专利名称：用于细胞衰老的筛查方法
技术领域：
本发明涉及筛查以鉴定对细胞的衰老具有作用的化合物的方法，更具体地说是涉及细胞的世代衰老、诊断与细胞的世代寿命中的变化相关的疾病的方法。
背景技术：
雷帕霉素复合物TORCl的标靶从酵母到人类是保守的，并在细胞的营养和胁迫状态的感受和信号转导因而在控制细胞生长H和细胞存活Ρ"之间的平衡中起到关键的作用。在出芽酵母中，TORCl促进在葡萄糖上的生长并下调呼吸12’13。TORCl含有磷脂酰肌醇激酶(PI3-K)相关激酶Torl或Tor2。与Fprl (Fk506敏感型脯氨酸旋转异构酶)形成复合物的大环内脂雷帕霉素14与Torl/2结合，导致细胞可能由于Tor激酶“5的底物特异性的变化而进入类似于营养受限15的状态。细胞的这种新状态与基因表达的模式中的变化关联，特别是与需要呼吸和胁迫耐性6’1(l’17a8的基因表达的模式中的变化有关。很多TORCl基因的表达依赖于转录共激活剂复合物的SAGA家族，所述转录共激活剂复合物包括 SAGA (Spt-Ada-Gcn5-乙酰基转移酶)19’2°、SLIK (SAGA 样)21 和 SALSA (SAGA 变体，缺失Sp^)22_M。SAGA、SLIK和SALSA含有赖氨酸乙酰基转移酶(KAT)Gcn521_23，其中以组蛋白H3(H3K14ac)上的赖氨酸作为底物，但是在它们的丰度、它们所调控的基因以及亚基组成上存在差异19’24。本发明人已经发现，H3K18乙酰基化对于控制细胞生长和寿命(longevity)之间的平衡是重要的。本发明人还鉴定了涉及到SAGASLIK和SALSA复合物的众多基因，所述基因受到破坏将导致世代寿命的提高。
发明内容
根据本发明的第一方面，提供了用于提高细胞的世代寿命的方法，所述方法包括破坏所述细胞中的SAGA、SLIK和/或SALSA复合物中的至少一个的功能。根据本发明的第二方面，提供了用于鉴定细胞的世代寿命(CLS)的潜在调节剂的方法，所述方法包括如下步骤i)使具有已知组蛋白3赖氨酸18 (HIlS)乙酰化状态的细胞与受检化合物接触；和ii)确定所述化合物对所述细胞中的H3K18的所述乙酰化状态是否具有作用；其中，所述细胞中的H3K18的乙酰化状态的变化表示所述化合物调节CLS。根据本发明的第三方面，提供了细胞的CLS的调节剂，所述调节剂由第二方面的所述方法进行鉴定。根据本发明的第四方面，提供了用于鉴定细胞的复制状态的方法，所述方法包括鉴定H3K18的乙酰化状态，其中存在H3K18的乙酰基修饰表示所述细胞是活性复制细胞，并且不存在H3K18的乙酰基修饰表示不再复制的细胞。根据本发明的第五方面，提供了用于鉴定细胞的CLS的变化的方法，所述方法包括鉴定所述细胞中的H3K18的乙酰化状态和将该状态与对照细胞的乙酰化状态进行比较，其中，当与所述对照细胞比较时失去H3K18AC表示CLS提高，并且当与所述对照细胞比较时获得H3K18Ac表示CLS降低。根据本发明的第六方面，提供了用于诊断与细胞的CLS中的变化关联的疾病的方法，所述方法包括鉴定事先从受治对象分离的细胞中的H3K18的乙酰化状态和将所述乙酰化状态与对照细胞的乙酰化状态进行比较。
具体实施例方式应当理解的是，在此描述的述及本发明的一个方面的任何优选的实施方式在合适的情况下可以等同适用于本发明的任意其他方面。根据本发明的第一方面，提供了用于提高细胞的世代寿命的方法，所述方法包括破坏所述细胞中的SAGA、SLIK和/或SALSA复合物中的至少一个的功能。在此使用的术语“世代寿命”是指静止期培养物中的细胞存活的时间。应当理解的是，SAGA、SLIK和/或SALSA复合物中的所述至少一个的功能可以直接或间接地进行破坏。这些复合物在控制细胞的乙酰化状态和CLS中发挥关键的作用，但是它们的水平不同，它们的水平取决于细胞的状态及其环境。在此使用的术语与所述复合物的相互作用直接和间接相关是指与所述复合物本身、与来自编码形成所述复合物的一部分的多肽的基因的基因产物、或与来自允许形成所述复合物的基因的基因产物的相互作用。优选的是，通过选自由以下基因组成的组的至少一个基因或至少一个基因的产物的破坏来实现所述破坏Spt3、Rtg2、Gcn5、W3p8、Spt7、SpW和/或Snfl或它们的同系物。在此使用的术语“同系物”是指来自不同生物体的同源基因，所述同源基因执行相同的功能并且一般显示出一定程度的序列同源性。本领域技术人员应当理解的是，来自酿酒酵母(S. cerevisiae)的上述基因在包括哺乳动物在内的生物体中具有同系物。例如，Spt3显示出与人类SUPT3H-203具有同源性；Gcn5显示出与人类KAT2B-001和KAT2A-001具有同源性；Spt7显示出与人类SUPT7H具有同源性，以及SNFl显示出与PRKAAl和PRKAA2具有同源性。应当理解的是，这些基因编码形成SAGA、SLIK和/或SALSA复合物的一部分或者以实现细胞中的组蛋白的乙酰化的方式与所述复合物相互作用的产物。优选的是，通过破坏SPT7 (SEQ ID NO :11)或 SPT7-217 (SEQ IDNO 19)来实现所述破坏。在本文中当述及基因或基因产物时使用的“破坏功能”或“功能的破坏”是指破坏基因的表达或者破坏编码多肽的活性。还应当理解的是，可以破坏转录起始至成熟蛋白生成之间任意阶段的基因表达。本领域技术人员应当理解的是，这包括通过控制染色质结构来控制基因表达的后生手段以及控制基因表达的转录、翻译和后翻译手段。应当理解的是，在此使用的破坏基因表达是指通过本领域已知的任何手段防止或抑制功能性多肽的生成，并且破坏编码多肽的活性是指破坏功能性多肽与其一个或多个结合配偶体的相互作用使得所述多肽不执行其功能。所述生成或功能可以部分或全部受阻。在一个实施方式中，优选基因产物的生成或功能完全受阻，即，没有活性基因产物。在一些情况中，基因产物的生成或功能可以被破坏使得仅保留野生型表达水平的约5%、约10%、约 20%、约 30%、约 50%、约 60%、约 70%、约 80%、约 90%或约 95%。在此使用的抑制功能性多肽的生成是指可以通过如下方式防止或抑制基因产物的生成(a)敲除所述基因；(b)通过例如使用iRNA或反义RNA使所述基因在后转录阶段沉默(基因沉默)；(c)通过例如后生技术使所述基因在转录阶段沉默；(d)通过导入至少一个点突变防止或改变基因产物的功能；(e)使基因产物在后翻译阶段失活。在一个优选的实施方式中，通过iRNA破坏基因或同系物的表达。优选的是，在启动子的控制下，使用编码iRNA的质粒/载体转化细胞。应当清楚的是，该启动子可以是组成型启动子和/或组织特异性启动子。在此使用的术语“ iRNA”是指RNA干扰(RNAi)。这是通过直接导入dsRNA诱导真核生物中的后转录基因沉默(PTGS)的方法(Fire A等，(1998))。在又一个优选实施方式中，在转录/DNA水平上破坏基因的表达。优选的是，所述破坏通过将至少一个核苷插入到基因中或者使基因至少缺失一个核苷来实现。在又一个实施方式中，基因的破坏通过导入至少一个点突变来实现。应当理解的是，在破坏多肽与其一个或多个结合配偶体的相互作用的情况中，这种破坏可以采用任何合适的方法进行，例如采用竞争抑制、非竞争性抑制、混合抑制或无竞争性抑制。本发明涵盖序列的用途，所述序列与在此限定的多肽的氨基酸序列或编码所述多肽的任意核苷酸序列具有一定程度的序列同一性或序列同源性(在此称为“同源序列，，)。此处的术语“同源”是指实体(entity)与主题氨基酸序列和主题核苷酸序列具有一定的同源性。此处的术语“同源性”可以等同于“同一性”。同源氨基酸序列和/或核苷酸序列应当提供和/或编码保留酶的功能活性和/或增强酶的活性的多肽。在本发明的上下文中，同源序列理解为包括与主题序列可以具有至少50%、60%、70^^75^^80^^85%或90%的同一性的氨基酸序列，优选包括与主题序列具有至少95 %、97 %、98 %或99 %的同一性的氨基酸序列。通常，同系物应包含与主题氨基酸序列相同的活性位点等。不过同源性还可以认为是相似性(即氨基酸残基具有相似的化学性质/功能)。在本发明的上下文中，同源序列理解为包括与编码本发明的多肽的核苷酸序列(主题序列)可以具有至少50 %、60 %、70 %、75 %、80 %、85 %或90 %的同一性的核苷酸序列，优选包括与编码本发明的多肽的核苷酸序列(主题序列)具有至少95^^97^^98%或99%的同一性的核苷酸序列。通常，同系物应包含与主题序列相同的编码活性位点等的序列。不过同源性还可以认为是相似性(即氨基酸残基具有相似的化学性质/功能)。同源性比较可以通过肉眼进行，或者更常用的是借助于容易获得的序列比较程序进行。这些可以商购获得的计算机程序可以计算两条以上序列之间的同源性百分比(％)。同源性百分比可以在相邻的序列上进行计算，即一条序列与另一条序列比对，并且一条序列中的每个氨基酸直接与另一条序列的对应氨基酸比较，一次比较一个残基。这就是所谓的“无间隙”比对。通常，这种无间隙比对仅在数目相对较少的残基上进行。虽然这是一种非常简单和具有一致性的方法，但是该方法没有考虑到，例如如果在相同的一对序列中，一个插入或缺失将导致随后的氨基酸残基没有比对，因此可能导致在全局比对时同源性百分比显著降低。因此，最大同源性百分比的计算首先需要把间隙罚分考虑在内而形成最优比对。用于执行这种比对的合适的计算机程序是Vector NTI (Invitrogen Corp.)。能够执行序列比较的软件的实例包括但不限于BLAST包(参见Ausubel等，1999，分子生物学中的短程序(Short Protocols in Molecular Biology)，第 4 版第 18 章)、BLAST 2(例如参见FEMS Microbiol Lett 1999174(2) :247-50 ；FEMS Microbiol Lettl999 177(1) :187-8和 tatianaOncbi. nlm. nih. gov)、FASTA (Altschul 等，1990，J. Mol. Biol. 403-410)以及AlignX0至少有BLAST、BLAST 2和FASTA可以离线获得并且可以在线检索(参见Ausubel等，1999，第7-58页至第7-60页)。合适的是，对于核苷酸序列而言，同一性的程度在至少20个相邻核苷酸上确定，优选在至少30个相邻核苷酸上确定，优选在至少40个相邻核苷酸上确定，优选在至少50个相邻核苷酸上确定，优选在至少60个相邻核苷酸上确定，优选在至少100个相邻核苷酸上确定。合适的是，对于核苷酸序列而言，同一性的程度适当地可以在整条序列上确定。在此使用的“片段”是指提供和/或编码保留酶的功能活性和/或增强酶的活性的多肽的序列的片段。当述及多肽片段时，优选的是，所述片段的长度至少为50个氨基酸。更优选的是，所述片段包含来自主题序列例如SEQ ID NO 19的至少100、200、300、400或500、600、700、800、900或1000个连续氨基酸，乃至包括包含比全长蛋白少一个氨基酸的多肽。当述及多核苷酸片段时，优选所述片段包括至少100个核苷酸，更优选包含至少200、500、800、1000、1500或更多的核苷酸，乃至包括包含比全长多核苷酸少1个核苷酸的多核苷酸。本领域技术人员应当理解的是，编码一个具体的多肽的多核苷酸可以由于遗传密码子的简并性而彼此不同。在此包括的是编码本发明的多肽的这些多核苷酸的用途。本领域技术人员还应当理解的是，在述及多核苷酸酶序列时的术语“同源序列”可以指在严格条件下与多核苷酸序列结合的序列。如Berger和Kimmel (1987，分子克隆技术指南，酶学方法(Guide to MolecularCloning Techniques,Methods in Enzymology),第 152卷,Academic Press,San Diego CA)所教导的那样，杂交条件基于核苷酸结合复合物的溶解温度(Tm)，并且如下文所述给出了经限定的“严格性”。最大严格性通常出现在约Tm_5°C (比探针的Tm低5°C )处；高度严格性位于比Tm低约5°C至10°C处。中度严格性出现在比Tm低约10°C至20°C处；低度严格性位于比Tm低约20°C至25°C处。本领域技术人员应当理解的是，可以采用最大严格性杂交来鉴定或检测相同核苷酸序列，而采用中度(或低度)严格性杂交来鉴定或检测类似或相关的多核苷酸序列。在一个优选方面，本发明包括能够在严格条件(例如65°C和0. IxSSC{lxSSC =0. 15M NaCl，0.015M柠檬酸三钠，pH7. 0)下与本发明的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。在本发明的核苷酸序列是双链的情况下，双链中的两条链不管是分开的还是结合的，都为本发明所涵盖。在所述核苷酸序列是单链的情况下，应当理解的是该核苷酸序列的互补序列也包括在本发明的范围之内。可以采用很多方式获得与本发明的序列没有100%同源但是落在本发明的范围内的核苷酸序列。例如可以通过探查由一定范围来源制得的DNA文库来获得在此描述的序列的其他变体。另外，可以获得病毒/细菌或细胞同系物尤其是见于哺乳动物细胞(例如大鼠、小鼠、牛和灵长目动物细胞)的细胞同系物，并且这种同系物及其片段一般都能够选择性地与本文的序列表中所示的序列杂交。这种序列可以通过以下方法获得探查由其他动物物种制得的cDNA文库或来自于其他动物物种的基因组DNA文库，并在中度至高度严格性条件下使用包含本文给出的核苷酸序列的全部或一部分的探针探查这些文库。相似条件可以用来获得本发明的氨基酸和/或核苷酸序列的物种同系物和等位基因变体。在本发明的另一方面，提供了用于鉴定细胞的世代寿命(CLS)的潜在调节剂的方法，所述方法包括如下步骤i)使具有已知组蛋白3赖氨酸18 (HIlS)乙酰化状态的细胞与受检化合物接触；和ii)确定所述化合物对所述细胞中的H3K18的所述乙酰化状态是否具有作用；其中，所述细胞中的H3K18的乙酰化状态的变化表示所述化合物调节CLS。已知染色质的组蛋白组分的修饰经常反映基因是否具有活性或者是否受到抑制，并且这些变化受到存在特异性修饰或去除这些修饰的酶的总体调控。在基因具有活性的情况下，染色质一般由赖氨酸(K)乙酰化(ac)或甲基化(me)修饰，尤其是由组蛋白H3的赖氨酸(K)乙酰化(ac)或甲基化(me)修饰。本发明人已经在组蛋白H3中鉴定到一种新的赖氨酸，其修饰状态显示出在确定细胞的寿命中发挥关键的作用。在此使用的世代寿命的调节剂是指对细胞的CLS具有作用的化合物。这种作用可以是提高细胞的CLS或者降低细胞的CLS。应当理解的是，根据针对化合物所设置的目的，这两种作用都有可能是期望的。应当理解的是，此处述及的化合物可以是任意适合的化合物，并且可以是例如小分子化合物或相当于生物学分子例如肽或核酸的化合物。优选的是，所述化合物与至少一个基因或至少一个基因的产物相互作用，所述至少一个基因选自由以下基因组成的组Spt3 (SEQ ID NO :22)、Rtg2(SEQ ID NO :4)、Gcn5 (SEQ ID NO :6)、Ubp8(SEQ ID NO :10)、Spt7 (SEQ ID NO : 12)、Spt8(SEQ ID NO :14)和/或Snfl(SEQID NO :16)或它们的同系物。对于本领域技术人员而言应当明了的是，可以通过使用各种敲除突变株来鉴定能够与所述化合物相互作用的基因。产生这些敲除株的方法对于本领域技术人员而言是已知的，并且包括例如将一个或多个核苷酸插入所述基因的编码区。应当理解的是，在此使用的术语至少一个基因的产物是指核苷酸例如mRNA或肽产物。在又一个优选的实施方式中，所述化合物与定名为Acsl (SEQ ID No 18)的基因或者与该基因的定名为Acsl的产物相互作用。本领域技术人员还应当理解的是，H3K18的乙酰化状态可以通过本领域已知的任何适当的手段来鉴定。
在一个实施方式中，所述乙酰化状态通过测量线粒体呼吸来测量。本领域技术人员应当理解的是，可以使用任何适当的用于测量线粒体呼吸的方法。例如可以通过在DI0C6存在的情况下温育所述细胞并将所述细胞可视化来测量线粒体呼吸。在一个可选的实施方式中，使用抗H3K18ac的单克隆抗体通过间接免疫荧光法在活细胞或经固定的细胞上确定乙酰化状态。本发明还提供了用于鉴定细胞的复制状态或鉴定细胞的CLS的变化的方法。本文使用的术语“鉴定复制状态”是指鉴定特定细胞或细胞群是否活跃地分裂，或者是否能够活跃地分裂或者所述细胞或细胞群是否不再能够分裂。在此使用的术语“鉴定细胞的CLS的变化”是指鉴定细胞或细胞群相对于从其能够活跃地分裂的状态到其不再能够分裂的状态(反之亦然)发生的步骤变化(stepchange)0应当理解的是，这种变化可以特意地加以诱导或者可以自然发生或者通过暴露于环境因子而发生。优选的是，所述细胞是哺乳动物细胞。更优选的是，所述细胞是人类细胞。在一个优选的实施方式中，所述细胞是经诱导的多潜能干细胞。本领域技术人员应当理解的是，经诱导的多潜能干细胞通常是体细胞，该体细胞通过暴露于一定的化学物质或使用例如各种不同病毒进行转染而使得其回复到多潜能状态。在又一个优选的实施方式中，所述细胞是受到瘤化或癌化的细胞。优选的是，所述细胞是来自事先已经从具有正在发展的癌症或存在发展癌症风险的患者分离出来的样品的细胞。在又一方面，提供了用于诊断与细胞的CLS的变化关联的疾病的方法，所述方法包括鉴定事先从受治对象分离的细胞中的H3K18的乙酰化状态和将所述乙酰化状态与对照细胞的乙酰化状态进行比较。在此使用的术语“对照细胞”是指与从受治对象分离的细胞具有相同组织类型的细胞，所述对照细胞从健康组织分离并具有已知的乙酰化状态。优选的是，所述疾病选自包含以下疾病组成的组衰老相关疾病、癌症、血液病、帕金森氏病或阿尔茨海默氏症。本发明将参考附图进行进一步的描述。图中涉及到的株是指表1中所公开的株，在图中
图1由SAGA导致的H3K14ac反映生长。图1显示了 Western印迹，该western印迹显示了在各种不同背景中组蛋白H3的各种不同后翻译修饰的水平，包括由在BY4741 (a、b、c、d)、FY168和FY571 (e、h)、FY2和FY2030 (f)以及JR_52A(g)背景中使用模拟物处理或使用10 μ M雷帕霉素处理长达180分钟的细胞制得的总细胞提取物中的HA-Spt7和Gcn5。在图e中，由FY571中的spt7-217等位基因表达的Spt7版本在氨基酸1119处截短并缺少213C末端残基。图2SAGA和K14ac影响衰老。Western印迹显示由FY2030背景(a、b)或FY168和FY571(c)的IXlO8个细胞制备的总蛋白中的K14ac(a)和HA_Spt7 (b)的水平，其中进行了生物素化，在指数培养基(YPD)中生长10或20世代，并使用磁化链霉亲和素珠分离。年轻细胞(大部分少于5世代龄)由其他没有进行生物素化的细胞制得。*表示组蛋白H3的剪接本。图3SAGA、SLIK和K14ac的控制。Western印迹显示了由在10 μ M雷帕霉素(+)存在的情况下生长或使用模拟处理(_)3小时后的所示的株(基因型在表1中示出)制得的总细胞提取物中的H3KHacGcn5或HA_Spt7的水平。野生型株是BY4741。图4Rtg2和SLIK确定世代寿命。a使用Di0C6染色以评价线粒体膜势(Ψ)的处在指数期的FY168(WT)、FY571(Spt7-217)和rtg2 Δ衍生物。比例尺为IOym0 b来自在含有3%葡萄糖的CSM中通气生长至静息期并在所示天在YDP上铺板以评价生存力的所示株的细胞的一系列10倍稀释液。根据菌落计数计算平均寿命(以天表示的至生存力下降50%的时间)。c使用或不使用环己酰胺处理以抑制细胞质翻译并使用35S甲硫氨酸脉冲标记15分钟的指数期的总蛋白提取物的荧光图像。图5显示了示出由指数期或静息早期的BY4741制得的总细胞提取物中的组蛋白H3的各种后翻译修饰的水平的Wfestern印迹。图6a显示在FY571株中的Spt7的C末端截短版本(Spt7_217)和衍生物的表达对K14ac和基因表达的影响。图12b-i显示生长期和RTG2的存在对各种不同基因诱导的影响。图7显示HA_Spt7在进入静息期的细胞中发生C末端剪接。图8显示了 K14ac随着细胞衰老而降低。图9显示了采用ChIP相对于组蛋白H3进行归一化的雷帕霉素对CIT2 (SLIK诱导)或HMS2(未诱导)上的K14ac的影响。其中通过实时PCRra监测ChIP，表示为输入的百分比，并且相对于3种染色质制备物中的组蛋白H3的水平进行归一化，所示为位于所述基因的5'区。图10显示雷帕霉素处理时雷帕霉素依赖性的K14ac降低需要Snfl。a_d Western印迹显示由在LPY8056背景(d)、BY4741 (a-b, f-g)或FY3 (c)中的所示株制得的总细胞提取物的H3修饰的水平。对于所示的所有实验，η = 3。e使用feil83-HA的带有FITC标签的抗HA抗体(右图)或DAPI (DNA)(左图)进行的间接免疫荧光。细胞使用+/_10 μ M的雷帕霉素处理长达3小时。图11显示K14ac的优化水平需要Rtg2，但是K14ac在rtg2 Δ株中是雷帕霉素敏感的。Western印迹显示在由在BY4741背景中的所示株制得的总细胞提取物中的H3 (a)和Gcn5 (b)的修饰水平。细胞使用+/-10 μ M的雷帕霉素处理长达3小时。Rtg2受到TORCl66的L计8的负调控，并且这种抑制为缺乏TORCl信号转导或雷帕霉素处理所解除。Rtg2是静止细胞中反馈反应基因的诱导所需的SLIK的组分11。图12显示失去对静息期中的CIT2、ATGl和ACSl的可诱导性的影响。该图显示所示基因的RNA的逆转录实时PCR定量。结果说明对于保持静止期培养物中的SALSA和SLIK的完整性是需要的。与此相吻合的是，本发明人证明了 ACSl诱导独立于Sch9 (图9中的数据说明该基因依赖于的Rtg2、依赖性Rtgl/3核吸收但是不依赖于SLIK)。不同的是，CIT2(SLIK/Rtg2依赖型)和ATGl (SALSA依赖型但是不是SLIK依赖型)在它们表达时需要kM。
图13是显示了 SAGA复合物的破坏导致H3K18乙酰化的提高的Western印迹。图14是显示SAGA的破坏延长了酵母细胞的世代寿命的柱状图。图15是显示H3K18乙酰化的破坏导致酵母细胞的世代寿命显著降低的柱状图。材料和方法各株的具体细节在表1中提供。在丰富培养基(YPD)，1 %细菌用蛋白胨，1 % Difco酵母提取物(BD and Co.)，2%葡萄糖中使酵母在30°C生长到0. 4X IO6细胞/ml的密度并用在90%乙醇/10Tween20中的10 μ M雷帕霉素或模拟物处理长达3小时。总细胞提取物的制备、Western印迹和所用的抗体、RNA的制备和RNA定量、染色质免疫沉淀(ChIP)、衰老程序、ERC评估和世代衰老测定的细节在下文给出。表 权利要求
1.一种用于提高细胞的世代寿命的方法，所述方法包括破坏所述细胞中的SAGA、SLIK和/或SALSA复合物中的至少一个的功能。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，对所述SAGA、SLIK和/或SALSA复合物进行直接破坏或间接破坏。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中，通过破坏选自由Spt3、Rtg2、GCn5、Ubp8, Spt7、SptS和/或Snfl组成的组中的至少一个基因的功能来破坏所述复合物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，破坏Spt7的功能。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，基因的功能通过iRNA进行破坏。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，基因的功能在转录/DNA水平上进行破坏。
7.一种用于鉴定细胞的世代寿命(CLS)的潜在调节剂的方法，所述方法包括如下步骤i)使具有已知组蛋白3赖氨酸18 (HIlS)乙酰化状态的细胞与受检化合物接触；和 )确定所述化合物对所述细胞中的H3K18的所述乙酰化状态是否具有作用；其中，所述细胞中的H3K18的所述乙酰化状态的变化表示所述化合物调节CLS。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述化合物与定名为Acsl的基因的产物相互作用。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，所述化合物提高所述细胞的所述CLS。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中，所述化合物降低所述细胞的所述CLS。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法，其中，HI18的所述乙酰化状态通过线粒体呼吸的测量来确定。
12.一种细胞的CLS的调节剂，所述调节剂根据权利要求7至11中任一项所述的方法进行鉴定。
13.一种用于鉴定细胞的复制状态的方法，所述方法包括鉴定所述细胞中的H3K18的乙酰化状态，其中存在H3K18的乙酰基修饰表示所述细胞是活性复制细胞，并且不存在H3K18的乙酰基修饰表示不再复制的细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述细胞是哺乳动物细胞。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其中，所述细胞是人类细胞。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中，所述细胞是经诱导的多潜能干细胞。
17.根据权利要求13至16中任一项所述的方法，其中，所述细胞是癌细胞。
18.一种用于鉴定细胞的CLS的变化的方法，所述方法包括鉴定所述细胞中的HI18的乙酰化状态和将该状态与对照细胞的乙酰化状态进行比较，其中，当与所述对照细胞比较时失去H3K18Ac表示CLS提高，而获得H3K18Ac表示CLS降低。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述细胞是哺乳动物细胞。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中，所述细胞是人类细胞。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的方法，其中，所述细胞是经诱导的多潜能干细胞。
22.根据权利要求18至20中任一项所述的方法，其中，所述细胞是癌细胞。
23.—种诊断与细胞的CLS中的变化关联的疾病的方法，所述方法包括鉴定事先从受治对象分离的细胞的H3K18的乙酰化状态和将所述乙酰化状态与对照细胞的乙酰化状态进行比较。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述疾病选自包括以下疾病的组衰老相关疾病、癌症、血液病和神经障碍。
全文摘要
本发明涉及提高细胞的世代寿命的方法，所述方法包括破坏所述细胞中的SAGA1 SLIK和/或SALSA复合物中的至少一个的功能。
文档编号G01N33/50GK102576010SQ201080031100
公开日2012年7月11日 申请日期2010年7月8日 优先权日2009年7月8日
发明者亚历山大·阿库利特切瓦, 伊丽莎白·简·梅勒, 安尼塔·奈尔, 迈克尔·尤德尔 申请人:克罗诺斯治疗有限公司