据。发光强度演算部56读取例如容纳在RAM46中的发光强度计算程序，按照该读取的程序，基于来自信号处理电路54的受光数据计算出发光强度。例如，由信号处理电路54 接收对应于排列在生物相关物质测定用管2中的阴性对照珠16、目标物质捕捉珠14、及校正珠16的光的受光数据，并计算出发光强度。将对应于来自校正珠16的光计算出的发光强度数据、对应于来自目标物质捕捉珠14的光计算出的发光强度数据输送给校正定量演算部58，将对应于来自阴性对照珠16的光的发光强度输送给数据中央控制部32并进行检测。在该检测中，判定例如对应于来自阴性对照珠16的光的发光强度是否小于对应于来自目标物质捕捉珠14的光计算出的发光强度等，当该判定结果被判定为异常时，在显示面板 50上显示警告。校正定量演算部58基于对应于来自目标物质捕捉珠14的光的发光强度数据、以及对应于来自校正珠16的光的发光强度数据，对作为目标的生物相关物质进行定量。在对生物相关物质进行定量时，首先，作为目标的生物相关物质的定量程序如图8所示，(1)计算出由预先固定在校正珠16上的生物相关物质预测的发光强度与实测值的偏差量△。(2) 将计算出的偏差量△反映到目标物质捕捉珠14的发光强度数据中。(3)利用校正曲线读取与再演算的发光强度数据相对应的浓度。通过实施以上的程序，可以更为准确地得到目标物质捕捉珠14捕获的生物相关物质的定量值。接下来，以基于抗体_抗原反应对抗原进行测定的实例对本发明的作用进行说明。如图9所示，形成为管状的透明生物相关物质测定用管13具有预先固定有针对抗原的抗体的目标物质捕捉珠14、校正珠15、以及阴性对照珠16。在目标物质捕捉珠14、阴性对照珠15、校正珠16之间设置遮光珠17，各珠15 17沿生物相关物质测定用管13的延伸方向设置成一列。如图9(a)所示，生物相关物质测定用管13的开口 18a浸渍到收纳有样品溶液的孔100中，如果将孔100内的样品溶液吸入到生物相关物质测定用管13内，固定在目标物质捕捉珠14上的抗体分别与对应的抗原结合并被目标物质捕捉珠14捕捉。通过重复特定次数的检测样品的吸引及排出，可以使抗原更为确实地与目标物质捕捉珠14的抗体结合。
如图9(b)所示，在泵送了检测样品之后，吸入其它孔104的清洗液对目标物质捕捉珠14进行清洗。通过清洗，除去由抗原_抗体反应而结合的抗原之外的检测样品成分。 如图9(c)所示，在对目标物质捕捉珠14清洗后，将生物相关物质测定用管13的开口 18a 浸渍在其它的孔106内收纳的酶标记抗体液中，将酶标记抗体液吸入到生物相关物质测定用管13内。如图9(d)所示，如果进行一定次数的酶标记抗体液的泵送，则泵送其它孔108 中收纳的清洗液，使多余的酶标记抗体液流出，从而对结合有抗原及酶标记抗体的目标物质捕捉珠14进行清洗。如图9(e)所示，在清洗后，控制生物相关物质测定用管13移动到收纳有发光反应用的基质液的孔110中开始检测工序。将生物相关物质测定用管13的开口 18a浸渍到收纳有发光反应用的基质液的孔 110中，将基质液吸入到生物相关物质测定用管13内。进行特定次数的基质液的泵送，使其充分反应。控制图中未示出的光照射部及受光部76移动使它们隔着各珠相对放置，来自光照射部的光束通过生物相关物质测定用管13的各珠，由受光部76接收。基于从受光部76 输出的受光信号，信号处理电路54基于来自受光部76的受光信号将受光数据输出到发光强度演算部56。发光强度演算部56基于接收的受光数据，计算出发光强度，并将发光强度数据输送给校正定量演算部58。校正定量演算部58基于校正珠15的发光强度数据，对目标物质捕捉珠14的发光强度进行校正。需要说明的是，在利用发光反应对目标生物相关物质进行定量时，优选使用遮光珠。如上所述，通过使用本发明的生物相关物质测定用管及定量系统，可以在一个系统内对目标生物相关物质进行定量，并且可以在相同环境下进行测定值的校正。此外，将生物相关物质测定用管和各孔之间的泵送条件统一，可以使搅拌条件、反应条件、清洗时的条件、测定条件等相同，可以进行偏差少的测定。此外，可以通过在1根生物相关物质测定用管中排列目标物质捕捉珠、校正珠、阴性对照珠，同时进行多个反应，从而能够提供方便性高的定量系统。需要说明的是，在上述的实施方式中，具有目标物质捕捉珠、校正珠、阴性对照珠各1个，也可以将各种珠设置为多个。通过将各种珠设置为多个并使用测定平均对目标物质等进行定量，期待通过使用测定平均来进行准确性高的定量。5.测定用管(2)本发明的生物相关物质测定用管可以同时实行校正曲线的制成和目标物质的定量。通过同时实行校正曲线的制成及目标生物相关物质的定量，可以使定量时的条件变为更为优选的条件。下面，对使用制成校正曲线的同时进行目标生物相关物质的定量的定量方法(ii)，对生物相关物质进行定量的第2实施方式进行说明。用于一起实行校正曲线的制成和目标生物相关物质的定量的测定用管的一个实例如图10所示。用于制成校正曲线的生物相关物质测定用管具有固定有不同量的生物相关物质的多个微粒，基于这些预先固定有不同量的生物相关物质的多个第2微粒的发光强度数据，制成校正曲线。如图10所示，生物相关物质测定用管160具有能够与蛋白质等目标物质结合的目标物质捕捉珠(第1微粒)163，预先固定有不同量的目标物质的第1、第2标准珠(第2微粒)165、167，以及空白珠(第3微粒)171，将这些目标物质捕捉珠163、第1、第2标准珠165、167、空白珠171排列成一列，中间隔着遮光珠169。可以通过该第1、第2标准珠165、167的发光强度及生物相关物质的固定量制成校正曲线。可以使用制成的校正曲线，基于目标物质捕捉珠163的发光强度，计算出目标生物相关物质的量。需要说明的是， 标准珠的个数不限于2个，也可以为3个以上。6.定量系统(2)针对具有上述生物相关物质测定用管160的定量系统进行概略说明。本发明的第 2定量系统的特征在于，其具有生物相关物质测定用管，对从该管内的微粒发出的信号进行检测的检测部，基于检测的信号制成校正曲线的校正曲线制成部，参照制成的校正曲线对生物相关物质进行定量的演算部。这样的定量系统的功能框图如图11所示。需要说明的是，对与图6的框图相同的构成部分赋予与图6中说明同样的相同符号，并省略对其的说明。定量系统175具有校正曲线制成部178、定量演算部179。发光强度演算部56将基于来自第1、第2标准珠165、167的受光信号所形成的第1、第2发光强度数据输送给校正曲线制成部178。校正曲线制成部178基于第1、第2发光强度数据，演算制成校正曲线，并容纳在RAM46中。定量演算部179基于目标物质捕捉珠163的发光强度，参照容纳在RAM46 中的校正曲线，计算出所对应的浓度值。这样一来，定量系统175根据第1标准珠165的发光强度及已知浓度绘制图表上的点X (参见图4)，同样地，根据第2标准珠167的发光强度及已知浓度，绘制图表上的点Y， 并制成校正曲线。然后，使用该制成的校正曲线，对目标生物相关物质的浓度E进行定量。 本发明的定量系统连贯地几乎同时地进行，可以进行高精度的定量。需要说明的是，在上述第1、第2实施方式中，设置球形状的遮光珠，但插入在各珠之间的遮光体并不限于遮光珠，只要具有遮光功能即可。例如，如图12所示，也可以在各珠 201之间安装遮光性的过滤器202。此外，通过使用多个珠组作为微粒，可以同时对多个生物相关物质进行校正并定量。例如，准备具有用于捕捉第1目标物质的目标物质捕捉珠、校正珠、及阴性对照珠的第1 珠组，以及具有用于捕捉第2目标物质的目标物质结合珠、校正珠、及阴性对照珠的第2珠组。对于这些第1、第2珠组，例如通过对珠进行染色等，确定在生物相关物质测定用管内的位置并进行测定，可以针对各个珠组进行测定数据的形成、校正、定量值的算出等。这样一来，通过识别与各种目标生物相关物质对应的唯一的珠的位置，可以针对各种珠进行测定、 定量。由此，可以针对多个生物相关物质的测定值，同时进行校正、定量，从而可以提供方便性高的生物相关物质测定用管、定量系统。本发明可以提供使用了测定用管的定量系统(例如图10、11)，所述测定用管具有生物相关物质捕捉用第1微粒和校正曲线制成用第2微粒，以及阴性对照用第3微粒， 除此之外，本发明还可以提供使用测定用管的测定系统，所述测定用管具有用于对由测定用管的批次差和制造编号的差异导致的测定误差、由定量系统的形式和类型的差异导致的误差、由定量时所使用的试剂的差异导致的误差等进行校正的作为第2微粒的微粒。通过使用这样的测定用管，可以期待在对目标生物相关物质进行定量的系统中，进一步提高定量精度。下面使用图13、14，对使用了这样的测定用管的系统的一个实例进行说明。需要说明的是，对于上述第1实施方式同样的部分赋予相同符号，并省略对其的详细说明。
具有阳性对照用微粒和校正用微粒作为第2微粒的测定用管的一个实例如图13 所示。测定用管260具有用于捕捉目标生物相关物质的第1珠(第1微粒)262、阳性对照用第2珠(第2微粒)263、阴性对照用第3珠(第3微粒)264、发光强度校正用第4珠(第 2微粒)265。在这些第1 第4珠262 265之间，优选在测定用管260的内腔中设置具有遮光性的珠269使其排列成行。作为使用这样的微粒的定量系统，例如，向安装在定量系统275(参考图14)上的测定用管260中导入检测样品，然后将标记液导入到测定用管260内。向导入有标记液的测定用管260内进一步导入基质液，从而引起化学发光。来自各珠262 265的发光在例如PMT等受光部76受光，受光部76输出受光信号。发光强度演算部56基于来自信号处理电路54的受光数据演算各珠262 265的发光强度。精度管理部280演算阳性对照用第2珠263和阴性对照用第3珠264之间的发光
强度差。此外，在R0M278中存储精度管理用的基准发光强度，精度管理部280将由发光强度演算部56算出的第4珠265的发光强度和存储在R0M278中的基准发光强度进行比较， 演算出例如它们的发光强度差。校正定量演算部282，例如基于上述第2珠263和第3珠264的发光强度差、及基准发光强度和第4珠265的发光强度差之间的差值，从存储在R0M278中的多个校正程序中选择读取适当的校正程序。校正定量演算部282基于读取出的校正程序，对第1珠262的发光强度进行校正， 就经校正的发光强度值参照配合于校正曲线，对目标生物相关物质进行定量。如上所述，通过使用阳性对照用第2珠、阴性对照用第3珠、校正用第4珠，即使在测定用管的批次编号和制造编号、定量系统的形式和类型、定量时所使用的试剂等不同的情况下，也可以节省系统校正所花费的工夫同时能够更为准确地对目标生物相关物质进行定量。这样一来，通过使用本发明的测定用管及定量系统，不仅可以定性地检测目标生物相关物质的有无，而且还可以对目标生物相关物质的量进行定量，可以提供方便性更高的定量系统。此外，在本发明中，可以节省系统的保养和维护所花费的工夫，能够充分地对在患者的附近实施检查并迅速进行诊断的即时检测的实行。7.多项生物相关物质的定量在上文中，显示了对单项生物相关物质进行定量的测定用管及定量系统，但也可以构成能够对多项生物相关物质进行定量的测定用管及定量系统。在下面，将对基于来自第1 第3微粒的化学发光对多项生物相关物质进行定量的测定用管及定量系统进行说明。作为针对多项生物相关物质进行定量的1种方法，在此， 使用第1测定体系和第2测定体系两个测定体系。在使用彼此独立的第1、第2两个测定体系对多项生物相关物质进行定量的情况下，需要用于将第1、第2测定体系关联的基准机构。作为该基准，例如，可以列举在第1、第2测定体系中共通使用的微粒。作为用作该基准的微粒，例如，可以通过使用结合有已知浓度的物质的基准微粒，并使测定用管具有该基准微粒，从而可以将第1、第2测定体系两个体系测定的发光强度关联。
具有基准微粒的测定用管的一个实例如图15所示。如图15(a)所示，用于第1测定体系的测定用管具有珠编号1、3、5、7所代表的基准珠(基准微粒)、以及用于测定目标生物相关物质的多个第1珠(第1微粒；珠编号11、13、15、17)。作为基准微粒，例如，可以举出例如生物素化蛋白包覆珠，在基准微粒上，可以预先结合有例如分级的不同浓度的已知物质。作为用于捕捉多项生物相关物质的第1珠，可以列举出例如抗变应原抗体包覆珠。 第1珠在图中示出有4个，由此可以针对4项生物相关物质进行定量。但是，第1珠的个数不限于4个，可以少于4个，也可以为5个以上。如图15(b)所示，用于第2测定体系的测定用管具有与在第1测定体系中所使用的基准珠相同的基准珠(珠编号1、3、5、7)，以及与通过第1测定体系进行定量的4种生物相关物质相关的阳性对照用第2珠(第2微粒；珠编号11、13、15、17)。在第2珠上结合有例如已知浓度的目标生物相关物质，由此第2珠起到作为与由第1珠捕捉的目标生物相关物质相关的阳性对照的作用。珠编号9可以为作为空白珠的第 3微粒，图中的偶数编号的珠表示具有遮光性的微粒。这样一来，第1测定体系和第2测定体系使用的测定用管，具有作为共通基准的珠，基于该作为基准的珠的发光强度，可以将第1测定体系的发光强度和第2测定体系的发光强度关联。由此，当基准珠的发光强度在第1、第2测定体系中相同的情况下，可以不用对发光强度值进行校正而算出定量值。在基于发光强度对各生物相关物质进行定量的情况下，与对单项生物相关物质进行定量时同样地，例如，参照配合从内存读取出的与各生物相关物质相对应的校正曲线，对各生物相关物质进行定量。可以使用如上所示的多个测定体系对多项生物相关物质进行定量。在上述实施方式中，作为定量目标的生物相关物质，列举了蛋白质、抗原，但生物相关物质不限于此，如上所述，可以为例如肽、激素、受体、核酸、多糖、酶、毒素、病原体、细胞、细菌、病毒、微生物、变应原、寄生物等。8.使用荧光的定量系统在本发明中，通过作为第1微粒的样品捕获珠捕获目标生物相关物质，将样品捕获珠浸渍在含有发光试剂的基质液中，使样品捕获珠被赋予的标记发光，测定该发光强度从而可以对目标生物相关物质进行定量，但除了利用该化学发光的定量系统之外，在本发明中，还可以对来自各微粒的荧光进行检测从而对目标生物相关物质进行定量。下面，针对本发明中利用荧光对目标生物相关物质进行定量的实施方式进行说明。在本发明中，使荧光色素直接或间接地与目标生物相关物质结合，通过向该荧光色素照射特定波长的激发光，可以使目标生物相关物质发出荧光。作为利用这样的荧光色素的生物相关物质的定量系统，例如，可以举出如下定量系统，该定量系统具有向以下微粒赋予荧光标记的标记化机构，所述微粒为能够与目标生物相关物质结合的第1微粒，结合有一定量的目标生物相关物质的第2微粒，以及作为阴性对照发挥作用的第3微粒；荧光强度检测机构，其向被赋予了荧光标记的第1 第3微粒照射激发光并对荧光强度进行检测；以及演算机构，将根据荧光强度检测机构检测的荧光强度结合参照由相对于荧光强度推算出生物相关物质量的校正曲线，对目标生物相关物质进行定量。在该定量系统中，在对与第1微粒结合的生物相关物质进行定量时，基于校正曲线对目标生物相关物质进行定量，但优选在生物相关物质的测定前预先制成校正曲线或在目标生物相关物质的测定时制成校正曲线。因此，用来基于荧光强度算出生物相关物质量的校正曲线，可以在对与第1微粒结合的生物相关物质的定量前预先制成，并储存在内存等存储元件中，也可以在对与第1 微粒结合的生物相关物质进行测定时，测定生物相关物质的结合量不同的多个第2微粒的荧光强度来制成校正曲线并使用。在与第1微粒结合的生物相关物质的定量前预先制成校正曲线并存储在存储元件中时，优选基于第2、第3微粒的荧光强度值，来对第1微粒的荧光强度进行校正，此外，当在对与第1微粒结合的生物相关物质进行测定时，使用生物相关物质的结合量不同的多个第2微粒的荧光强度制成校正曲线的情况下，优选通过参照第3微粒的荧光强度值制成校正曲线。作为阴性对照发挥作用的第3微粒，例如可以列举未结合目标生物相关物质的微粒(空白粒子)。通过使用这样的粒子，可以检测对目标生物相关物质进行测定时的背景噪音等，从而能够进行测定强度的校正、预先制成的校正曲线的校正、或制成校正曲线。在本系统中，向在测定用管内排列成一列的第1 第3微粒照射激发光并检测荧光强度。测定用管可以使用单个或同时使用多个。此外，本定量系统具有用于安装测定用管的喷嘴，在针对多个检测样品进行生物相关物质的定量时，优选针对每个检测样品更换测定用管来实施。下面，针对本发明的定量系统进行具体地说明。如图16、17所示，定量系统200具有形成为透明筒状的测定用管202，第1 第3 微粒204a 204c，向测定用管202内的第1 第3微粒204a 204c照射激发光，并对目标生物相关物质进行检测的检测装置206，基于来自检测装置206的检测信号进行生物相关物质的定量的后文所述的演算部等。第1 第3微粒204a 204c可以利用胶乳、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯、聚氨酯、 胶乳等有机材料；铁、Fe304、Y _Fe203、氢氧化铁、氧化铁水合物、氧化铁、混合氧化铁等无机磁性材料；高分子材料和铁氧体(ferrite)的复合材料等来形成。第1 第3微粒204a 204c的形状及大小，例如可以形成为直径0. 05mm 10. Omm的球状，优选形成为具有0. Imm 5. Omm直径的球状。此外、各微粒可以形成为直径 0. 01 μ M 300 μ M的球状，优选形成为具有0. 1 μ M 50 μ M直径的球状。为了分别识别第1 第3微粒204a 204c，可以利用公知的方法使微粒染色或着色。作为各微粒204a 204c的配制方法，一般来说，有在微粒的聚合中混合荧光染料，在形成的微粒表面共聚荧光色素，对微粒进行染色等方法。要求微粒的荧光着色料的光谱特性与附着在微粒上的荧光标记的荧光色素的光谱特性在一定程度上相似。作为微粒的着色方式，例如，可以在第1 第3微粒204a 204c上混合或表面结合层次不同的颜色体系(例如，彩色度层次不同的红色体系)的荧光着色料，或者，混合或表面结合层次不同的第1颜色体系和与该第1颜色体系不同的其它系统的层次不同的第2 颜色体系混合而成的混合颜色体系的荧光着色料。在第1 第3微粒的总和为数十个等多数的情况下，使用上述所示的混合颜色体系，可以通过使各微粒在明亮程度、色相、彩色度方面不同来识别各微粒。此外，第1 第3 微粒204a 204c的大小可以相同，也可以不同，就第1 第3微粒而言，不仅可以使它们荧光时的明亮程度、色相、彩色度不同，也可以使它们粒子大小不同，可以利用判别各微粒的粒子大小来更确实地识别各微粒。在第1微粒204a的表面上结合有能够与目标生物相关物质特异结合的物质。例如在以抗原作为目标生物相关物质的情况下，在第1微粒表面固定有与该抗原特异结合的抗体(第一抗体)。此外，固定在微粒表面的物质并不限于此，可以进行适当地变更。例如，通过在微粒表面固定抗原、受体、DNA探针、氨基酸等，可以捕捉抗体、配体、互补链DNA、酶等。在目标生物相关物质被捕捉在第1微粒上之后，使其与和目标生物相关物质特异结合的荧光标记相结合。例如如上所述，在固定作为目标生物相关物质的抗原的情况下，在作为目标生物相关物质的抗原与第1微粒结合之后，使能够与该抗原特异结合并且附带荧光色素的抗体 (第二抗体)与抗原结合。作为荧光标记用的荧光色素，有例如FITC(荧光素)、PE (注册商标)、PreCP (注册商标)、PE-Texas Red(商标)、PE_Cy5(商标)、PE_Cy5. 5、PE-Cy7、PreCP_Cy5· 5,APC-Cy7, AMCA (注册商标)、Cascade Blue (注册商标)、TRITC、Cy3、Texas Red (注册商标)、Cy5、 Cy5. 5、APC、Marina Blue (注册商标)、Cascade Yellow (商标)、罗丹明、青色素等。图16为示出使用荧光的生物相关物质的定量系统的一实施方式的图。如图16所示，生物相关物质的定量系统200具有分注喷嘴220，该分注喷嘴220上安装有生物相关物质测定用管202。测定用管202的前端开口，安装在分注喷嘴220的测定用管202可以通过该开口(图示省略)进行液体的吸入以及吐出。测定用管202大致形成管状，沿着形成在该管内的开口的延伸方向排列有第1 第3微粒204a 204c。需要说明的是，测定管202 的设置姿势可以适当设定，例如，管的延伸方向可以朝向垂直方向设置，也可以设置为使管的延伸方向为水平方向。检测装置206和测定用管202构成沿测定用管202的延伸方向、检测装置206可以相对于测定用管202进行相对移动。因此，可以固定测定用管202使检测装置206移动， 也可以固定检测装置206使测定用管202移动。为了接受向第1 第3的任何微粒照射激光而由该微粒发出的荧光，准确地确定检测装置206相对于测定用管202的位置。检测装置206具有产生激发光的激发光产生部，将激发光和荧光进行分光的第1 分光机构，将荧光按照每一波长进行分光的第2分光机构，接受来自分光机构的光的荧光检测器等。作为这样的检测器的具体例，可以列举例如，搭载有共聚焦光学系统从而可以测定微小物体的检测器，具备共聚焦光学系统的检测器，例如具有作为激发光产生部的振荡波长不同的多个激发光的激光光源230，作为荧光检测器的光电二极管及光电倍增管(以下称为PMT)等。产生激发光的光源输出激发荧光色素的足够的光强度和波长，作为具有这样功能的光源，除激光之外，可以使用例如汞灯、氙、称为LED的光源等。针对受光元件而言，不仅限于上述的光电二极管232、PMT234，可以使用适当的其它传感器类。
在排列在测定用管202内的微粒204a 204c产生荧光的情况下，首先检测装置 206确定测定对象的微粒204a 204c的位置，然后，向微粒204a 204c照射激发光。接受激发光的微粒204a 204c产生前方散射光、侧方散射光、及荧光。分别由前方散射光检测器232检测前方散射光、侧方散射光检测器233检测侧方散射光，以及第1 第3荧光检测器234检测荧光。作为前方散射光检测器232使用例如光电二极管，作为侧方散射光检测器233及第1 第3荧光检测器234a c使用例如PMT，在光电二极管、PMT中，通过光电转换形成模拟电信号。激光光源230照射的激发光的波长有例如488nm、532nm、633nm等多种，可以根据在对第1 第3微粒204a 204c进行荧光标记时所使用的荧光色素的特性确定所使用的光源。特别是，为了可以使用多种荧光色素，光源可以搭载能够输出多种激光的装置。在使用混合颜色体系作为第1 第3微粒的荧光着色料的情况下，利用第1 第 3荧光检测器234a c接受对应于各荧光色素的荧光色。此外，使用彩色度层次不同的单一颜色体系作为第1 第3微粒204a 204c的荧光着色料的情况下，相对应地，利用1个荧光检测器234a来受光。如上所示，在使用多种荧光色素的情况下，利用分光机构将荧光分离成各成分光， 该各成分光入射到分别与各成分光对应设置的荧光检测器234a c中。分光机构235具有二向色镜240、透镜、针孔、镜子242等，相互设置测定用管202和检测装置206的位置从而使得相对于测定用管202，检测装置206的位置是最优的。需要说明的是，作为分光用的光学部件在上文中列举了二向色镜240，但分光用的光学部件不限于此，也可以适当地变化为成本更低的偏振分光镜等。侧方散射光检测器233及第1 第3荧光检测器234a c将基于和受光强度相对应的电压水平的模拟受光信号输送到后述的放大器241中。来自侧方散射光检测器233 及第1 第3荧光检测器234a c的受光信号经放大器241放大后，通过A/D转换器243， 被数字化以形成荧光强度数据。形成的荧光强度数据被输送到荧光强度演算部245中。荧光照度演算部245基于来自A/D转换器243的各荧光强度数据计算出第1 第 3微粒204a 204c的荧光强度。识别部253基于来自前方散射光检测部232的检测信号对第1 第3微粒204a 204c进行识别。定量演算部247将荧光强度与校正曲线对照，对目标生物相关物质进行定量。在使用预先储存在RAM250中的校正曲线对生物相关物质进行定量时，基于第2、 第3微粒204b、204c的荧光强度，对第1微粒的荧光强度进行校正。此外，在制成校正曲线对生物相关物质进行定量的情况下，使用预先结合的生物相关物质的分级不同的量的多个第2微粒204b的荧光强度，在基于该第2、第3微粒204b、 204c的荧光强度对目标生物相关物质进行定量时，制成校正曲线。校正曲线形成后，定量演算部247利用荧光强度演算部245算出的第1微粒204a 的荧光强度与校正曲线对照，对目标生物相关物质的浓度进行定量。需要说明的是，为了防止微粒204a 204c的荧光光谱和第二抗体的荧光色素的荧光光谱重叠对抗原的定量产生影响，定量演算部247通过补偿(compensation)(荧光校正)，对各荧光光谱的相互作用部分进行校正，从而计算出抗原量。
接下来，对本发明的作用进行说明。需要说明的是，在下文中，示出以对抗原进行定量为目的的实施方式作为一个例子，但定量目的生物相关物质不仅限于抗原，也可以充分地对抗体、受体、核酸这样的生物相关物质进行定量。此外，在下文中，示出作为成为定量目标的多个生物相关物质的第1、第2两种抗原，但目标生物相关物质的种类数不限于两种，也可以为一种也可以为三种以上。安装在分注喷嘴220上的测定用管202的前端浸渍到收纳有检测样品的容器中， 将检测样品吸入到测定用管202内。在测定用管202内设置例如，固定在表面上的能够与第1抗原结合的第一抗体的物质，固定在表面上的能够与第2抗原结合的第一抗体的物质等作为第1微粒204a。在经过用于使第一抗体与抗原结合的充足的时间后，含有荧光标记用第二抗体的标记液被吸入到测定用管202内。能够与第1、第2抗原结合的第二抗体的荧光色素的荧光色、激发波长等不同，由此，可以进行区别并定量。由固定有第一抗体的微粒、抗原、及荧光标记用第二抗体形成三明治复合体后，检测装置206依次向相对于测定用管202位置确定的第1 第3微粒204a 204c照射激发光。接受了来自第1 第3微粒204a 204c的前方散射光的前方散射光检测器232 发出的检测信号被输送给识别部，识别部253基于来自前方散射光检测器232的检测信号识别各微粒204a C。接受来自第1 第3微粒204a 204c的荧光的荧光检测器234a c根据受光的荧光，相应地将受光信号输送给放大器241，且经过A/D转换等形成的受光强度数据被输入到荧光强度演算部245中。荧光强度演算部245基于与第1微粒204a结合的第二抗体的荧光色素的荧光强度数据，计算出荧光强度。在将预先制成的校正曲线存储在RAM250中的情况下，基于第2、第3微粒204b、 204c的荧光强度，对第1微粒204a的荧光强度进行校正并对生物相关物质进行定量。此外，在对目标生物相关物质进行定量时，使用预先结合有不同级别量的生物相关物质的多个第2微粒204b的荧光强度制成校正曲线时，基于第2、第3微粒204b、204c的荧光强度制成校正曲线，将第1微粒204a的荧光强度参考结合于校正曲线，对目标生物相关物质进行定量。如上所示，在本发明的定量系统200中，由于生物相关物质测定用管202具有能够与目标生物相关物质结合的第1微粒204a，同时还具有预先结合有一定量的目标物质的第 2微粒204b，以及阴性对照用第3微粒204c，因此可以一起实施关于多个生物相关物质的校正曲线的校正或校正曲线的制成，以及对这些生物相关物质的定量，可以提供一种对多个生物相关物质定量精度得到提高且方便性高的定量系统。此外，与具有同样功能的流式细胞仪(流式微球分析技术(Cytometric Bead Assay))进行比较，由于不需要形成使每个粒子移动且稳定不混乱的层流，因此可以期待装置构成的简单化。此外，由于生物相关物质测定用管202是可以自由拆卸地安装在分注喷嘴220上， 因此可以针对每个检测样品交换测定用管202。由此，不需要进行用于流动输送微粒的鞘流液(sheath flow)的流路和送液机构的维护，可以提供方便性更高的定量系统。此外，由于校正曲线的校正或制成，可以与多项生物相关物质的定量同时一起进行，因此可以提高实验精度同时提高方便性。此外，在上述的第2实施方式中，向第1 第3微粒204a 204c照射光，并对前方散射光及侧方散射光进行检测从而对目标生物相关物质进行定量，但定量所涉及的方法不限于这样的方法，也可以使用适当的其它方法。在使用该荧光标记的生物相关物质的定量中，只要可以观测与生物相关物质结合的荧光标记的荧光现象即可，对于能够观测荧光现象的光学系统、接收来自光学系统的被照射物体(被写体)光的受光部、基于来自受光部的电信号演算荧光强度的电子电路等演算部等都可以适当地变更。例如，在上述的实施方式中，列举了利用前方/侧方散射光的光学系统，光学系统也可以主要利用反射光。此外， 受光部可以不是PMT，可以使用高灵敏度CCD传感器，可以根据具体的设计目的，适当地改变本系统的构成。此外，在上述的荧光测定法中，列举了保持有第1 第3微粒204a 204c的测定用管202，也可以使用如下毛细管型的测定用管测定第1 第3微粒的荧光，该毛细管型的测定用管具有可以吸入各微粒使其排列成一列的内腔。作为这样的测定用管，例如可以列举针对使用粒径为数ym 数十μ m的微粒， 而具有可以流过一个微粒的孔径为数Pm 数十μm的细长型内腔的测定用管。作为形成测定用管的材料，可以列举例如，石英玻璃等玻璃材料、塑料等高分子材料。从安装在喷嘴上的测定用管的前端吸入到测定用管的内腔中的第1 第3微粒保持排列成一列，向该经排列的第1 第3微粒照射激发光进行荧光测定。利用这样的实施方式的测定体系统，可以实现与使用预先保持有第1 第3微粒的测定用管的利用第1 第3微粒的情况同等的功能，从而能够对目标生物相关物质进行定量。需要说明的是，在上述中，将第1 第3微粒保持在测定用管的内腔内并照射激发光，也可以为了降低荧光强度数据的不均，边吸入第1 第3微粒边向各微粒照射激发光， 或者边吐出已经吸入的第1 第3微粒边向各微粒照射激发光。通过这样的实施方式来测定各微粒的荧光强度，可以期待降低荧光强度数据的不均。实施例接下来，将示出实施例，所述实施例是关于使用第1实施方式列举的化学发光对单项生物相关物质进行定量的程序的实施例。[实施例1]基于上述的定量系统30，进行了以下的程序。(a)向测定用管中导入检测样品的工序，该测定用管具有光透过性，并且在其内腔中导入有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒，固定有一定量的所述生物相关物质的第2微粒，以及阴性对照用第3微粒，(b)向导入有检测样品的测定用管内导入标记液以赋予各微粒标记的工序，(C)将使标记发光的基质液导入到测定用管内从而使第1 第3微粒发光的工序， 以及(d)基于第1 第3微粒的发光强度对生物相关物质进行定量的工序。
基于以上的工序，例如对蛋清溶菌酶(抗原)进行了定量。下面将进行详述。在对作为生物相关物质的蛋清溶菌酶(HEL)进行定量时，作为针对测定对象抗原的抗体，使用例如抗蛋清溶菌酶单克隆抗体1 (以下，称为HELmABl)，作为酶标记，使用例如抗蛋清溶菌酶单克隆抗体2 (抗HELmAB2)。为了使用如上所示的定量系统30对蛋清溶菌酶进行定量，配制了保持在测定用管13的内腔中的第1 第3微粒14 16 (参见图5)。第1 第3微粒14 16的制备按照如下方法进行。需要说明的是，以下所示的说明为一个实例，本发明不受以下内容的限定。1.第1 第3微粒的制备(1)珠清洗将定量所需要的粗研磨氮化珠移入1. 5ml容量的试验管中，并利用丙酮清洗后， 利用含有Iml的0. 05%叠氮化钠磷酸缓冲液清洗3次。(2)珠的固定化蛋清溶菌酶测定用珠(第1微粒)向收纳有原料珠的试验管中加入利用含有 0. 05%叠氮化钠的缓冲液稀释为10 μ g/ml的Iml的抗HEL ClmAB溶液，于4°C静置一晚(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。内部标准用珠1 (发光强度校正用的第2微粒)向收纳有原料珠的试验管中添加利用含有0. 05%叠氮化钠的磷酸缓冲液制备成0. 6ng/ml的纯化HEL蛋白质(抗原)溶液， 于4°C静置过夜(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。内部标准用珠2(发光强度校正用的第2微粒)向收纳有原料珠的试验管中添力口，利用含有0. 05%叠氮化钠的磷酸缓冲液制备成10. Ong/ml的纯化HEL蛋白质(抗原) 溶液，于4°C静置过夜(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。检测样品空白用珠(阴性对照用第3微粒)向收纳有原料珠的试验管中添加含有0.05%叠氮化钠的磷酸缓冲液lml，于4°C静置一晚(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。(3)利用含有0. 05%叠氮化钠的磷酸缓冲液，对固定化的3种类珠进行多次清洗后，利用含有BSA(牛血清白蛋白)的磷酸缓冲液200μ 1，在室温下静置进行封闭。接下来，向测定用管中导入制备的各珠，并使其保持在测定用管的内腔中。此时， 在各珠之间插入具有遮光性的珠。利用清洗液(含有0.05%TWeen 20的缓冲液)清洗上述3种珠2次后，按照内部标准用珠、遮光珠、蛋清溶菌酶测定用珠、遮光珠、检测样品空白用珠、遮光珠的顺序将上述珠插入到测定用管中并固定在管内腔中。将制作的测定用管安装在定量系统所具有的喷嘴上，在喷嘴上安装测定用管后， 按照如下所示，向测定用管内导入了检测样品。这是按照例如定量系统的自动控制程序进行的。向导入有检测样品的测定用管内导入标记液。例如，按照定量系统的自动控制程序，使其与稀释为ι μ g/ml的生物素化-抗HEL C2mAB反应1小时，并利用清洗液进行清洗， 然后与稀释了 5000倍的链霉抗生物素蛋白-HRP反应30分钟。将标记液导入测定用管内后，将化学发光用基质(例如Super Signal West Femto Maximum Sensitivity Substrate (Thermo scientific 制造))导入测定用管内，使各珠化学发光并对发光强度进行测定，从而对目标物质的蛋清溶菌酶进行了定量。需要说明的是，上述准备了两种第2微粒，可以准备一种，也可以准备三种以上。[实施例2]基于上述的定量系统175，进行了以下的程序。(a)向测定用管中导入检测样品的工序，该测定用管具有光透过性，并且在其内腔中导入有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒，固定有不同量的所述生物相关物质的多个第2微粒，以及阴性对照用第3微粒，(b)向导入有检测样品的测定用管内导入标记液以赋予各微粒标识的工序，(C)将使标识发光的基质液导入到测定用管内从而使第1 第3微粒发光的工序， 以及(d)基于第1 第3微粒的发光强度对生物相关物质进行定量的工序。需要说明的是，就在管内第1 第3微粒的排列方式而言，例如，可以在一个管内排列第1 第3微粒，也可以分成多个管并排列。为了提高定量精度，期望同时或连续地进行第1 第3微粒的发光测定。基于这样的工序，例如对蛋清溶菌酶(抗原)进行了定量。下面将对其进行详细说明。对作为测定对象抗原的蛋清溶菌酶(以下，称为HEL)进行定量时，针对测定对象抗原的抗体使用抗蛋清溶菌酶单克隆抗体1(以下，称为HELmABl)，使用了抗HELmAB2作为酶标记。需要说明的是，在此示出详细说明的仅为一个实例，并不对本发明的内容进行限定。首先，如下所示，制备了用于制成蛋清溶菌酶定量时所使用的校正曲线的第2微粒。(1)例如，在1. 5ml容量的试验管中收纳了粗研磨氮化珠50个，利用丙酮清洗，然后利用Iml的含有0. 05%叠氮化钠磷酸缓冲液清洗3次。(2)接下来，向小型试验管中分别注入各100 μ 1的多个纯化HEL蛋白质(抗原) 溶液，该多个纯化HEL蛋白质(抗原)溶液是利用含有0.05%叠氮化钠的磷酸缓冲液，从 20ng/ml起成倍稀释所制备的浓度不同的多个纯化HEL蛋白质(抗原)溶液，向收纳有各浓度的含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管中适当混合利用丙酮清洗过的粗研磨氮化珠，边保持在4°C边静置过夜(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。(3)静置过夜后，利用含有0. 05%叠氮化钠的磷酸缓冲液进行清洗，进一步利用含有BSA(牛血清白蛋白)的磷酸缓冲液200 μ 1进行封闭。(4)利用清洗液(含有0.05%TWeen 20的磷酸缓冲液)清洗2次后，将珠导入到测定用管中。需要说明的是，在各珠之间插入具有遮光性的珠。接下来，制作了目标生物相关物质捕捉用的第1微粒、阳性对照用的第2微粒、阴性对照用第3微粒。(1)珠清洗将定量所需要的粗研磨氮化珠移入1. 5ml容量的试验管中，并利用丙酮清洗后， 利用Iml的含有0. 05%叠氮化钠磷酸缓冲液清洗多次。(2)珠固定化蛋清溶菌酶测定用珠(第1微粒)向收纳有原料珠的试验管中添加利用含有 0. 05%叠氮化钠的缓冲液稀释制备为2. 5ng/ml的纯化HEL蛋白质(抗原)溶液，保持在4°C 静置过夜(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠以及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。阳性对照用珠(第2微粒)向收纳有原料珠的试验管中添加利用含有0. 05%叠氮化钠的磷酸缓冲液制备而成的2. 5ng/ml的纯化HEL蛋白质(抗原)溶液，于4°C静置过夜(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠以及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。阴性对照用空白珠(第3微粒)向收纳有原料珠的试验管中添加含有0.05%叠氮化钠的磷酸缓冲液lml，于4°C静置过夜(固定化)。此外，根据需要，利用旋涡混合器对收纳有珠以及含有叠氮化钠的磷酸缓冲液的试验管进行了搅拌。(3)利用含有0. 05%叠氮化钠的磷酸缓冲液对各珠进行2次清洗后，利用含有1 % BSA(牛血清白蛋白)的磷酸缓冲液200μ 1，在室温下静置进行封闭。将制备的蛋清溶菌酶测定用珠、阳性对照用珠、空白珠导入到已经导入有校正曲线制作用珠的测定用管内。此时，在各珠之间，适当地插入具有遮光性的珠。例如，利用清洗液(含有0.05%Tween 20的磷酸缓冲液)清洗上述珠例如2次，然后，按照阳性对照用珠、遮光珠、蛋清溶菌酶测定用珠、遮光珠、空白珠、遮光珠的顺序将上述珠插入到测定用管中，并将该测定用管安装在定量系统的喷嘴上。将测定用管安装在定量系统上，然后，向测定用管中导入检测样品。这是例如，向测定用管中充满稀释检测样品溶液或非稀释检测样品溶液，按照定量系统的自动控制程序进行的。向导入有检测样品的测定用管内导入标记液。例如，按照定量系统的自动控制程序，使其与利用清洗液稀释为ι μ g/ml的生物素化-抗HEL C2mAB反应1小时，并利用清洗液进行清洗，然后与稀释了 5000倍的链霉抗生物素蛋白-HRP(辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase))反30 分I中。向导入有标记液的测定用管中导入化学发光用基质液(例如Super Signal West Femto Maximum Sensitivity Substrate (Thermo scientific 制造))，使各珠化学发光并测定了发光强度。[实施例3]接下来，对基于来自第1 第3微粒的化学发光对多项生物相关物质进行定量的测定用管及定量系统的实施例进行说明。作为针对多项生物相关物质进行定量的一种方法，在此，使用第1测定体系和第2 测定体系两个测定体系，选择了抗原作为目标生物相关物质。[概要]
如图15(a)所示，第1测定体系中使用的测定用管具有珠编号1、3、5、7所代表的基准珠(基准微粒)，以及用于测定未知的生物相关物质的多个第1珠(珠编号11、13、15、 17)。另外，图15(b)所示，第2测定体系中使用的测定用管具有珠编号1、3、5、7所代表的基准珠(基准微粒)，以及与利用第1测定体系定量的四项生物相关物质相关的阳性对照用第2珠(珠编号11、13、15、17)。[第1测定体系]1.第1珠(第1微粒)的制作在目标生物相关物质为例如多个抗原的情况下，分别将与各抗原特异反应的多个抗体分别固定在各个氮化硅珠上。2.第2珠(第2微粒)的制作(1)珠的清洗例如，对作为第2珠的基体的氮化硅珠(例如TSUBAKI NAKASHIMA制造)进行了清洗。该清洗通过例如在PBS中进行10分钟超声波清洗来实施。(2)珠的固定将蛋白质固定在经清洗的氮化硅珠上。作为蛋白质，使用例如作为半抗原的4-羟基-3-硝基苯基乙酰基(以下，称为NP)与人血清白蛋白(Human Serum Albumin)(以后， 称为HSA)结合的物质。将该NP-HSA固定在氮化硅珠上。将NP-HSA溶液配制成逐级不同的多个浓度，例如使用10、5、2. 5,1. 2,0. 6,0. 3、 0. 1 μ g/ml这七种。需要说明的是，作为阴性对照用的第3珠(第3微粒)，只要是不与目标生物相关物质反应的物质即可，例如使用经处理后不能结合目标生物相关物质的空白珠。3.向测定用管中填充第1 第3珠隔着遮光用碳化硅珠，排列第1 第3珠。例如，在测定用管的内腔中，按照如下顺序排列浸渍在NP-HSA浓度为IOyg/ ml的溶液中制备的第2珠、同样地浸渍在5 μ g/ml溶液中制备的第2珠、同样地浸渍在 2. 5 μ g/ml溶液中制备的第2珠、同样地浸渍在1. 2 μ g/ml溶液中制备的第2珠、同样地浸渍在0. 6 μ g/ml溶液中制备的第2珠、同样地浸渍在0. 3 μ g/ml溶液中制备的第2珠、同样地浸渍在0. 1 μ g/ml溶液中制备的第2珠、空白珠、以及第1珠，并在各珠之间插入遮光珠将其固定。4.第1测定与多项生物相关物质的定量同时，制作了用于对各生物相关物质进行定量的校正曲线，并存储在定量系统的内存中。将具有各珠的测定用管安装在定量系统的喷嘴上，然后，如下所示，向测定管内导入检测样品、标识抗体、基质液。首先，进行浓度未知检测样品的反应，接下来，进行与标记液(生物素标识抗NP抗体及生物素标识抗检测样品抗体的混合液)的反应，最后，将基质液吸入到测定用管内使其发光。来自各珠的化学发光通过光纤等传输光学系统并在检测器中得到检测，基于来自检测器的输出信号计算出发光强度。[第2测定体系]
第1测定结束后，将导入有固定了已知量的上述多个抗原的多个第2珠的测定用管安装在定量系统上，并测定了各珠的发光强度。此时，对在上述的第1测定体系中使用的测定用管实施了特定处理并使用。为了再次使用在第1测定体系中使用的测定用管，将酸性溶液吸入到测定用管中，使各珠与酸性溶液接触从而将在第1测定时捕获在珠上的抗原、标识抗体等除去。测定用管再生后，使得浓度已知的生物相关物质(纯化抗原对照)被捕获在对各生物相关物质进行定量的珠上，为了对该珠起到正常定量的功能进行确认，实施了第2测定。通过将一次检测样品中的生物相关物质的测定中使用的多个氮化硅珠再生，并与浓度已知的抗原反应，使其具有阳性对照的作用。这样一来，对第1测定体系中使用的测定用管实施特定的处理，在第2测定体系中再次使用。基于基准珠的发光强度对第1测定体系和第2测定体系之间的相关性进行了确认，同时，通过阳性对照用第2珠及阴性对照用第3珠的发光强度差，判定了测定体系是适合的。将在第1、第2测定体系检测的各生物相关物质的发光强度，对照结合从内存中读取的对应于各自物质的校正曲线，从而对各生物相关物质进行了定量。进行了如上所述的针对多项生物相关物质的定量。[实施例4][概要]在氮化硅珠上固定了浓度变化的4-羟基-3-硝基苯基乙酰基(NP)-人血清白蛋白(Human Serum Albumin) (HSA)，作为校正珠使用。目标物质捕捉珠使用固定了抗卵清蛋白(OVA)抗体的物质，可以检测作为抗原的OVA。[实验中使用的主要材料]氮化硅珠(TSUBAKI NAKASHIMA制造)用作校正珠及OVA检测用珠碳化硅珠(TSUBAKI NAKASHIMA制造)作为遮光珠使用NP-HSAOVA生物素标记抗NP抗体生物素标记抗OVA抗体(检测用)、抗OVA抗体(珠固定用)Avidin-HRPLumi-Light (Roche公司制造发光底物)[第2珠的制作](1)氮化硅珠的清洗在PBS (缓冲液)中进行了 10分钟超声波清洗。(2)蛋白质(NP-HSA)的固定分别制备了 200 μ 1 的 10、5、2· 5、1. 2、0· 6、0· 3、 0. 1 μ g/ml 浓度的 NP6-HSA。(3)向管中加入200 μ 1的NP-HSA，并分别加入10个经清洗过的珠，并振荡过夜进
行了固定。(4)利用PBS清洗2次，然后，利用加入了 BSA的PBS边振荡2小时，边进行了封闭。[OVA捕捉用第1珠的制作]
(1)向制备为1. 64mg/ml浓度的抗OVA抗体液200 μ 1中加入10个经清洗过的珠，
振荡一晚进行了固定。(2)利用PBS清洗2次，然后，利用加入了 1 % BSA的PBS边振荡2小时，边进行了封闭。除去缓冲液后，加入OVAl μ g/ml溶液200 μ 1，进行反应。[填充到测定用管中]隔着遮光用碳化硅珠排列作为第1微粒的OVA捕捉用第1珠、以及七个第2珠。如图18所示，在测定用管180的内腔中，按照如下顺序排列填充浸渍在NP-HSA 浓度 ο μ g/ml溶液中制备的第2珠181、同样地浸渍在5 μ g/ml溶液中制备的第2珠182、 同样地浸渍在2. 5 μ g/ml溶液中制备的第2珠183、同样地浸渍在1. 2 μ g/ml溶液中制备的第2珠184、同样地浸渍在0. 6 μ g/ml溶液中制备的第2珠185、同样地浸渍在0. 3 μ g/ ml溶液中制备的第2珠186、同样地浸渍在0. 1 μ g/ml溶液中制备的第2珠187、OVA捕捉用第1珠190、空白珠195，并在各珠之间插入2个遮光珠197。[使用自动化装置的反应]分别准备100 μ 1的生物素标识抗NP抗体(5 μ g/ml)、生物素标识抗OVA抗体(0.5μ g/ml)，加入到试剂药筒中，并安装在GE Healthcare公司制造的色谱装置 (Purelumn(注册商标))上，自动进行管的清洗工序、生物素化抗体、链霉抗生物素蛋白-HRP的反应工序。[通过专用检测器进行测定]向自动反应后的管中吸入发光基质(Lumi-Light)，利用专用的检测器(Precision System Science公司制造的BISTnner (注册商标))进行了测定。[测定结果]如图19所示，得到从左开始具有NP-HAS浓度10 μ g/ml、5 μ g/ml、2. 5 μ g/ml、 1. 2 μ g/ml、0. 6 μ g/ml、0. 3 μ g/ml、0. 1 μ g/ml 的 NP-HSA 固定珠的发光信号、及第 1 珠的发
光信号。[结论]基于预先取得的OVA定量用图表(参见图20)，可以判定OVA捕捉用的第1珠的荧光强度相当于OVA浓度为1 μ g/ml时的发光信号。符号说明2生物相关物质测定用管(生物相关物质测定用管)3第1微粒4第2微粒5第3微粒10端头管端头本体12 安装部13生物相关物质测定管14目标物质捕捉珠(第1微粒)15阴性对照珠(第3微粒)16校正珠(第2微粒)
17 遮光珠30 定量系统32 中央控制部34端头位置控制部36 受光部46 RAM48 ROM54信号处理电路56发光强度演算部58校正定量演算部160生物相关物质测定管163目标物质捕捉珠165第1标准珠167第2标准珠175定量系统178校正曲线制成部179定量演算部200定量系统202生物相关物质测定用管204 微粒206检测装置220分注喷嘴228中央演算部230激光光源234荧光检测器235分光机构240 二向色镜247定量演算部
权利要求
1.一种生物相关物质测定用管，其中，在该管内排列有固定有能够与测定目标生物相关物质结合的物质的第1微粒； 固定有一定量的所述生物相关物质的第2微粒；和阴性对照用第3微粒。
2.根据权利要求1所述的管，其中，所述第2微粒是用来对生物相关物质的测定数据进行校正的微粒。
3.根据权利要求1所述的管，其中，所述第2微粒是固定有不同量的生物相关物质的多个微粒。
4.根据权利要求3所述的管，其中，所述多个微粒是用来制作校正曲线的微粒。
5.根据权利要求1 3中任一项所述的管，其中，在所述第1 第3微粒之间，还可以具备具有遮光性的部件。
6.一种生物相关物质的定量系统，其具有 权利要求1 5中任一项所述的管；对从所述管内的微粒发出的信号进行检测的检测部；参照预先制成的校正曲线对所述检测出的信号数据进行校正的校正部；和基于所述校正的数据对生物相关物质进行定量的演算部。
7.—种生物相关物质的定量系统，其具有 权利要求1 5中任一项所述的管；对从所述管内的微粒发出的信号进行检测的检测部； 基于所述检测的信号制成校正曲线的校正曲线制成部；和参照所述制成的校正曲线对生物相关物质进行定量的演算部。
8.—种生物相关物质的测定方法，其中，使检测样品与权利要求1 5中任一项所述的管接触，从而对检测样品中的目标生物相关物质进行测定。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，测定同时进行对目标生物相关物质的定性检测及定量。
全文摘要
本发明目的在于通过更为简便的操作实现更为准确的生物相关物质的定量，此外，在于更为准确地对目标生物相关物质进行定量。本发明的生物相关物质测定用管2具有作为第1微粒的目标物质捕捉珠3，作为预先固定有一定量的生物相关物质的第2微粒的校正珠4，以及作为阴性对照用第3微粒的阴性对照珠5。安装部12具有与泵连通的喷嘴，向生物相关物质测定用管2内导入检测样品，该生物相关物质测定用管2安装在安装部12从而与该喷嘴连通。导入检测样品后，使与各微粒结合的生物相关物质标记化并发光。基于各微粒的发光，进行校正曲线的制成或对第1微粒发光强度的校正，从而对生物相关物质进行定量。
文档编号G01N21/64GK102460170SQ20108002711
公开日2012年5月16日 申请日期2010年4月20日 优先权日2009年4月20日
发明者田岛秀二 申请人:环球生物研究株式会社