专利名称：一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法
技术领域：
本发明属于鱼类外周神经的染色领域，特别涉及一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法。
背景技术：
神经系统对鱼类的生命活动很重要，它由脑、脑神经、脊髓与脊神经构成，脑和脊髓为中枢神经，脑神经与脊神经为外周神经；鱼类外周神经系统分布的研究可以为鱼类起源与进化及生理功能的研究提供重要依据。有关鱼类外周神经分布的研究方法报道国内尚未见到，国外相关报道主要集中在以下几个方面苏木素神经染色法，该方法染色效果不佳；软骨、硬骨、神经三重染色法，主要过程首先用阿利新蓝将软骨染为蓝色，其次用茜素红将硬骨染为红色，最后外周神经经苏丹黑染色后，显黑色，染色效果良好，但该染色过程较为烦琐。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，该方法操作简单、所需试剂少，大大缩短了染色时间，也无须昂贵的试剂和特殊的仪器。本发明的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，包括(1)用IOvol %福尔马林固定鱼体标本48 Mh，将固定好的鱼体标本冲洗 12-24h ；(2)将上述鱼体放入容器中，加入0. 5wt% KOH溶液直至将鱼体淹没，放置l_2h ；(3)向上述溶液中滴加浓度为3 4Vol% H2O2溶液，将容器置于白炽灯下过夜，以加速褪去鱼表皮色素；(4)对鱼体进行酒精脱水处理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各 30 40min ；(5)将鱼体浸入30wt% _50wt%苏丹黑溶液中进行神经染色，染色时间为8_12h ；(6)对鱼体进行酒精水化处理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 l_2min ；(7)将鱼体置于0. 5wt% KOH溶液中过夜，即完成对外周神经的染色。所述步骤(1)中的10vol%福尔马林由37vol% _40vol%甲醛溶液稀释而得。所述步骤(1)中的鱼体标本为鱼类仔稚幼鱼标本。所述步骤O)中的容器为塑料或玻璃方形盒。所述步骤(3)中每100ml KOH滴加4-6滴H2O2。所述步骤(5)中的神经染色在摇床中进行，染色效果更佳。所述步骤(5)中的30wt% -50wt%苏丹黑溶液配制工艺为苏丹黑粉末溶解于 70vol%酒精中，至饱和状态；用70vol%酒精稀释至30wt% -50wt%。在0. 5wt% KOH溶液中缓慢加入甘油，直至鱼体标本样品沉入底部，放置1 后，轻轻去除头部表皮，在体视镜下清晰可见外周神经分布，外周神经经过处理后染为黑色。有益效果(1)本发明操作简单、所需试剂少，大大缩短了染色时间，也无须昂贵的试剂和特殊的仪器；(2)在本发明的操作中，KOH易溶于水和甘油，而且其化学性质类似NaOH，有强碱性，能破坏细胞组织；H2O2其水溶液俗称双氧水，外观为无色透明液体，是一种强氧化剂； KOH和H2A结合使用能够使鱼体骨骼软化，消除肌肉组织，褪去表皮色素，使鱼体透明，便于观察鱼体外周神经染色情况；根据KOH易溶于甘油的特点，染色后鱼体放入KOH和甘油的混合液，不仅使鱼体透明便于神经染色观察，而且能够保持鱼体水分含量，隔绝空气，便于样品长期保存；(3)本发明操作简便，结果稳定，可用于一般鱼类仔稚幼鱼外周神经分布的研究， 其适用范围较广。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1(1)用IOvol %福尔马林(由37Vol%甲醛溶液稀释而得)固定中华鲟仔鱼标本 (全长6. 2cm) 48h，将固定好的鱼体标本冲洗12h ；(2)将上述鱼体放入玻璃方形盒中，加入0. 5wt% KOH溶液直至将鱼体淹没，放置 lh；(3)向上述溶液中滴加浓度为3vol % H2O2溶液(100ml KOH滴加4 6滴H2O2)， 将玻璃方形盒置于白炽灯下过夜，以加速褪去鱼表皮色素；(4)对鱼体进行酒精脱水处理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各 30min ；(5)将鱼体浸入30wt%苏丹黑溶液(苏丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中，至饱和状态；用70vOl%酒精稀释)中进行神经染色，染色时间为他；(6)对鱼体进行酒精水化处理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 Imin ；(7)将鱼体置于0. 5wt% KOH溶液中过夜，即完成对外周神经的染色。实施例2(1)用IOvol %福尔马林(由40vol%甲醛溶液稀释而得)固定鱼体标本MhJf 固定好的鱼体标本冲洗24h ；(2)将上述鱼体放入塑料中，加入0. 5wt% KOH溶液直至将鱼体淹没，放置浊；(3)向上述溶液中滴加浓度为4vol % H2O2溶液(100ml KOH滴加4 6滴H2O2)， 将塑料置于白炽灯下过夜，以加速褪去鱼表皮色素；(4)对鱼体进行酒精脱水处理，依次放入3(^01%、5(^01%、7(^01%酒精中，各40min ；(5)将鱼体浸入50wt%苏丹黑溶液(苏丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中，至饱和状态；用70Vol%酒精稀释)中在摇床中进行神经染色，染色时间为12h ；(6)对鱼体进行酒精水化处理，依次放入7(^01%、6(^01%、5(^01%酒精，各 2min ；(7)将鱼体置于0. 5wt% KOH溶液中过夜，即完成对外周神经的染色。
权利要求
1.一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，包括(1)用IOvol%福尔马林固定鱼体标本48 Mh，将固定好的鱼体标本冲洗12-24h ；(2)将上述鱼体放入容器中，加入0.5wt% KOH溶液直至将鱼体淹没，放置1- ；(3)向上述溶液中滴加浓度为3 4Vol%H2O2溶液，将容器置于白炽灯下过夜；(4)对鱼体进行酒精脱水处理，依次放入30vol%,50vol %、70vol %酒精中，各30 40min ；(5)将鱼体浸入30wt%-50wt%苏丹黑溶液中进行神经染色，染色时间为8-12h ；(6)对鱼体进行酒精水化处理，依次放入70VO1%、60VO1%、50to1%酒精，各Hmin；(7)将鱼体置于0.5wt% KOH溶液中过夜，即完成对外周神经的染色。
2.根据权利要求1所述的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，其特征在于所述步骤(1)中的IOvol %福尔马林由37vol% _40vol%甲醛溶液稀释而得。
3.根据权利要求1所述的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，其特征在于所述步骤(1)中的鱼体标本为鱼类仔稚幼鱼标本。
4.根据权利要求1所述的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，其特征在于所述步骤O)中的容器为塑料或玻璃方形盒。
5.根据权利要求1所述的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，其特征在于所述步骤(3)中每IOOml KOH滴加4-6滴H2O2。
6.根据权利要求1所述的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，其特征在于所述步骤(5)中的神经染色在摇床中进行。
7.根据权利要求1所述的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，其特征在于所述步骤(5)中的30wt% -50wt%苏丹黑溶液配制工艺为苏丹黑粉末溶解于70Vol%酒精中， 至饱和状态；用70vol%酒精稀释至30wt% -50wt%。
全文摘要
本发明涉及一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，包括将鱼体标本浸入0.5wt％KOH溶液和3～4vol％H2O2溶液中，进行酒精脱水处理后再浸入30wt％-50wt％苏丹黑溶液中进行神经染色，进行酒精水化处理后置于0.5wt％KOH即可。本发明操作简单、所需试剂少，大大缩短了染色时间，也无须昂贵的试剂和特殊的仪器，操作简便，结果稳定，可用于一般鱼类仔稚幼鱼外周神经分布的研究，其适用范围较广。
文档编号G01N1/30GK102519774SQ20111036253
公开日2012年6月27日 申请日期2011年11月16日 优先权日2011年11月16日
发明者宋炜, 马凌波 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所