专利名称：一种检测人体呼出气体中no含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测人体呼出气体中NO含量的方法。
背景技术：
目前，检测呼出气体中NO含量，有商业的NO测定仪，这种专门的检测设备，需消耗标准气体，操作复杂、费时。其他的呼出气中NO的比较传统检测方法化学发光法，它需在臭氧存在下将NO激发为激发态NO2 ，NO2 ·再放出光生成稳定的NO2,通过检测其放出的光对NO进行检测，这种方法不但要样品收集、预处理，而且还需要臭氧辅助。分光光度法同样需要将样品收集冷凝，它主要利用NO极易容易氧化成N02_，在酸性条件下N02_促使反应 Griess发生而生成重氮化合物，再以分光光度法检测重氮化合物实现对NO检测；荧光法利用N02_在酸性条件下与DNA发生反应生成的荧光物质的检测达到对NO的检测；电化学法测定的基本原理是利用NO与&反应，O2容易得电子而被还原，而NO则极易放出电子而被氧测定反应时电流；波普法利用NO与血红蛋白的α-链结合，在ESR波谱上表现出具有三线特征的ESR信号等。简而言之，这些方法都需要一定的前处理和各种化学、衍生反应才能后进行检测，不但灵敏度不高而且过程繁琐、耗时耗力，大大降低了 NO检测的临床价值。
发明内容
本发明的目的就是提供一种简便、快速、灵敏度高的检测人体呼出气体中NO含量的方法。本发明的检测人体呼出气体中NO含量的方法，包括以下步骤
1、以3-氧代-2-苯基-4，4，5，5-四甲基咪唑啉-1-氧(PTIO)为溶质，甲醇为溶剂，配制成50ppb的PTIO试剂溶液，备用；
2、调试电喷雾萃取电离源，萃取剂引入管与水平面的夹角为140-145°，萃取剂载气管套在萃取剂引入管上，萃取剂引入管上加有3. 5-4 kv高压电极，喷雾辅助气N2、气压为 1. 6MPa通入萃取剂载气管中，萃取剂甲醇以流速为6 μ L/min通入萃取剂引入管1中，萃取剂载气管、萃取剂引入管通过上支架固定；样品引入管与萃取剂引入管的夹角为70-80°， 样品载气管套在样品引入管上，样品载气管、样品引入管通过下支架固定，喷雾辅助气N2、 气压为1. 通入样品载气管中，将被测试样品以流速为6 μ L/min通入样品引入管2中； 调节萃取剂引入管和样品引入管的喷雾交叉点与质谱仪离子传输管入口在同一水平线上， 并且萃取剂引入管和样品引入管喷雾出口均与质谱入口的距离为10mm，两个喷雾口的垂直距离为2mm ；
3、质谱条件质谱条件设置为正离子检测模式；质谱扫描范围为50 600Da，离子源电压为3. 5-4 kV，离子传输管温度250-300 V ；
4、呼出气体中NO测定，测试者通过吹气管均勻稳定的呼出气体通入5-10mL上述PTIO 试剂溶液中，时间5-6 min，再将测试者吹过气的PTIO试剂溶液，通过样品引入管，进行质谱检测，得到m/z 219，NO与PTIO反应后的产物的质荷比相对应的强度，再通过NO浓度对m/z219的响应信号强度的标准曲线，得到呼出气体中NO含量。本发明的检测人体呼出气体中NO含量的方法，工作原理是电喷雾萃取电离源主要由电喷雾通道和样品通道两部分以一定角度交叉组成。萃取溶液流入石英毛细管，并在鞘气的作用下雾化成细小的液滴，然后通过电晕放电使其带电，带电的液滴与从样品通道产生的样品液滴在空间进行碰撞融合，发生液-液萃取和电荷转移作用，继而发生去溶作用，从而获得待测物的离子，供后续质谱分析。本发明的检测人体呼出气体中NO含量的方法，无需对样品预处理，具有特异性强和灵敏度高的特点，PTio具有较好的稳定性，可以选择性和NO反应，该反应灵敏，另外该方法集样品收集和处理于一体，所消耗试剂量极少，操作便捷简单，在短时间内即可完成检测，且质谱灵敏度较高，稳定性好，突破传统方法存在的缺陷，实现对人体呼出气中NO的快速、灵敏监测。
图1为本发明检测人体呼出气体NO含量原理示意图。
具体实施例方式一种检测人体呼出气体中NO含量的方法，包括以下步骤
1、以3-氧代-2-苯基-4，4，5，5-四甲基咪唑啉-1-氧(PTIO)为溶质，甲醇为溶剂，配制成50ppb的PTIO试剂溶液，备用；
2、调试电喷雾萃取电离源，萃取剂引入管1与水平面的夹角α为145°，萃取剂载气管 3套在萃取剂引入管1上，萃取剂引入管1上加有3. 5kv高压电极5，喷雾辅助气队、气压为 1. 6MPa通入萃取剂载气管3中，萃取剂甲醇以流速为6 μ L/min通入萃取剂引入管1中，萃取剂载气管3、萃取剂引入管1通过上支架6固定；样品引入管2与萃取剂引入管1的夹角 β为70°，样品载气管4套在样品引入管2上，样品载气管4、样品引入管2通过下支架7 固定，喷雾辅助气N2、气压为1. 6ΜΙ^通入样品载气管4中，将被测试样品以流速为6 μ L/min 通入样品引入管2中；调节萃取剂引入管1和样品引入管2的喷雾交叉点与质谱仪离子传输管入口在同一水平线上，并且萃取剂引入管1和样品引入管2喷雾出口均与质谱入口的距离a为10mm，两个喷雾口的垂直距离b为2mm ；
3、质谱条件质谱条件设置为正离子检测模式；质谱扫描范围为50 600Da，离子源电压为3. 5kV，离子传输管温度250 0C ；
4、呼出气体中NO测定，测试者通过吹气管均勻稳定的呼出气体通入5-10mL上述PTIO 试剂溶液中，时间5 min，再将测试者吹过气的PTIO试剂溶液，通过样品引入管2，进行质谱检测，得到m/z 219，NO与PTIO反应后的产物的质荷比相对应的强度，再通过NO浓度对m/ z219的响应信号强度的标准曲线，得到呼出气体中NO含量。
权利要求
1. 一种检测人体呼出气体中NO含量的方法，其特征在于它包括以下步骤(a)、以3-氧代-2-苯基-4，4，5，5-四甲基咪唑啉-1-氧(PTIO)为溶质，甲醇为溶剂， 配制成50ppb的PTIO试剂溶液，备用；(b)、调试电喷雾萃取电离源，萃取剂引入管(1)与水平面的夹角α为140-145°，萃取剂载气管(3 )套在萃取剂引入管(1)上，萃取剂引入管(1)上加有3. 5kv高压电极(5 )，喷雾辅助气N2、气压为1. 6MPa通入萃取剂载气管(3)中，萃取剂甲醇以流速为6 μ L/min通入萃取剂引入管(1)中，萃取剂载气管(3)、萃取剂引入管(1)通过上支架(6)固定；样品引入管 (2)与萃取剂引入管(1)的夹角β为70-80°，样品载气管(4)套在样品引入管(2)上，样品载气管(4)、样品引入管(2)通过下支架(7)固定，喷雾辅助气N2、气压为1. 6MPa通入样品载气管(4)中，将被测试样品以流速为6 μ L/min通入样品引入管(2)中；调节萃取剂引入管(1)和样品引入管(2)的喷雾交叉点与质谱仪离子传输管入口在同一水平线上，并且萃取剂引入管(1)和样品引入管(2)喷雾出口均与质谱入口的距离a为10mm，两个喷雾口的垂直距离b为2mm ；(c)、质谱条件质谱条件设置为正离子检测模式；质谱扫描范围为50 600Da，离子源电压为3. 5-4 kV，离子传输管温度250-300 V ；(d)、呼出气体中NO测定，测试者通过吹气管均勻稳定的呼出气体通入5-10mL上述 PTIO试剂溶液中，时间5-6 min,再将测试者吹过气的PTIO试剂溶液，通过样品引入管(2)， 进行质谱检测，得到m/z 219，NO与PTIO反应后的产物的质荷比相对应的强度，再通过NO 浓度对m/z219的响应信号强度的标准曲线，得到呼出气体中NO含量。
全文摘要
一种检测人体呼出气体中NO含量的方法，以PTIO(3-氧代-2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-1-氧)为NO的氧化剂，采用电喷雾萃取电离质谱法，直接快速地检测人体呼出气体中NO的含量。本发明的方法，无需对样品预处理，具有特异性强和灵敏度高的特点，PTIO具有较好的稳定性，可以选择性和NO反应，该反应灵敏，另外该方法集样品收集和处理于一体，所消耗试剂量极少，操作便捷简单，在短时间内即可完成检测，且质谱灵敏度较高，稳定性好，突破传统方法存在的缺陷，实现对人体呼出气中NO的快速、灵敏监测。
文档编号G01N27/64GK102507720SQ201110348888
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月8日 优先权日2011年11月8日
发明者丁健桦, 张兴磊, 张燕, 欧阳永中, 肖赛金, 陈焕文, 黄艳红 申请人:东华理工大学