专利名称：一种检测含绿原酸类中药注射剂安全性的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测含绿原酸类中药注射剂安全性的方法。
背景技术：
中药注射剂临床不良反应已经成为中药现代化发展的巨大障碍，其中，休克是最严重，常常导致死亡的不良反应。从临床发生的休克案例来看，休克的发生可存在于首次用药、数日用药后和大量用药的过程中；即有迅速休克者，也有逐步衰竭后呈现休克死亡者。 可见，单纯以过敏性休克概括中药注射剂不良反应而进行质量控制和工艺水平的研究，具有较大的片面性。1.从质量控制出发的安全性生产措施并未能够有效避免中药注射剂休克不良反应的发生一直以来，认为中药注射剂发生休克不良反应的原因是中药注射剂达不到质量要求，也即中药静脉注射给药发生的休克等不良反应是由于生产工艺的提取、配置过程中，混杂物质未能够获得有效控制而存在于注射液中所致。因此，各生产企业加大了制剂工艺过程的质量控制，特别是2001年后，几个主要的中药注射液生产企业实现了指纹图谱质量控制和生产全过程的标准化，但是，临床应用中仍有休克不良反应的发生。可见，注射液本身药效成分导致休克的因素当为重点研究的对象。2.中药注射剂发生休克的反应具有多样性，血管性因素导致血流动力障碍多于过敏反应对于中药注射剂引发休克，既往主要着眼于导致过敏反应的有害因素。应该说这与青霉素等许多化学及生物药的临床过敏反应先入为主的思维影响有关。诚然，中药注射剂临床发生的休克有属过敏性休克者，在相关机制研究中发现鞣质、蛋白质等可刺激机体产生相应的抗体而造成过敏反应等。但是，从已经发生的休克反应及抢救结果来看，多数案例并没有像青霉素过敏休克的抢救那样成功。主要是因为其发生常常隐匿，呈渐进加重过程，出现休克征象时循环已近衰竭，并呈现大循环障碍与微循环异常不协调甚至矛盾的血流动力障碍，而且，可发生于首次用药、数日用药后和大量用药的过程中，无规律可循。综合分析显示，这是一种以微血管损害为起源的血流动力障碍，进而发生休克的病理生理过程。3.发挥治疗效应的药物组分具有在一定条件下引发血流动力障碍而致休克的倾向我们在以往的研究中发现，金银花中以绿原酸为核心的有机酸部分属于清开灵注射液的药效组分，在阻抑炎症反应上具有突出的效应，但其对血管内皮细胞的影响进而导致血流动力障碍又可引发休克病理生理过程。另外，其他在临床发生休克不良反应的中药注射液如双黄连粉针、鱼腥草注射液、正清风痛宁注射液、穿琥宁注射液等等均含有较大量的有机酸类物质。因此，研究该类物质引发休克的病理机制，从而探索一种检测含绿原酸类中药注射剂临床用药安全性的方法，避免该类注射液“毒性物质”引发休克等不良反应，具有重要的现实意义和经济价值。
发明内容
本发明目的在于提供一种检测含绿原酸类中药注射剂安全性的方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的分离血清，使用丙二醛(MDA)试剂盒进行MDA含量测定，计算MDA含量，血清中MDA含量彡4. 37nmol/mL·所述丙二醛(MDA)试剂盒可以从市场上购买。本发明优选如下技术方案(a)分离血清；(b)使用50T丙二醛(MDA)试剂盒(生产厂家南京建成生物工程研究所或南京建成科技有限公司)配制试剂试剂一液体IOmlX 1瓶，4°C保存；试剂二 液体6mlX 1瓶，每瓶加170ml双蒸水混勻，4°C冷藏；试剂三粉剂X 1支，将粉剂加入到90-100°C的双蒸水30ml中，(在溶解过程中可适当加热)，充分溶解后用双蒸水补足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的试剂避光室温
保存；标准品10n mol/ml四乙氧基丙烷5ml X 1瓶，4°C冷藏。(c)测定吸光度值 取血清样品、无水乙醇、标准品、试剂一、试剂二、试剂三、50 %冰醋酸，按如下配比分别配到4个试管中；取标准品、试剂一、3ml试剂二、Iml试剂三，配制成标准管；取无水乙醇、试剂一、 3ml试剂二，Iml试剂三，配制成标准空白管；取血清样品、试剂一、3ml试剂二，Iml试剂三， 配制成测定管；取血清样品、试剂一、3ml试剂二，lml50%冰醋酸，配制成测定空白管；4个试管中血清样品、试剂一、无水乙醇和标准品的用量均相同，为0. 1-0. 2ml ；将试管中试剂混勻，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴(或用锅开盖煮沸)40分钟，取出后流水冷却，532nm处，Icm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度值。(d)计算血清中MDA含量按以下计算公式计算出血清中MDA含量
权利要求
1.一种检测含绿原酸类中药注射剂安全性的方法，其特征在于该方法包括以下步骤分离血清，使用MDA试剂盒进行MDA含量测定，并计算MDA含量，血清中MDA含量 ^ 4. 37nmol/ml。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于该方法包括以下步骤(a)分离血清；(b)使用南京建成生物工程研究所或南京建成科技有限公司生产的50T丙二MDA试剂盒，配制试剂；试剂一液体IOml X 1瓶，4°C保存；试剂二 液体6ml X 1瓶，每瓶加170ml双蒸水混勻，4°C冷藏；试剂三粉剂Xl支，将粉剂加入到90-100°C的双蒸水30ml中，充分溶解后用双蒸水补足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的试剂避光室温保存； 标准品10n mol/ml四乙氧基丙烷5mlXl瓶，4°C冷藏；(c)测定吸光度值取血清样品、无水乙醇、标准品、试剂一、试剂二、试剂三、50%冰醋酸，按如下配比分别配到4个试管中；取标准品、试剂一、3ml试剂二、Iml试剂三，配制成标准管；取无水乙醇、试剂一、3ml试剂二，Iml试剂三，配制成标准空白管；取血清样品、试剂一、3ml试剂二，Iml试剂三，配制成测定管；取血清样品、试剂一、3ml试剂二，lml50%冰醋酸，配制成测定空白管；4个试管中血清样品、试剂一、无水乙醇和标准品的用量均相同，为0. 1-0. 2ml ；将试管中试剂混勻，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴40分钟，取出后流水冷却，532nm处，Icm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度值；(d)按以下计算公式计算出血清中MDA含量
3.MDA试剂盒在制备检测含绿原酸类中药注射剂安全性的制剂中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种检测含绿原酸类中药注射剂安全性的方法。该方法为分离血清，使用丙二醛(MDA)试剂盒进行MDA含量测定，并计算MDA含量，血清中MDA含量≥4.37nmol/ml。本发明经过实验研究发现中药注射液中绿原酸在大量使用时会增加血清中过氧化损伤产物MDA(丙二醛)的含量，应当预先引起警惕。可将血清中MDA含量作为检测含绿原酸类中药注射剂安全性生物试剂盒的目标因子。
文档编号G01N21/31GK102200505SQ20111007107
公开日2011年9月28日 申请日期2011年3月23日 优先权日2011年3月23日
发明者常铖, 李卫红, 李澎涛, 王甫, 胡京红, 都文渊 申请人:北京中医药大学