专利名称：一种苯醚甲环唑快速检测卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种苯醚甲环唑快速检测卡及其检测方法，是一种检测苯醚甲环唑的检测器具，属于农药残留检测技术领域。
背景技术：
苯醚甲环唑属于含有三氮杂茂的一类杀虫剂，具有保护、治疗和内吸活性，是甾醇脱甲基化抑制剂，抑制细胞壁留醇的生物合成，阻止真菌的生长。其杀菌谱广，对子囊亚门， 担子菌亚门和包括链格孢属、壳二孢属、尾孢霉属、刺盘孢属、球座菌属、茎点霉属、柱隔孢属、壳针孢属、黑星菌属在内的半知菌，白粉菌科，锈菌目某些种传病原茵有持久的保护和治疗活性，同时对甜菜褐斑病，小麦颖枯病、叶枯病、锈病和由几种致病菌引起的霉病，苹果黑星病、白粉病，葡萄白粉病，马铃薯早疫病，花生叶斑病、网斑病等均有较好的治疗效果。 适宜作物有番茄、甜菜、香蕉、禾谷类作物、水稻、大豆、园艺作物及各种蔬莱等。环境保护局确定了苯醚甲环唑在蔬菜、块茎和球茎的残留量容许度为0. 01 ppm ； 在甜菜中的残留量容许度为0.01 ppm;在番木瓜果(进口)中的残留量容许度为0.30 ppm； 在湿果渣中的残留量容许度为4. 5 ppm ；在甜菜干燥果肉中的残留量容许度为1. 9 ppm ；在马铃薯加工废料中的残留量容许度为0.04 ppm。目前，现有技术对于苯醚甲环唑的检测主要依赖色谱和质谱技术，这些方法普遍存在操作繁琐，对实验仪器设备要求高，需要专门技术人员操作等缺点。为此，本实用新型拟发明一种基于苯醚甲环唑蛋白质偶联物抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测蔬菜水果中残留的苯醚甲环唑。反应是利用苯醚甲环唑蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行， 也可在超市、家庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
发明内容本实用新型的目的在于提供一种能检测苯醚甲环唑的检测器具，应用免疫学的方法直接检测蔬菜水果等农产品中苯醚甲环唑的残留量，克服现有技术操作繁琐、对仪器设备要求高的缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。本实用新型的技术方案一种苯醚甲环唑快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4 ；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9 所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7 ；胶体金膜为含抗苯醚甲环唑抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含苯醚甲环唑蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。采用上述苯醚甲环唑快速检测卡，检测样品是农产品蔬菜水果。其检测样品的处理方法是取1克粉碎的固态样品或液态样品，加入含有3毫升样品抽提液的试管中，震荡混合反应10分钟。静置5分钟后，轻轻吸取上清液350 μ L，加入体积比1 1的样品稀释液，混合后用于测定。样品抽提液为ρΗ7. 6的含20%甲醇和0. 05%吐温-20的l(tomol磷酸盐缓冲液。样品稀释液为ρΗ7. 6的含0. 05%吐温-20的IOmmol磷酸盐缓冲液。当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样品中苯醚甲环唑含量未超标；当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性， 表示被检测样品中苯醚甲环唑含量超标；当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。本实用新型的有益效果是能检测蔬菜水果等农产品中残留的苯醚甲环唑，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
图1苯醚甲环唑快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条， 3、检测窗孔，4、加样孔。图2测试条的硝酸玻璃纤维膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带， 11、质控带。图3苯醚甲环唑快速检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜， 7、胶体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施方式
本实用新型结合具体实施例参见附图进一步说明如下实施例1一种苯醚甲环唑快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳 1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽 20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成， 在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2. 5mm。测试条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长60mm，宽4mm ；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm,长20_25mm，宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检测带10，含苯醚甲环唑蛋白质偶联物；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5 —端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6—端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7，胶体金膜7是含抗苯醚甲环唑单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0. 5-0. 8mm，长5mm，宽4mm。样品垫 8 厚 0. 5-0. 8mm,长 20mm，宽 4mm。吸水膜 9 厚 0. 5-0. 8mm,长 16_20mm，宽 4mm。胶体金膜 7、 样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为l_2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8 材料是吸水玻璃纤维膜。本实用新型苯醚甲环唑检测卡用于蔬菜水果等农产品中的苯醚甲环唑残留量的检测。实施例2样品的处理方法是取1克粉碎的固态样品或液态样品，加入含有3毫升样品抽提液的试管中，震荡混合反应10分钟。静置5分钟后，轻轻吸取上清液350 μ L，加入等体积的样品稀释液，混合后用于测定。使用苯醚甲环唑快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入苯醚甲环唑快速检测卡的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗苯醚甲环唑单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6 扩散，5-10分钟内观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与含苯醚甲环唑蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检苯醚甲环唑存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的苯醚甲环唑蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有以下3种情况1、当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中苯醚甲环唑含量未超标；2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说明被检测样品中苯醚甲环唑含量超标；3、当检测带10和质控带12均不显色，则表明检测试条已失效。
权利要求1. 一种苯醚甲环唑快速检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4)；测试条(2)由支承背板(5) 上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、和吸水膜(9) 所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜(7);硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含苯醚甲环唑蛋白质偶联物的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11 )，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
专利摘要一种苯醚甲环唑快速检测卡，属于农药残留检测技术领域。本实用新型苯醚甲环唑快速检测卡外壳内有测试条，测试条由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗苯醚甲环唑抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条显色带，一条为含苯醚甲环唑蛋白质偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本实用新型优点是应用免疫学的方法直接检测蔬菜水果样品中苯醚甲环唑的残留量。本实用新型苯醚甲环唑快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N33/558GK202101993SQ201120015999
公开日2012年1月4日 申请日期2011年1月19日 优先权日2011年1月19日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司