专利名称：人血清糖化白蛋白检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种人血清糖化白蛋白检测试剂盒。
背景技术：
糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，是危害人类疾病的几大疾病之一。人体血清中白蛋白占血清蛋白的66%，其余为免疫球蛋白；血清中葡萄糖与血清蛋白的N-末端发生非酶促的糖基化反应，生成糖化血清蛋白，而糖化白蛋白则占糖化血清蛋白的90%以上。另外，由于白蛋白在血清中含量稳定存在，而球蛋白则会由于感染等疾病因素造成波动；故准确测定糖化白蛋白对准确反应糖尿病的的血糖控制情况非常重要。所以如何能精确地测定出人血清中的糖化白蛋白量成为临床检测糖化白蛋白的关键。目前市场主要采用酶法用于检测人血清中的糖化白蛋白，其反应原理为首先使用蛋白酶将糖化蛋白消化成低分子量的糖化多肽，随后使用果糖氨基酸酶催化糖化多肽发生氧化反应生成多肽(或氨基酸)、葡萄糖醛酮和H2O2，释放的H2O2通过终点反应比色法来测定， 其在600nm处的吸收值与糖化白蛋白的浓度成比例。具体反应过程如下
权利要求
1.ー种人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于包括试剂1和试剂2，其中试剂1缓冲液20-200mmol/L蛋白酶共表达体5-50 KU/L过氧化物酶10-50KU/L4-氨基安替比林2-20mmol/L防腐剂0.01-1%稳定剂0.01-1%;试剂2 缓冲液20-200mmol/L果糖赖氨酸酶5-50 U/mLN,N-双(4-磺丁基)-3-甲基苯胺l-10mmol/L防腐剂0.01-1%稳定剂0.01-1%;其中，所述蛋白酶共表达体指将蛋白酶的基因与抗坏血酸氧化酶的基因克隆到同一载 体上，在同一宿主菌中实现共表达得到的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述蛋白酶的 基因为曲霉属或芽孢杆菌属或麦轴梗霉属来源的基因。
3.根据权利要求2所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述蛋白酶的 基因为林伯氏白色念球菌来源的基因。
4.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述抗坏血酸 氧化酶的基因为植物来源的基因。
5.根据权利要求4所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述抗坏血酸 氧化酶的基因为黄瓜来源的基因。
6.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述蛋白酶共 表达体表达出的蛋白酶和抗坏血酸氧化酶的N端均有5-30个氨基酸片段的増加。
7.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述缓冲液为 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、邻苯ニ甲酸-盐酸缓冲液或甘氨 酸-盐酸缓冲液中的ー种。
8.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述防腐剂为 2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮或proclin300中的ー种。
9.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于所述稳定剂为 甘油、牛血清白蛋白、吐温-20中的ー种。
10.根据权利要求1所述的人血清糖化白蛋白检测试剂盒，其特征在于还包括校准 品，校准品为含白蛋白和糖化白蛋白的溶液，校准品的制备步骤为将人血清白蛋白与葡 萄糖以重量比11 1100混合，37°C孵育十天，透析除去葡萄糖，用葡萄糖试剂盒测定无葡萄糖后，采用HPLC测定糖化白蛋白的含量及占总蛋白的比例，并将该溶液稀释为 200-1000 μ M，冷冻干燥作为校准品，采用HPLC给校准品进行定值；根据校准品与试剂1、试剂2，选用120份健康体检个体血清，测定糖化白蛋白的参考范围为100 285ymol/L，同时测定白蛋白，校正公式为糖化白蛋白/白蛋白=(糖化白蛋白浓度X0. 23+1. 12)/白蛋白浓度，得出糖化白蛋白/白蛋白的参考范围为11 16%。
全文摘要
本发明提供一种人血清糖化白蛋白检测试剂盒，它包括试剂1和试剂2，其中试剂1由以下组分构成缓冲液20-200mmol/L，蛋白酶共表达体5-50KU/L，过氧化物酶10-50KU/L，4-氨基安替比林2-20mmol/L，防腐剂0.01-1％，稳定剂0.01-1％，蛋白酶共表达体由蛋白酶基因与抗坏血酸氧化酶基因克隆到同一载体上进行共表达得到；试剂2由以下组分构成缓冲液20-200mmol/L，果糖赖氨酸酶5-50U/mL，N，N-双(4-磺丁基)-3-甲基苯胺1-10mmol/L，防腐剂0.01-1％，稳定剂0.01-1％。该试剂盒能排除人血清中球蛋白及抗坏血酸的干扰、稳定性好、成本低。
文档编号G01N33/68GK102565420SQ20111044086
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月26日 优先权日2011年12月26日
发明者徐秀芬, 沃燕波, 贾江花, 邹炳德, 邹继华 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司