专利名称：一种测定过氧化氢含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定过氧化氢含量的分析方法，特别是一种四羧基铁酞菁催化氧化罗丹明B荧光猝灭法测定过氧化氢含量的方法。
背景技术：
过氧化氢是一种常用的化学试剂，可作为消毒剂、杀菌剂、脱氧剂、漂白剂、聚合反应的引发剂等。近年来，过氧化氢在自然界也广泛存在，且是酸雨形成的重要原因之一，因此测定过氧化氢对于环境监测和临床分析具有很重要的意义。目前，测定过氧化氢的方法主要有滴定法、分光光度法、电化学法、化学发光法、色谱法、共振散射光谱法、荧光光度法、 原子吸收光谱法等。其中利用酶催化体系测定H2O2具有灵敏度高，检出限低的优点，常需要
使用过氧化物酶-辣根过氧化物酶(HRP)。然而HRP不但价格较高,且易失活变性而不易
保存，为了保持它的活性，实验条件和储存环境都很苛刻。因此，为了克服HRP的这些不足， 人们开始研究用其模拟酶来替代HRP。目前已见报道的过氧化物模拟酶主要是金属卟啉类化合物及氯化血红素、血红蛋白等。金属酞菁类化合物的结构与卟啉极其相似，也具有过氧化物模拟酶的性质，且该类化合物具有良好的光、热稳定性，易于合成，作为过氧化物模拟酶具有很大发展前景。四羧基铁酞菁(FeC4Pc)可作为一种过氧化物模拟酶，但目前应用四羧基铁酞菁催化氧化罗丹明B荧光猝灭法测定过氧化氢含量的方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种四羧基铁酞菁催化氧化罗丹明B荧光猝灭法测定过氧化氢含量的方法。具体步骤为(I)于 10 支 5. OmL 比色管中依次加入 0. 0、0. 02、0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、I. O、I. 3、
1.4、1.5mL 0. 5 2. 5X10_5mol/L的H2O2，再在每个比色管中分别加入0. I 0. 6mL 3. 5 6. 5X l(T6mol/L的罗丹明B溶液、0. 3 I. 5mL 0. 5 2. 0X 10_4mol/L的四羧基铁酞菁，以不加H2O2为试剂空白；(2)将步骤⑴所得的10支比色管中的溶液均用超纯水稀释至5. OmL刻度，摇匀， 反应70 90min，然后在荧光光度计上用Icm石英比色皿，设置激发波长为554nm，发射波长为575nm，激发和发射狭缝均为5nm，电压为600V，分别测定加有H2O2的溶液的荧光值F和不加H2O2的试剂空白的荧光值H)，计算差值AF = Ftl-F,过氧化氢浓度在6. 48XlO^mol/ L 4. 86X10_6mol/L范围内与575nm波长的荧光降低值AF成线性关系，其回归方程为AF =8. 646X 107c+14. 30，相关系数 0. 9992，检出限 5. 44Xl(T8mol/L ；(3)另取雨水0. 5 2. OmL，用上述方法测定其荧光值，计算出雨水中过氧化氢的含量。本发明反应的原理四羧基铁酞菁(FeC4Pc)作为过氧化物模拟酶，催化过氧化氢反应产生羟自由基，羟自由基使罗丹明B发生荧光猝灭反应。
本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便。
图I为实施例空白与1.62X10_6mol/L过氧化氢的荧光光谱图。
具体实施例方式实施例(I)于 10 支 5. OmL 比色管中依次加入 0. 0、0. 02、0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、I. O、I. 3、
I.4、I. 5mLl. 624X10_5mol/L的H2O2，再在每个比色管中分别加入0. 4mL5 X l(T6mol/L的罗丹明B溶液、0. 9mL I. OX 10_4mol/L的四羧基铁酞菁，以不加H202为试剂空白；(2)将步骤⑴所得的10支比色管中的溶液均用超纯水稀释至5. OmL刻度，摇匀， 反应80min,然后在突光光度计(Cary Eclipse型,美国Varian公司)上用Icm石英比色皿，设置激发波长为554nm，发射波长为575nm，激发和发射狭缝均为5nm，电压为600V，分别测定加有H2O2的溶液的荧光值F和不加H2O2的试剂空白的荧光值Ftl,计算差值AF = F0-F, 其荧光差值AF与过氧化氢浓度c的线性回归方程为AF = 8.646X 107c+14. 30，相关系数 0. 9992，检出限 5. 44Xl(T8mol/L。(3)另用干净容器收集两份雨水(下了两天后的雨水)，各取0.5mL的雨水，用上述方法测定雨水中过氧化氢的含量，同时做了加标回收实验，结果见表I。表I :雨水中H2O2的测定结果(n = 5)
样品测定值 (X 10'6mol/L)加标量 (X I(T6HIOlZL)测定总量 (X lO^mol/L)回收率 (%)雨水I未检出1.621.69104.3雨水2未检出1.621.5998.1权利要求
1.一种测定过氧化氢含量的方法，其特征在于具体步骤为(1)于10 支 5. OmL 比色管中依次加入 0·0、0·02、0·05、0· 1、0· 2、0· 5、I. O、I. 3、I. 4、 I. 5mL 0· 5 2. 5X10_5mol/L的H2O2，再在每个比色管中分别加入0· I 0. 6mL 3· 5 6. 5Χ l(T6mol/L的罗丹明B溶液、O. 3 I. 5mL O. 5 2. OX 10_4mol/L的四羧基铁酞菁，以不加H2O2为试剂空白；(2)将步骤(I)所得的10支比色管中的溶液均用超纯水稀释至5.OmL刻度，摇匀，反应70 90min，然后在荧光光度计上用Icm石英比色皿，设置激发波长为554nm，发射波长为575nm，激发和发射狭缝均为5nm，电压为600V，分别测定加有H2O2的溶液的荧光值F和不加H2O2的试剂空白的荧光值F。，计算差值AF = F0-F,过氧化氢浓度在6. 48 X 10_8mol/L 4.86父10_611101/1范围内与57511111波长的荧光降低值ΛF成线性关系，其回归方程为AF =·8.646 X 107c+14. 30，相关系数 O. 9992，检出限 5. 44X l(T8mol/L ；(3)另取雨水O.5 2. OmL，用上述方法测定其荧光值，计算出雨水中过氧化氢的含量。
全文摘要
本发明公开了一种测定过氧化氢含量的分析方法。于10支5.0mL比色管中依次加入0.0、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.3、1.4、1.5mL 0.5～2.5×10-5mol/L的H2O2，再在每个比色管中分别加入0.1～0.6mL 3.5～6.5×10-6mol/L的罗丹明B溶液、0.3～1.5mL 0.5～2.0×10-4mol/L的四羧基铁酞菁，以不加H2O2为试剂空白，10支比色管中的溶液均用超纯水稀释至5.0mL刻度，摇匀，反应70～90min，然后在荧光光度计上用1cm石英比色皿，设置激发波长为554nm，发射波长为575nm，激发和发射狭缝均为5nm，电压为600V，分别测定加有H2O2的溶液的荧光值F和不加H2O2的试剂空白的荧光值F0，计算差值ΔF＝F0-F；另取雨水0.5～2.0mL，同法测定其荧光值。本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便。
文档编号G01N21/64GK102590164SQ20121002469
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月3日 优先权日2012年2月3日
发明者凌悦菲, 唐宁莉, 李武生, 蒙兴龙 申请人:桂林理工大学