专利名称：一种女金胶囊提取浓缩过程质量控制方法
技术领域：
本发明涉及中药质量控制领域，具体涉及一种中药女金胶囊提取浓缩生产过程黄 芪苷质量控制方法。
背景技术：
中药是我国最具有原创和自主知识产权的产业之一。中成药与饮片是中药的主要 临床应用形式。由于中药疗效的物质基础的复杂性，中成药生产的质量控制技术手段较为 粗放，体现在中成药的质量控制采用的是工艺制法控制，加上代表性的化学指标性成分定 量检测和制剂定性检查。即，“过程上的定性加点上的定量”。没有全过程的以理化指标为 基础的全面质量控制，这是导致中成药质量、临床疗效稳定性差的重要原因之一。女金胶囊系由收录于《中国药典》的中药名方女金丸改剂而成，由当归、川芎等20 味药组成，经现代工艺加工制成，具有调经养血、理气止痛作用，对月经不调、痛经、小腹胀 痛、腰腿酸痛具有良好的疗效。女金胶囊制剂过程长，包括挥发油提取、乙醇回流、药渣煎 煮、浓缩、混和、制粒、成型等过程。其制剂过程控制采用工艺参数控制。近红外(NIR)光谱具有信息量大，但光谱信号重叠情况严重、物质状态信息干扰 大的特点，必须依赖大量的波谱计算和分析才能应用于分析工作。因此，OTR技术在物质应 用分析技术发展历史上曾经停步不前。伴随OTR光谱技术理论和分光技术的发展，同时借 助计算机技术和化学计量学的发展，肌R光谱分析技术已经越来越进入到应用领域，并广泛 用于化学、制药、食品工业的快速在线分析。OTR光谱定性定量检测技术是建立在传统理化 分析手段基础上的二级分析方法，依赖于近红外光谱仪、计算机技术和化学计量学软件基 础，是目前应用在化工烟草、石油等行业较为成熟的在线和快速检测手段。近红外光谱分析 技术是绿色、快速、非破坏性的质量控制、品质分析和在线分析技术，已成为近年来发展最 快的分析测试技术之一。但尚未有采用OTR光谱技术用于女金胶囊提取、浓缩液黄芪苷含 量分析，进行过程质量控制的报道。
发明内容
为了进一步提高和稳定女金胶囊提取浓缩的生产质量，克服中成药无生产过程成 分指标的在线控制，本发明应用近红外光谱技术对女金胶囊提取浓缩液指标成分进行连续 取样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的提取液指标成分的近红外模型。本发明的质量控制方法，具体涉及一种快速测定女金中药提取浓缩液中黄芪苷含 量的方法，其特征在于包括如下步骤步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；步骤2、采用化学计量学软件分别建立女金中药提取浓缩液近红外光谱与浓缩液 中黄芪苷含量之间的对应模型；步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件获得待测的女金中药提取浓缩液样品中的黄芪苷。其中所述女金中药提取液的处方和制备方法如下，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本 用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没 药用60%乙醇回流提取两次，第一次2小时，第二次1. 5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙 醇并浓缩至相对密度为1. 30(50 60°C )以上的清膏。其中步骤1中，女金中药提取浓缩液的制备及测定方法如下按女金胶囊处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸 馏后的水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60%乙醇回流提取两 次，第一次2小时，第二次1. 5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为 1.30(50 60°C)以上的清膏，备用；上述回流提取和浓缩过程中，连续取样，样品采集近红 外光谱，并测定黄芩苷含量；本发明所述的方法，其特征在于采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采 用透射方式进行，每一张光谱都是1-1000次扫描的平均结果，分辨率0. 3-20nm,扫描光谱 范围为 1100-2300nm。本发明所述的方法，其特征在于采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，采 用透射方式进行，每一张光谱都是200-500次扫描的平均结果，分辨率l-5nm，扫描光谱范 围为 1100-2300nm。本发明所述的方法，其特征在于采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时， 采用透射方式进行，每一张光谱都是300次扫描的平均结果，分辨率2nm，扫描光谱范围为 1100-2300nm。本发明所述的方法，其特征在于采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集时，以 现场取样方式、在线取样方式和旁线取样方式之一进行。本发明所述的方法，其特征在于黄芪苷含量的测定条件为采用RP-HPLC对连 续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，色谱柱YMC ODS分析柱(6X 150mm，5 μ m，柱温 25°C )，流动相为甲醇-0. 4%磷酸溶液(42. 5 57. 5)，进样体积20uL，流速lml/min，UV检 测波长276nm。本发明所述的方法，其特征在于步骤2中模型的建立包括(1) 一阶导数9点 平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-验证法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验 证。本发明所述的方法，其特征在于步骤2中模型的建立包括(1) 一阶导数9点 平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-验证法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验 证；(4)精密度试验；(5)稳定性试验。本发明应用OTR光谱技术对中药女金胶囊提取、浓缩过程中指标成分黄芪苷进行 连续取样和现场分析，结合传统定量检测，建立了在线应用的女金胶囊提取、浓缩液指标成 分的近红外模型。该方法为女金胶囊提取浓缩过程中指标成分快速定量分析和生产过程中 的在线检测，控制产品的质量提供了有效的分析方法。
图1黄芩苷对照品HPLC2女金胶囊回流提取液样品HPLC3女金胶囊浓缩液HPLC4女金胶囊回流提取液NIR原始总光谱5女金胶囊浓缩液NIR原始总光谱6女金胶囊回流提取液NIR图的一阶导数光谱7女金胶囊浓缩液NIR图的一阶导数光谱图
具体实施例方式下面结合实施例进一步说明本发明，但不表明对本发明权利要求的限制。实施例1仪器与试药仪器AOTF Luminar 5030-731近红外光谱分析仪(美国BRIMR0SE公司)，配套使 用的SNAP光谱采集软件和CAMO化学计量学软件；AglientllOO色谱仪(美国Agilent公 司)，DAD 二极管阵列检测器；多功能提取罐(常熟市医药化工设备总厂)。试药当归、白芍、川芎、熟地黄、党参、白术(炒)、茯苓、甘草、肉桂、益母草、牡丹 皮、没药(制)、蒿本、白芷、延胡索(醋制)、黄芩、白薇、香附(醋制)、砂仁、陈皮、赤石脂 (煅)、鹿角霜、阿胶(江西汇仁药业有限公司)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定 所)；乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水。方法与结果1样品制备与收集按照处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水 溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60%乙醇回流提取两次，第一次 2小时，第二次1. 5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1. 30(50 60°C)以上的清膏，备用。上述回流提取和浓缩过程中，每^iin取样一次，样品采集近红外 光谱，并测定黄芩苷含量，分别取样50份、40份。2样品黄芪苷含量分析采用RP-HPLC对连续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，分析条件色谱柱YMC ODS分析柱(6父150_，5“111，柱温25°0，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液02.5 57.5)， 进样体积20uL，流速lml/min, UV检测波长276nm。重现性变异系数为0. 13% (n = 3)，图 谱见附图1-附图3。校正集样品结果带入软件建立模型，验证集样品用于模型验证。3获取NIR光谱扫描光谱时在样品溶液中浸入OTR光谱仪自带的光纤透射式探头，光纤长2m，待 溶液稳定并无气泡后进行扫描。测试条件为扫描次数300次，分辨率2nm，扫描光谱范围 为1100 2300nm。回流提取及浓缩液样品总光谱图，分别见附图4，附图5。4建立模型4. 1光谱预处理对扫描得到的原始吸收光谱进行光谱预处理，以消除噪音和基线 漂移的影响。采用的预处理方法为一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)，一阶导数光谱图见附图6，附图7。经一阶导数处理可以消除样品由于颜色差别引起的光谱基线偏移和漂 移。4. 2建立PLSl数学模型回流提取和浓缩样品分别顺序编号，随机分别选择8个作 为外部验正集样品，其余作为建模样品。将经过预处理后的光谱数据与HPLC分析数据进行 关联，采用偏最小二乘法(PLSl)，交叉-验证法(cross-validation)，用 Unscrambler 定量分析软件建立模型。NIR 和 HPLC 测定 的异常值分别采用光谱影响值Leverage和化学值误差Residual这2个统计量来检验剔 除。经过异常值的剔除进行优化，得到较为理想的校正模型。得到的样品黄芩苷的OTR光 谱预测值与HPLC分析值之间相关性良好，测定数据偏差较小。回流提取液黄芩苷模型的主 成分维数为4，R2 = 0. 9794，RMSECV = 0. 066506 ；浓缩液黄芩苷模型的主成分维数为4，R2 =0. 9855, RMSECV = 0. 115755。4. 3模型预测效果验证以建立的校正模型对外部验正集样品进行分析。样品黄芩 苷的测试结果分别见表1，表2。OTR光谱预测值与样品黄芩苷HPLC测定真值的相关系数 R2分别为0. 9969,0. 9844。结果表明，OTR光谱预侧值与样HPLC分析值之间相关性良好。表1回流提取液黄芩苷含量校正模型外部验证结果mg · πιΓ1
样品名称
预测平均值 实测值
相对偏差(%)
10. 7800.7921. 5620. 9821.0082. 5830. 9881.0082. 0241. 0691.0333. 4851. 1341.1612. 3560. 3200.28711. 6170. 2820.31911. 6080. 3310.3330. 50预测平均偏差4. 46 表2浓缩液黄芩苷含量校正模型外部验证结果mg · ml_
权利要求
1.一种测定女金中药提取浓缩液中黄芪苷的方法，其特征在于包括如下步骤步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；步骤2、采用化学计量学软件分别建立女金中药提取浓缩液近红外光谱与浓缩液中黄 芪苷含量之间的对应模型；步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件获得待测的女金中药提取浓缩液样品中的黄芪苷。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于其特征在于采集女金中药提取浓缩液近 红外光谱采集时，采用透射方式进行，每一张光谱都是1-1000次扫描的平均结果，分辨率 0. 3-20nm，扫描光谱范围为1100_2300nm。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集 时，采用透射方式进行，每一张光谱都是200-500次扫描的平均结果，分辨率l-5nm，扫描光 谱范围为1100-2300nm。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于采集女金中药提取浓缩液近红外光谱采集 时，采用透射方式进行，每一张光谱都是300次扫描的平均结果，分辨率2nm，扫描光谱范围 为 1100-2300nm。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于黄芪苷含量的测定条件为采用RP-HPLC对 连续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，色谱柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m，柱温 25°C )，流动相为甲醇-0. 4%磷酸溶液(42. 5 57. 5)，进样体积20uL，流速lml/min，UV检 测波长276nm。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9 点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-验证法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验 证。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2中模型的建立包括(1)一阶导数9 点平滑法(savitzky-golay)光谱预处理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-验证法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析软件建立模型；(3)模型校正和预测效果验 证；(4)精密度试验；(5)稳定性试验。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤如下步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；样品制备与收集按照处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液 另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60%乙醇回流提取两次，第一次2小时， 第二次1. 5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1. 30(50 60°C )以 上的清膏，备用。上述回流提取和浓缩过程中，每細in取样一次，样品采集近红外光谱，并 测定黄芩苷含量，分别取样50份、40份。样品黄芪苷含量分析采用RP-HPLC对连续收集的所有样品进行黄芩苷含量分析，分析条件色谱柱YMC ODS 分析柱(6\150讓，511111，柱温25°0，流动相为甲醇-0.4(%磷酸溶液02.5 57.5)，进样体积20uL，流速lml/min, UV检测波长276nm。重现性变异系数为0. 13% (n = 3)，图谱见 附图1-附图3。校正集样品结果带入软件建立模型，验证集样品用于模型验证。 获取OTR光谱扫描光谱时在样品溶液中浸入OTR光谱仪自带的光纤透射式探头，光纤长2m，待溶液 稳定并无气泡后进行扫描。测试条件为扫描次数300次，分辨率2nm，扫描光谱范围为 1100 2300nm。回流提取及浓缩液样品总光谱图，分别见附图4，附图5。步骤2、采用化学计量学软件分别建立女金中药提取浓缩液近红外光谱与浓缩液中黄 芪苷含量之间的对应模型；光谱预处理对扫描得到的原始吸收光谱进行光谱预处理，以消除噪音和基线漂移的 影响。采用的预处理方法为一阶导数9点平滑法(savitzky-golay)，一阶导数光谱图见附 图6，附图7。经一阶导数处理可以消除样品由于颜色差别引起的光谱基线偏移和漂移。建立PLSl数学模型回流提取和浓缩样品分别顺序编号，随机分别选择8个作为外部 验正集样品，其余作为建模样品。将经过预处理后的光谱数据与HPLC分析数据进行关联， 采用偏最小二乘法(PLSl)，交叉-验证法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析 软件建立模型。肌R和HPLC测定的异常值分别采用光谱影响值Leverage和化学值误差 Residual这2个统计量来检验剔除。经过异常值的剔除进行优化，得到较为理想的校正模 型。得到的样品黄芩苷的NIR光谱预测值与HPLC分析值之间相关性良好，测定数据偏差较 小。回流提取液黄芩苷模型的主成分维数为4，R2 = 0. 9794，RMSECV = 0. 066506 ；浓缩液 黄芩苷模型的主成分维数为4，R2 = 0. 9855，RMSECV = 0. 115755。 步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件获得待测的女金中药提取浓缩液样品中的黄芪苷。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于其中步骤1中，女金中药提取浓缩液的制备 及测定方法如下按女金胶囊处方，取陈皮、当归、白芷、川芎、蒿本用水蒸气蒸馏提取挥发油，蒸馏后的 水溶液另器收集；药渣与白芍、延胡索、黄芩、香附、没药用60%乙醇回流提取两次，第一次 2小时，第二次1. 5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1. 30(50 60°C)以上的清膏，备用；上述回流提取和浓缩过程中，连续取样，样品采集近红外光谱，并 测定黄芩苷含量。
全文摘要
本发明提供一种女金胶囊提取浓缩过程质量控制方法，包括如下步骤步骤1、测定合格女金中药提取浓缩液中黄芪苷含量，并采集近红外光谱；步骤2、采用化学计量学软件分别建立女金中药提取浓缩液近红外光谱与浓缩液中黄芪苷含量之间的对应模型；步骤3、测定待测的女金中药提取浓缩液样品的近红外光谱；步骤4、利用对应模型，通过化学计量学软件获得待测的女金中药提取浓缩液样品中的黄芪苷。
文档编号G01N21/35GK102106950SQ201110067859
公开日2011年6月29日 申请日期2011年3月21日 优先权日2011年3月21日
发明者孙晓波, 李胜华, 梅玲华, 王木兰, 耿炤, 胡浩武 申请人:江西汇仁药业有限公司