专利名称：液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法
技术领域：
本发明涉及蜂蜜中多类药物残留的检测方法，尤其涉及一种液相色谱串联质谱同 位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法。
背景技术：
上世纪90年代，随着全球经济一体化和食品贸易国际化，食品安全已成为一个全 世界关注的焦点、世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题，其中药物残留问题是影响动 物性食品安全的最主要因素之一，它直接影响到人类健康和进出口贸易，对药物残留进行 监控已成为当务之急，世界各国纷纷制定相应的法律法规来限制药物的滥用情况。蜂蜜是我国重要的出口产品之一，也一直是各国对各种药物残留检测的重点产 品。近几年来抗生素滥用的情况日益严重，在蜂蜜中的检出率也逐年增高，对我国的蜂蜜出 口造成不利影响，蜂蜜的质量受到日本、欧盟以及美国等国家的特别关注。目前国内外监控蜂蜜中主要残留药物有磺胺类、硝基咪唑类、大环内酯类、氯霉素 类、硝基呋喃代谢物、四环素类和氟喹诺酮类等。由于各类药物物理化学性质差别较大，现 有蜂蜜中药物残留分析方法一般按照化学结构相类似的同族药物开发，检测方法专属性 强、灵敏度高以满足蜂蜜中药物残留限量不断降低的要求。国家标准、行业标准和大量文献 已报道通过筛选法、光谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱法和液相色谱 串联质谱法等测定技术针对蜂蜜中各类药物残留的情况分类进行测定。随着人们的食品安全意识提高，一批蜂蜜经常需检测许多种类的药物残留，因此 按照传统的分析方法，需要较长的检测周期，较多的人力和物力，检测成本高，不能满足目 前药物种类不断增加，分析通量不断提高的需求。随着检测技术的快速发展，蜂蜜中的兽药 多残留检测范围目前正逐步从单一类别发展为多种不同类别兽药的同时定性与定量分析。关于蜂蜜中多类药物同时测定的方法有中国发明专利申请(申请号 200810195887. 9)公开了蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法，样品加入提取液三氯 乙酸或高氯酸和提取液醋酸盐、磷酸盐或硼酸盐溶液，控制PH值4. 5-9. 0 ；离心，滤液再用 固相萃取柱净化，淋洗并抽干固相萃取柱，用草酸-甲醇溶液洗柱，洗脱液用甲醇水溶液定 容，液相色谱-串联质谱分析测试，所得的色谱峰与各已知药物的标准色谱峰对照，根据保 留时间和质谱离子的丰度确定所检出药物的具体名称。该方法对样品进行一次前处理，即 可同时提取磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类、林可胺类、硝基咪唑类、内酰胺类、四环素 类、氯霉素类、磺胺增效剂类、杀虫脒，三唑醇等11大类60多种兽药的药物残留，分析效率 高，检测成本大降低。文献《中国卫生检验杂志》2010，20，959通过乙酸铵水溶液调节ρΗ，甲醇提取，超 高液相色谱三重四级杆质谱法快速测定蜂蜜中12种大环内酯和林可酰胺类药物残留，定 量限处于 0. 3-3. Oyg/kg。((Journal of Agricultural and Food Chemistry》，2009，57，1760通过EDTA缓冲溶液提取，OASIS HLB固相萃取柱净化，超高液相色谱-质谱/质谱法测定蜂蜜中大环内酯 类、四环素类、喹诺酮类和磺胺类共计17种药物，该方法测定低限为4 μ g/kg。为了保证我国蜂蜜产品的质量，建立针对蜂蜜中磺胺类、硝基咪唑类、喹诺酮类、 大环内酯类、林可酰胺类和吡喹酮共计6大类M种药物(表1)残留同时检测的方法是非
常重要的。表1各类药物的基本信息
权利要求
1.液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法，其特征在于 该方法包括以下的步骤一、提取称取5g试样，精确到0. Olg,置于50mL具塞离心管中，加0. ImL同位素内标溶液，加 20mL磷酸盐缓冲溶液稀释，混勻，待净化；二、净化将蜂蜜稀释溶液转移至HLB固相萃取小柱中，弃去流出液，加20mL水淋洗，抽干，6mL甲 醇洗脱，控制流速lmL/min 2mL/min，收集洗脱液，在40°C以下水浴中减压浓缩至近干，用 2. OmL甲醇水溶液定容，混勻，溶液过0. 22 μ m滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；三、测定①标准工作液和样品溶液在设定的液相色谱串联质谱条件下进样，以质量浓度X为横 坐标，峰面积的比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量， 样品溶液中药物的响应值应在仪器检测的线性范围内；②在上述色谱条件下，判断样品中是否存在相应的被测物，需要满足如下条件样品溶 液中出现的质量色谱峰保留时间与混合基质标准工作液一致，允许偏差小于士2. 5%，该色 谱峰所对应的药物在设定的质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的混合基质标准工作液 的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过设定的规定，则可确定含有该药物。
2.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物 残留的方法，其特征在于步骤一同位素内标溶液的加入为磺胺类同位素内标8ng ；硝基咪 唑类同位素内标40ng ；喹诺酮类同位素内标30ng。
3.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物 残留的方法，其特征在于步骤三设定的各类药物的母离子、子离子和碰撞能量等质谱参数 如下号化合物离子对 (m/z)去簇 电ff (DP)/V ss I ^ ‘ 12 U碰撞室 出口电压 (CXP)/V内标 化合物保留时间 /min1磺胺嘧啶251.1/156.3* 251.1/108.26522 3310磺胺嘧啶 -D44.352磺胺噻唑255.8/156.3* 255.8/108.27022 3010磺胺噻唑 -D64.903磺胺吡啶249.9/156.2* 249.9/184.4702410磺胺吡啶 -D65.294磺胺甲基嘧啶265.1/156.3* 265.1/172.26525 2310磺胺嘧啶 -D46.065磺胺二甲基嘧 啶279.2/156.3* 279.2/186.1702610磺胺二甲 基嘧啶-D47.78
4.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物 残留的方法，其特征在于步骤三设定的液相色谱串联质谱的仪器条件参数如下
全文摘要
本发明涉及蜂蜜中多类药物残留的检测方法，尤其涉及一种液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法。该方法通过磷酸盐缓冲溶液(pH=8)直接稀释，HLB固相萃取净化，液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定，同位素内标稀释内标法和外标法定量。测定低限磺胺类药物1.0μg/kg，硝基咪唑类药物1.0μg/kg，喹诺酮类药物2.0μg/kg，大环内酯类药物3.0μg/kg，林可胺类药物2.0μg/kg和吡喹酮0.3μg/kg。该方法简便快捷，消耗资源小，检测成本低，所提及的前处理过程、涉及药物类别以及测定所用仪器可以与已有方法进行很好的互补，适用于蜂蜜中多类药物的同时测定要求，可以为维护食品安全和保障我国蜂蜜顺利出口提供有力的技术保障。
文档编号G01N30/02GK102141551SQ20111002249
公开日2011年8月3日 申请日期2011年1月19日 优先权日2011年1月19日
发明者侯建波, 奚君阳, 王峰, 谢文, 钱艳, 陈笑梅 申请人:浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心