专利名称：一种银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法
技术领域：
本发明属生物组 织学研究技术领域，特别是涉及一种银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法。
背景技术：
组织切片在生物的组织学研究中具有十分重要的作用。通过组织切片技术可以从显微层次研究生物器官与组织中的细胞学特征及其变化。鱼类的性腺是生殖系统中的重要器官，其中的性细胞具有周期性的变化特征，通过组织切片观察其细胞学变化弄清其发生、 发育和成熟的过程及规律在鱼类繁殖生物学中具有重要的意义。因而，鱼类性腺的组织学被广泛应用于多种鱼类中。对于银鲳成鱼来说，由于其性腺较大且容易取得与固定，因而切片过程较容易。然而，对于银鲳仔稚幼鱼等较小的个体来说，其性腺组织较小，甚至不能用肉眼找到。目前，仔稚幼鱼性腺组织学研究多采用连续切片，但由于该时期的性腺组织较小，有时候甚至仅含有少数几个性细胞，并且腊块中包含难以切片的鱼骨组织，这均给切片工作带来了一定的难度。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种流程简单且操作简单的银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是提供一种银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法，包括下列步骤，(1)取新鲜仔稚幼鱼尸体，对其进行生物学数据测定并编号；(2)将测定后的新鲜仔稚幼鱼尸体置于戴维森(Davidson’ s AFA)固定液中进行固定24h，然后转入70%乙醇中保存；对于全长< 3cm的仔稚鱼，采用全鱼固定的方式，而对于全长> 3cm的幼鱼，将其头部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，将其后腹部进行固定；(3)取出固定的新鲜仔稚幼鱼尸体进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋处理，包埋时新鲜仔稚幼鱼尸体水平放置，以方便对其进行横向切片；(4)将包埋好的腊块置于切片机上进行切片，对于全长< 3cm的仔稚鱼，保留所有的蜡带；对于全长> 3cm的幼鱼，先快速切除其表皮层，然后开始进行正式切片，切片厚度为4-6 μ m，待新鲜仔稚幼鱼尸体切至腹腔的后壁后停止切片；(5)收集蜡带，在贴片烤片后，做常规HE染色与观察。所述的戴维森固定液配方为95%乙醇330ml、甲醛220ml、冰醋酸115ml和单蒸水 335ml ο有益效果本发明根据固定液的性质与银鲳仔稚幼鱼性腺组织的分布情况设计一套简单有效的银鲳仔稚幼鱼性腺组织切片方法。本发明流程简单，操作简单，以Davidson’ s AFA固定液代替常规的波恩氏固定液以增加固定液的穿透力并软化鱼骨组织，有助于提高固定与切片的效果；同时，对于较大的银鲳仔稚幼鱼尸体切除不包含性腺的部分组织以减少整个操作过程的费时；性腺切出率高，无须特殊或昂贵的仪器。本发明可以用于银鲳仔稚幼鱼性腺组织学切片，也适用于其它鲳属鱼类及鲆鲽类水产生物性腺分化与性别决定研究，具有广泛的适用性。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例11)取新鲜的银鲳仔鱼尸体(全长1. 1cm)，测定其生物学数据并编号；2)将测定后的新鲜仔稚幼鱼尸体置于Davidson’ s AFA固定液中进行固定24h，然后转入70%乙醇中保存；3)取出固定的新鲜仔稚幼鱼尸体进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋处理，包埋时新鲜仔稚幼鱼尸体水平放置，以方便对其进行横向切片；4)将包埋好的腊块置于切片机上进行切片，保留所有蜡带，至石蜡块中的新鲜仔稚幼鱼尸体切净后停止切片；5)收集蜡带，在贴片与烤片后，做常规HE染色与观察。实施例21)取新鲜的银鲳仔鱼尸体(全长3. 5cm)，测定其生物学数据并编号；2)将测定后的新鲜仔稚幼鱼尸体置于操作台上，用解剖刀切出其头部、尾部、背部肌肉及前半腹部组织，将剩余的后半腹部置于Davidson’ s AFA固定液中进行固定24h，然后转入70%乙醇中保存；3)取出固定的新鲜仔稚幼鱼尸体进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋处理，包埋时新鲜仔稚幼鱼尸体水平放置，以方便对新鲜仔稚幼鱼尸体进行横向切片；4)将包埋好的腊块置于切片机上进行切片，首先快速切除银鲳的表皮组织，然后开始调整切片厚度至4-6 μ m开始正常切片，待到新鲜仔稚幼鱼尸体切至一半后露出腹腔的后侧内壁时停止切片；5)收集蜡带，在贴片与烤片后，做常规HE染色与观察。
权利要求
1.一种银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法，其特征在于包括下列步骤，(1)取新鲜仔稚幼鱼尸体，对其进行生物学数据测定并编号；(2)将测定后的新鲜仔稚幼鱼尸体置于戴维森固定液中进行固定24h，然后转入70% 乙醇中保存；对于全长< 3cm的仔稚鱼，采用全鱼固定的方式，而对于全长> 3cm的幼鱼，将其头部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，将其后腹部进行固定；(3)取出固定的新鲜仔稚幼鱼尸体进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋处理，包埋时新鲜仔稚幼鱼尸体水平放置，以方便对其进行横向切片；(4)将包埋好的腊块置于切片机上进行切片，对于全长<3cm的仔稚鱼，保留所有的蜡带；对于全长> 3cm的幼鱼，先快速切除其表皮层，然后开始进行正式切片，切片厚度为 4-6 μ m，待新鲜仔稚幼鱼尸体切至腹腔的后壁后停止切片；(5)收集蜡带，在贴片与烤片后，做常规HE染色与观察。
2.根据权利要求1所述的一种银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法，其特征在于所述的戴维森固定液配方为95%乙醇330ml、甲醛220ml、冰醋酸115ml和单蒸水335ml。
全文摘要
本发明涉及一种银鲳仔稚幼鱼性腺切片方法，首先将新鲜的银鲳仔稚幼鱼尸体测定并采用Davidson’s AFA固定液中进行固定，并切除不含性腺的部分组织与器官，然后对其余部分做常规石蜡切片、HE染色与观察。本发明可以用于银鲳仔稚幼鱼性腺组织学切片，也适用于其它鲳属鱼类及鲆鲽类水产生物性腺分化与性别决定研究，具有广泛的适用性。
文档编号G01N1/06GK102221484SQ20111010117
公开日2011年10月19日 申请日期2011年4月21日 优先权日2011年4月21日
发明者孙鹏, 尹飞, 彭士明, 施兆鸿 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所