专利名称：胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法
技术领域：
本发明涉及生物碱的检测方法，是一种检测胡芦巴酊中胡芦巴碱的方法。
背景技术：
胡芦巴(Trigonellafoenum-graecum L.)又名香豆子、香苜蓿、芦巴子、香草、雪 莎，原产西亚、北非，在我国，胡芦巴是一种传统的常用中药。取胡芦巴籽经烘烤，碾碎后用 一定浓度的乙醇提取得酊。另有利用胡芦巴草生产的酊剂和浸膏，其香气不同于籽提取物。 常用于食品香精中，可配制可可、咖啡、坚果、枫槭和焦糖香韵的香精。在卷烟烟气中能抑制 烟的辛辣刺激性、掩盖杂气，矫正吸味，增添干草样烘烤香气。烟气中的香气特征为增加体 香、枫槭本香，吸味特征为增加体香、坚果香、甜、枫槭香。胡芦巴碱是胡芦巴药材的主要生物碱，具有降血糖和抗肿瘤作用。目前，胡芦巴碱 的检测主要有液相色谱法。检测胡芦巴酊中胡芦巴碱的含量，对控制胡芦巴酊的内在质量 具有一定的参考价值，然而，胡芦巴酊中的胡芦巴碱检测尚未见报道。
发明内容
本发明的目的正是基于上述状况而提供的一种胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法， 填补了胡芦巴酊中分析检测胡芦巴碱的空白。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法如 下样品过0. 45 μ m滤膜后直接进样，以NH2柱为分析柱，水和乙腈为流动相，采用高效液相 色谱法进行检测，其中检测器是二极管阵列检测器。测定方法具体包括以下步骤
(1)标准工作曲线制定在1.848X10_3-2.31mg/mL范围内用甲醇配制葫芦巴碱标准品 的至少五个浓度的标准溶液，再利用高效液相色谱仪分别对上述所有浓度的标准溶液中的 标准品的含量进行检测，并根据标准品的峰面积和相应的浓度绘制标准工作曲线并计算得 到其回归方程；
(2)样品制备胡芦巴酊过0.45 μ m滤膜后直接进样，再利用高效液相色谱仪采用与步 骤(1)相同的条件分别对样品溶液进行检测，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线 的回归方程中，计算出样品中的含量。高效液相色谱分析条件如下
色谱柱Agilent, NH2 分析柱(150 mm X 4. 6 mm, 5 μ m)； 流动相:A为水，B为乙腈;
梯度洗脱条件:90%B 开始，8min 后 75%B, 18min 后 50%B, 23min 后 30%B, 23min 以 90%B 平衡柱子5min，分析时间共^min ； 流速 lmL/min ； 进样量5 μ L ； 柱温30°C ；
3检测波长265nm。本发明之所以选用以NH2柱为分析柱，是因为胡芦巴碱是内盐，极性极大，在C18 柱上保留极小，在分析胡芦巴碱时不易与杂质分离，所以，采用极性固定相的NH2柱，可增强 胡芦巴碱在柱上的保留时间。而在选用流动相时，最初选用甲醇和水的混合体系，发现胡芦巴碱色谱峰产生拖 尾，而采用乙腈为流动相时，胡芦巴碱色谱峰形对称。最终采用乙腈和水作为流动相，利用 NH2柱分离胡芦巴碱。本方法优点在于前处理简单，重复性和回收率很好，适用于大批量样品的分析。 填补了胡芦巴酊中分析检测胡芦巴碱的空白。
图1为胡芦巴碱标样色谱图。图2为胡芦巴酊样品色谱图。图中1为胡芦巴碱。
具体实施例方式下面通过实施实例对本发明进行进一步说明
色谱条件Agilent 1200液相色谱，配置DAD检测器，检测波长^5nm。色谱柱 Agilent, NH2分析柱(150 mm X 4. 6 mm, 5 μ m)0流动相水(A)，乙腈(B)；梯度洗脱， 90%B 开始，8min 后 75%B, 18min 后 50%B, 23min 后 30%B, 23min 以 90%B 平衡柱子 5min。分 析时间共沘时11。流速1. OmL/min。柱温30°C。进样量5yL。1)标准工作曲线的制定
葫芦巴碱用甲醇配制标准曲线，母液为2. 31mg/mL甲醇溶液。标准曲线为母液逐级稀 释5、5、5和2倍，标准曲线共有5个校正点。葫芦巴碱的标准曲线范围1.848X10_3-2.31mg/ mL,标准方程为y=6995.585，R2=l, y为色谱峰面积，χ为胡芦巴碱浓度(mg/mL)。2)样品检测
胡芦巴酊过0. 45 μ m滤膜后直接进样。图1为葫芦巴碱的标样色谱图。图2为葫芦巴酊样品色谱图。按照实验部分所述方法平行5次测定胡芦巴酊中胡芦巴碱含量，相对标准偏差 (RSD)见表1。采用三个不同添加水平的加标回收率见表2。按照10倍的信噪比计算定量 限。胡芦巴酊中胡芦巴碱定量限为1.232X ΙΟ"4 mg/mL。
权利要求
1.一种胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法，其特征在于样品过0.45 μ m滤膜后直接进 样，以NH2柱为分析柱，水和乙腈为流动相，采用高效液相色谱法进行检测，其中检测器是二 极管阵列检测器。
2.根据权利要求1所述的胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法，其特征在于该测定方法 具体包括以下步骤(1)标准工作曲线制定在1.848X10_3-2.31mg/mL范围内用甲醇配制葫芦巴碱标准品 的至少五个浓度的标准溶液，再利用高效液相色谱仪分别对上述所有浓度的标准溶液中的 标准品的含量进行检测，并根据标准品的峰面积和相应的浓度绘制标准工作曲线并计算得 到其回归方程；(2)样品制备胡芦巴酊过0.45 μ m滤膜后直接进样，再利用高效液相色谱仪采用与步 骤(1)相同的条件分别对样品溶液进行检测，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线 的回归方程中，计算出样品中的含量。
3.根据权利要求1或2所述的胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法，其特征在于高效液 相色谱分析条件如下色谱柱Agilent, NH2 分析柱(150 mm X 4. 6 mm, 5 μ m)；流动相:A为水，B为乙腈;梯度洗脱条件:90%B 开始，8min 后 75%B, 18min 后 50%B, 23min 后 30%B, 23min 以 90%B 平衡柱子5min，分析时间共^min ；流速lmL/min ；进样量5 μ L ；柱温30°C ；检测波长265nm。
全文摘要
一种胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法，其特征在于样品过0.45μm滤膜后直接进样，以NH2柱为分析柱，水和乙腈为流动相，采用高效液相色谱法进行检测，其中检测器是二极管阵列检测器。具体测定方包括以下步骤(1)标准工作曲线制定配制葫芦巴碱标准品的至少五个浓度的标准溶液，利用高效液相色谱仪对其含量进行检测，绘制标准工作曲线并计算得到其回归方程；(2)样品制备胡芦巴酊过0.45μm滤膜后直接进样，并根据得到的峰面积分别带入标准工作曲线的回归方程中，计算出样品中的含量。本方法优点在于前处理简单，重复性和回收率很好，适用于大批量样品的分析。填补了胡芦巴酊中分析检测胡芦巴碱的空白。
文档编号G01N30/02GK102095817SQ20111000293
公开日2011年6月15日 申请日期2011年1月8日 优先权日2011年1月8日
发明者丁丽, 张晓兵, 王昇, 胡斌, 谢复炜, 赵阁, 颜权平 申请人:中国烟草总公司郑州烟草研究院