专利名称：同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物及其试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体是指一种同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物及其试剂盒，本申请所述的多种疾病是指甲肝、乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、结核病。
背景技术：
随着人类基因组计划的完成，生命科学又迎来了后基因组时代的挑战——人类蛋白质组学(Proteome)。因为人类基因组虽然包含了我们身体的全部遗传信息，但那也只是制造蛋白质的设计图纸。而构成细胞并表现各种生命现象则是由蛋白质通过其发挥生理功能来完成的。因此，惟有蛋白质才是生命现象的表现者和承担者。蛋白质也是机体各种不同类型细胞之间差异的决定因素，尽管所有的细胞都拥有同样的基因组，但在不同的细胞内会有不同的基因处于开放(表达)状态，从而合成不同的蛋白质。同样，病变细胞和正常细胞的差异在很大程度上也是由功能基因及其合成蛋白质的不同来决定的。甲肝、乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、结核等是传染病监测部门监测的主要以人为传播对象的传染病。甲肝、乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒现在采用的是酶联免疫原理的检测方法，肺结核的实验室检测采用的是结核菌痰培养的方法。进行酶联免疫检测时，每个实验大约需要一个半到两个小时的时间，结核菌痰培养最长需要六周的时间，进行这些实验操作时每个实验都需要一个实验人员，浪费时间和人力，检测时需要的样品量较大，进行结核菌检测时对痰样品的前期处理也较为复杂和费时。
发明内容
本发明是为了解决上述技术问题的不足，提供一组特异性强、灵敏度高血清中甲肝、乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、结核病特异的蛋白标志物，并利用该蛋白质标志物提供一种操作简便、结果准确试剂盒，且利用该试剂盒检测血清中甲肝、乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、结核病的同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物及其试剂盒。本发明为了实现上述目的，所采用的技术方案为提供一组同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物，所述同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物是指，能够同时检测血清中甲肝、乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、结核的血清中特异的蛋白标志物；所述同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物由血清蛋白质组图谱中的7个不同分子量的蛋白质组成:Α:5232. 13、Β:8784· 25、C:2017. 5、D:4309. 19、Ε:5489· 97,F :8076· 62 和 G:2155. 92。利用上述同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物检测多种疾病的试剂盒，由以下成分组成
1)以羧基为配基的纳米磁珠；
2)裂解液9MUrea,质量比为 2% CHAPS, 50mM Tris-HCl, pH9. 0 ；
3)缓冲液50mMNaAC, pH4. 0 ；
4)去离子水；
5)芥子酸;6)三氟乙酸；
7)蛋白质阅读仪；
8)质控血清。利用上述试剂盒检测甲肝、乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、结核病的使用方法，包括以下步骤
1)利用裂解液处理待测血清样本30min；
2)向以羧基为配基的纳米磁珠中加入处理后的血清样本，并利用以羧基为配基的纳米磁珠捕获血清蛋白；
3)洗脱以羧基为配基的纳米磁珠，并用蛋白质阅读仪检测洗脱液中的7个特异蛋白；
4)质控血清检测结果为阴性且受试样品检测结果重复性变异系数小于10%时该次实验结果有效，受视样品中7个特异蛋白根据检测模型判断疾病类型。所述检测模型为
/氺Rules for terminal node 1氺/ if (
M5232__13<=3.56735&&M8784__25<=1.23527&&M201750<=2.79508
)
{
terminalNode = _1 ； class = 6 ；
ι
/氺Rules for terminal node 2氺/ if (
M5232_13 <= 3.56735 && M8784_25 <= 1.23527 && M2017_50 > 2.79508
)
{
terminalNode = _2 ； class = 0 ；
ι
/氺Rules for terminal node 3氺/ if (
M5232_13 <= 3.56735 && M8784 25 > 1.23527 &&
权利要求
1.一组同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物，其特征在于所述同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物是指，能够同时检测血清中甲肝、乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、 结核病特异的蛋白标志物；所述同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物由以羧基为配基的纳米磁珠捕获并展示在血清蛋白质组图谱中的7个不同分子量的蛋白质组成 Α:5232· 13、Β:8784· 25、C:2017. 50、D:4309. 19、Ε:5489· 97, F :8076. 62 和 G:2155. 92。
2.一种利用如权利要求1所述的一组同时检测血清中多种疾病特异的蛋白标志物检测多种疾病的试剂盒，其特征在于所述检测多种疾病的试剂盒由以下成分组成1)以羧基为配基的纳米磁珠；2)裂解液9MUrea,质量比为 2% CHAPS, 50mM Tris-HCl, pH9. 0 ；3)缓冲液50mMNaAC, pH4. 0 ；4)去离子水；5)芥子酸;6)三氟乙酸；7)蛋白质阅读仪；8)质控血清。
3.利用权利要求2所述的检测多种疾病试剂盒检测血清中多种疾病的方法，其特征在于所述利用检测多种疾病试剂盒检测血清中多种疾病的方法包括以下步骤，1)利用裂解液处理待测血清样本30min；2)向以羧基为配基的纳米磁珠中加入处理后的血清样本，并利用以羧基为配基的纳米磁珠孵育并捕获血清蛋白；3)洗脱以羧基为配基的纳米磁珠，并用蛋白质阅读仪检测洗脱液中的7个特异蛋白；4)质控血清检测结果为阴性且受试样品检测结果重复性变异系数小于10%时该次实验结果有效，受试样品中7个特异蛋白根据检测模型判断疾病类型。
全文摘要
本发明公开了一组可同时检测血清中甲肝、乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、结核病特异的蛋白标志物、检测该组特异蛋白的试剂盒及其应用。本发明中检测的特异蛋白标志物由血清蛋白质组图谱中的7个不同分子量的蛋白质组成A:5232.13、B:8784.25、C:2017.5、D:4309.19、E:5489.97、F8076.62和G:2155.92。该组特异蛋白的检测方法为利用裂解液处理待测血清样本；利用以羧基为配基的纳米磁珠孵育并捕获血清蛋白；洗脱纳米磁珠，并用蛋白质阅读仪检测洗脱组分中的7个特异蛋白。本发明的试剂盒及检测方法具有快速、敏感、特异、灵敏、操作简单等优点。
文档编号G01N27/64GK102183577SQ201110051670
公开日2011年9月14日 申请日期2011年3月4日 优先权日2011年3月4日
发明者李云峰, 李潇, 毕秀欣, 蔡鹏 , 薛芳 申请人:李云峰, 薛芳