专利名称：一种分析检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，特别涉及一种分析检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的方法。
背景技术：
在食品安全检测领域，食品添加剂一直是人们关注的焦点。这是因为食品添加剂通常种类多，并且常常存在使用不规范的问题。近年来，随着人们生活水平的提高，高脂肪、高蛋白、精细食品的大量摄入，“三高”人群越来越多；而膳食纤维在改善营养平衡有独到的功效，因此常作为食品添加剂加入到食品中。菊粉(聚合度为2-60的果聚糖的混合物，通常商品化菊粉中果聚糖的平均聚合度为10-30)作为是一类天然的膳食纤维，几乎存在于所有的植物中，它是除淀粉外植物的另一种能量储存的形式。许多的研究表明，菊粉能降低 人和动物的血脂水平、血糖；还能大大提闻Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+等矿物质的吸收；促使肠道双歧杆菌增多；防便秘及治疗肥胖症。为此，近期卫生部食品安全综合协调与卫生监督局正式批准以菊苣为原料，去除蛋白质和矿物质后，经喷雾干燥等步骤获得的菊粉可用于生产各类食品。但是对于这种食品添加剂的使用，也明文规定了使用范围不包括婴幼儿食品。在我国，类似允许添加在婴幼儿食品的主要是低聚果糖(聚合度为2-9之间的果糖聚合物的混合物)。因此，建立筛查食品中是否含有添加菊粉的分析方法，对应对食品安全突发事件具有十分重要的现实意义。然而，目前关于菊粉的分析方法在国际上主要采用检测果聚糖的方法，主要有两种AOAC方法(或者是这两种方法的改进)，即AOAC 997. 08 (离子交换色谱法)和AOAC 999. 03 (分光光度法)。但是其原理都一样的用菊粉酶将食品中的菊粉(不同聚合度的果聚糖)水解成果糖，测出果糖含量后，再折算菊粉的量。但是，在实际应用中是难于区分低聚果糖和菊粉的，这是因为采用上述的分析方法的实质是检测水解后的果糖，而上述这些果聚糖都可以水解为果糖。目前的现状是尚无实现这种区别的分析方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题就是现有的菊粉分析测试方法无法区分测试婴幼儿奶粉中菊粉与低聚果糖的局限，从而导致测试结果准确率难以提高的缺陷，提供了一种能够不受低聚果糖干扰，检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的分析方法。本发明通过下述技术方案解决上述技术问题本发明提供了一种分析检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的方法，其包括以下步骤(I)采用超滤法去除婴幼儿配方奶粉中的生物大分子，以获得能够直接进行高效液相色谱法分析的样品溶液；(2)按下述方法测试婴幼儿配方奶粉中的低聚果糖和总果聚糖的含量①低聚果糖含量测试用高效液相色谱法测定步骤(I)的样品溶液中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、乳糖和蔗糖的浓度，并计算奶粉中蔗果三糖的百分含量i3、蔗果四糖的百分含量i4、蔗果五糖的百分含量i5、乳糖的百分含量Las1和蔗糖的百分含量S1 ；②总果聚糖含量测试用菊粉酶对步骤(I)的样品溶液进行酶解处理，离心超滤去除菊粉酶后得到酶解产物样品，所述酶解产物样品作为高效液相色谱分析的样品溶液，用高效液相色谱法测定并计算奶粉中由菊粉酶解产生的果糖的总百分含量Ft、由菊粉酶解产生的葡萄糖百分含量Gt和尚未酶解的残余乳糖的百分含量Las2;所述菊粉酶的用量为20-100U菊粉酶处理O. 14g所述奶粉；上述各含量皆为质量百分含量；(3)根据下述公式a换算婴幼儿配方奶粉中菊粉的质量百分含量i6
权利要求
1.一种分析检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的方法，其包括以下步骤 (1)采用超滤法去除婴幼儿配方奶粉中的生物大分子，以获得能够直接进行高效液相色谱法分析的样品溶液； (2)按下述方法测试婴幼儿配方奶粉中的低聚果糖和总果聚糖的含量 ①低聚果糖含量测试用高效液相色谱法测定步骤(I)的样品溶液中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、乳糖和蔗糖的浓度，并计算奶粉中蔗果三糖的百分含量i3、蔗果四糖的百分含量i4、蔗果五糖的百分含量i5、乳糖的百分含量Las1和蔗糖的百分含量S1 ； ②总果聚糖含量测试用菊粉酶对步骤(I)的样品溶液进行酶解处理，离心超滤去除菊粉酶后得到酶解产物样品，用高效液相色谱法测定并计算奶粉中由菊粉酶解产生的果糖的总百分含量Ft、葡萄糖的总百分含量Gt以及尚未酶解的残余乳糖的百分含量Las2 ;所述菊粉酶的用量为20-100U菊粉酶处理O. 14g所述奶粉；上述各含量皆为质量百分含量； (3)根据下述公式a换算婴幼儿配方奶粉中菊粉的质量百分含量i6
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于步骤(I)中，所述超滤法按下述步骤进行将所述婴幼儿配方奶粉的水溶液离心，取上清液进行离心超滤。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述婴幼儿配方奶粉的水溶液是将所述婴幼儿配方奶粉溶于热水中搅拌得到，所述水的用量较佳地为Ig奶粉/5-30ml水。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于步骤(I)中，所述离心的转速为12000-14000rpm，所述离心的时间为5_10分钟，所述离心的温度为4°C ;所述离心超滤使用的超滤管的截留分子量为10KD，所述离心超滤的离心力为3700g，所述离心超滤的时间为30分钟。
5.如权利要求I所述的方法，其特征在于步骤②中，在进行离心超滤去除菊粉酶时，所述离心超滤使用的超滤管的截留分子量为10KD，所述离心超滤的条件为在3700g的离心力下离心超滤30分钟。
6.如权利要求I所述的方法，其特征在于步骤①和②中，所述的高效液相色谱法采用高效液相色谱-示差折光法进行。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤①中，所述高效液相色谱-示差折光法的检测条件为柱温检测温度40°C，流速1. Oml/min，进样量20μ 1，流动相体积比乙腈水=80 : 20 ;分离柱为Spherisorb ΝΗ2氨基柱； 步骤②中，所述高效液相色谱-示差折光法的检测条件为柱温检测温度40°C，流速I. Oml/min,进样量20 μ 1，流动相体积比:乙腈:水=90 : 10 ;分离柱为Spherisorb ΝΗ2氨基柱。
8.如权利要求I所述的方法，其特征在于步骤②中，所述酶解处理的具体操作步骤为将所述菊粉酶与步骤(I)所述的样品溶液混合，再与醋酸缓冲溶液，在60°C和pH值为4.5的条件下恒温酶解O. 5-12小时。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于步骤②中，所述醋酸缓冲溶液的用量为使醋酸在菊粉酶、所述醋酸缓冲溶液以及所述样品溶液的混合体系中的浓度为lOOmM。
10.如权利要求1、5-9中的任一项所述的方法，其特征在于所述的菊粉酶在用于酶解处理前先进行离心超滤处理，所述的离心超滤按下述步骤进行将所述菊粉酶用醋酸缓冲液，以3700g的离心力离心超滤3次，每次20分钟，即可；其中所述离心超滤的超滤管的截留分子量为10KD。
全文摘要
本发明提供了一种分析检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的方法，(1)采用超滤法去除婴幼儿配方奶粉中的生物大分子；(2)测试婴幼儿配方奶粉中的低聚果糖和总果聚糖的含量用高效液相色谱法测定并计算奶粉中蔗果三糖的百分含量i3、蔗果四糖的百分含量i4、蔗果五糖的百分含量i5、乳糖的百分含量Las1和蔗糖的百分含量S1。用菊粉酶对样品溶液酶解，离心超滤后，用高效液相色谱法测定并计算经酶解的样品中果糖百分含量Ft、葡萄糖百分含量Gt和尚未酶解的残余乳糖的百分含量Las2；根据公式a换算菊粉的百分含量i6；其中转换系数k为0.9。本发明的检测方法具有很高的准确性，能够成功检测婴幼儿配方奶粉中菊粉的含量。
文档编号G01N30/74GK102955009SQ20111024946
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月26日 优先权日2011年8月26日
发明者曹旭妮, 徐晓婧, 夏琨 申请人:华东理工大学