专利名称：一种草石蚕水苏糖检测方法
技术领域：
本发明属于草石蚕水苏糖检测方法。
背景技术：
水苏糖(Stachyose)是自然存在的一种功能性低聚四糖,其结构清晰、稳定性高、低甜度、低热量，具有促进肠道双歧杆菌増殖，预防龋齿，防治便秘等一系列的生理功效而日益受到世界各国的广泛关注。国际上水苏糖主要是从大豆乳清中提取，不仅エ艺复杂，而且产品纯度低。近年来研究发现，我国传统名特蔬菜草石蚕中水苏糖含量丰富(鲜基水苏糖含量10% — 15% )，目前国内已有个别厂家开始以草石蚕为原料生产水苏糖。
但是伴随着生产，需要一种对产品的检测方法。
发明内容
本发明就是针对上述问题，提供一种能对草石蚕水苏糖进行定性分析和定量分析的草石蚕水苏糖检测方法。对于上述目的，本发明是这样实现的一种草石蚕水苏糖检测方法，包括薄层层析法和高效液相色谱法，其中薄层层析法用于对产品的定性分析，高效液相色谱法用于对产品的定量分析。本发明的有益效果本发明将薄层层析法和高效液相色谱法两种方法结合使用，分别完成定性分析和定量分析，分析过程高效、快速、高分辨率，分析结果准确，对设备和费用要求较低。
图I为展开系统5对各糖分的分离效果。图2为点样量的确定。图3为样品色谱图。图4为水苏糖标准曲线。
具体实施例方式薄层层析法(TLC)①溶液的配制；分别配制浓度为5mg/mL的标准葡萄糖、蔗糖、棉籽糖和水苏糖溶液，井根据试验配制显色剂和不同的展开剂。②点样；先用溶剂润洗微量注射器3次，再用样品溶液清洗3次。用微量注射器将I. Ou L糖液分多次点加到板上，边点样边用吹风机吹干点样原点，以便溶剂迅速挥发,原点面积不宜太大，控制点样斑点直径不超过2_。点样时注意不要戳破薄层板，以免形成不规则色斑。薄层点样力求迅速，因为薄层板暴露时间太长，会吸收空气中水分而改变活度，影响分离效果。
③展层；首先将展层剂倒入缸内，待缸内被展层剂蒸汽饱和，然后将点好样的薄层板底边向下轻轻斜置缸内溶剂中，注意展层液面不得超过点样线，密封好层析缸。当展层溶剂到达距薄板顶端约2cm处时，取出薄板晾干，前沿用铅笔作ー记号。④显色；将配好的显色剂均匀喷雾在薄层上，于105°C烘箱内加热至层析斑点显现，取出冷却至室温。⑤定性鉴定；薄层显色后，记录各斑点至原点的距离，测算Rf 值。与标准样品Rf值比较，确定测定样品中所分离的各个斑点分别为何种糖。高效液相色谱法(HPLC)①进样前，如果提取液样品颜色较深或浑浊，用0. 45 y m水相微孔膜过滤除去色素等杂质再上机測定。②高效液相法检测水苏糖的色谱条件采用示差折光检测器(RID)，选用色谱柱 TIANHEKromasil NH2 柱(250mmX 4. 6mmi. d.，5 u m),流动相为こ臆/水(55/45, v/v),柱温为30°C，流速为I. OmL/min,进样体积10 Uし③水苏糖标准曲线制作准确称取水苏糖标准品IOOmg于IOmL容量瓶中，用超纯水溶解定容摇勻后，即得10mg/mL的标准溶液,再以此逐级稀释成8mg/mL,6mg/mL,4mg/mL,2mg/mL, lmg/mL的标准溶液系列，均经0. 45 y m微孔膜过滤，滤液供进样用。将不同浓度的水苏糖标准品分别上机进样分析，进样量均为IOy L，每样作3次重复，取平均值，以水苏糖的浓度(X，mg/mL)与它们对应的峰面积(Y)进行线性回归，绘制水苏糖的标准曲线。④精密度实验。精确称取水苏糖IOmg,用水定容至IOmL,配置成为I. Omg/mL标准溶液浓度，按上述色谱条件精确吸取标准溶液10 U L，重复进样5次，根据峰面积计算相对标准偏差(RSD)。⑤加标回收率实验。取已知含量的样品粉末I. Og，定量加入水苏糖标准品，按上述色谱条件进样測定，每份样品測定3次，将测得的峰面积代入回归方程计算样品中水苏糖含量，并计算出回收率。⑥样品液检测。每个样均重复进样3次取其峰面积平均值代入标准曲线方程，计算得出样品液中水苏糖浓度。展开系统的选择水苏糖提取液经高效液相色谱测定，其主要糖分组成为水苏糖、棉籽糖、蔗糖及葡萄糖，因此针对这四种糖分的分离进行最适展开剂的筛选。配制不同的展开系统，展开系统I :无水こ醇こ酸こ酯水氨水=10 10 2 I ;展开系统2 :正丁醇异丙醇こ酸水=7 : 5 : 2 : 4 ;展开系统3 :こ酸こ酯甲醇水冰醋酸=12 : 6 : 3 : 2 ;展开系统4 :正丁醇こ酸こ酯异丙醇冰醋酸吡啶水=7 : 20 : 12 : 7 : 6 : 6 ;展开系统5 :こ酸こ酯甲醇水冰醋酸=3:2:1:2 ;展开系统6 :こ酸こ酯无水こ醇水冰醋酸=3 : 2 : I : 2。将相同点样的薄板分别放入盛有不同展开剂的层析缸中展层。不同展开系统对各糖分的分离情况见表I。表I不同展开系统组分配比及分离情况比较
权利要求
1.一种草石蚕水苏糖检测方法，其特征在于包括薄层层析法和高效液相色谱法，其中薄层层析法用于对产品的定性分析，高效液相色谱法用于对产品的定量分析。
2.根据权利要求I所述的ー种草石蚕水苏糖检测方法，其特征在于薄层层析法过程为①溶液的配制；分别配制浓度为5mg/mL的标准葡萄糖、蔗糖、棉籽糖和水苏糖溶液，并根据试验配制显色剂和不同的展开剂； ②点样；先用溶剂润洗微量注射器3次，再用样品溶液清洗3次；用微量注射器将I. Ou L糖液分多次点加到板上，边点样边用吹风机吹干点样原点，以便溶剂迅速挥发,原点面积不宜太大，控制点样斑点直径不超过2_ ;点样时注意不要戳破薄层板，以免形成不规则色斑。薄层点样力求迅速，因为薄层板暴露时间太长，会吸收空气中水分而改变活度，影响分离效果； ③展层；首先将展层剂倒入缸内，待缸内被展层剂蒸汽饱和，然后将点好样的薄层板底边向下轻轻斜置缸内溶剂中，注意展层液面不得超过点样线，密封好层析缸；当展层溶剂到达距薄板顶端约2cm处时，取出薄板晾干，前沿用铅笔作ー记号； ④显色；将配好的显色剂均匀喷雾在薄层上，于105°C烘箱内加热至层析斑点显现，取出冷却至室温； ⑤定性鉴定；薄层显色后，记录各斑点至原点的距离，测算Rf值；与标准样品Rf值比较，确定测定样品中所分离的各个斑点分别为何种糖。
3.根据权利要求I所述的ー种草石蚕水苏糖检测方法，其特征在于高效液相色谱法过程为①进样前，如果提取液样品颜色较深或浑浊，用0. 45 y m水相微孔膜过滤除去色素等杂质再上机测定； ②高效液相法检测水苏糖的色谱条件采用示差折光检测器(RID)，选用色谱柱TIANHEKromasil NH2 柱(250mmX 4. 6mmi. d.，5 u m),流动相为こ臆/水(55/45, v/v),柱温为30°C，流速为I. OmL/min,进样体积10 u L ； ③水苏糖标准曲线制作准确称取水苏糖标准品IOOmg于IOmL容量瓶中，用超纯水溶解定容摇勻后，即得10mg/mL的标准溶液,再以此逐级稀释成8mg/mL,6mg/mL,4mg/mL,2mg/mL, lmg/mL的标准溶液系列，均经0. 45 y m微孔膜过滤，滤液供进样用。将不同浓度的水苏糖标准品分别上机进样分析，进样量均为IOy L，每样作3次重复，取平均值，以水苏糖的浓度(X，mg/mL)与它们对应的峰面积(Y)进行线性回归，绘制水苏糖的标准曲线； ④精密度实验；精确称取水苏糖10mg，用水定容至IOmL,配置成为I.Omg/mL标准溶液浓度，按上述色谱条件精确吸取标准溶液10 U L，重复进样5次，根据峰面积计算相对标准偏差(RSD)； ⑤加标回收率实验；取已知含量的样品粉末I.Og,定量加入水苏糖标准品，按上述色谱条件进样測定，每份样品測定3次，将测得的峰面积代入回归方程计算样品中水苏糖含量，并计算出回收率； ⑥样品液检测；每个样均重复进样3次取其峰面积平均值代入标准曲线方程，计算得出样品液中水苏糖浓度。
全文摘要
一种草石蚕水苏糖检测方法属于草石蚕水苏糖检测方法。本发明提供一种能对草石蚕水苏糖进行定性分析和定量分析的草石蚕水苏糖检测方法。本发明包括薄层层析法和高效液相色谱法，其中薄层层析法用于对产品的定性分析，高效液相色谱法用于对产品的定量分析。
文档编号G01N30/02GK102866210SQ20111018996
公开日2013年1月9日 申请日期2011年7月8日 优先权日2011年7月8日
发明者冯禹博 申请人:冯禹博