专利名称：高纯度山茶苷a的制备及其质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物单体制备领域，具体涉及一种高纯度山茶苷A的制备及其质量控制方法。
背景技术：
化学对照品又称标准品，是中药质量标准研究、质量检测和质量控制的实物对照，中药化学对照品的研究，是中药标准化研究的一个非常重要的部分，对产品的质量评价，特别是在药品生产的质量控制中，中药化学对照品起着极其重大的作用，是中药质量控制的基础与核心。山茶苷A是一种黄酮类化学成分，是植物活性成分之一，也是许多植物和药品标准质量控制的指标性成分。目前尚未相应的国家药品标准物质，国内外对山茶苷A中药化学对照品的系统研究未见报道，参照中药化学对照品(供含量测定用)的技术要求，对山茶苷A化学对照品进行研究，建立山茶苷A化学对照品的批量提取工艺、纯度与含量以及杂质检查的分析测定方法，从而建立山茶苷A化学对照品的技术标准，为其作为中药化学对照品以及药材和制剂的质量标准研究提供科学基础和保证。山茶苷A作为植物、药材及其产品的化学对照品，是质量控制的技术关键，众多企业、科研和检验部门都需要高纯度的山茶苷A对照品，其市场需求很大，由于山茶苷A在药材中的含量低，提取分离技术要求很高、难度很大。本发明进行山茶苷A中药化学标准品制备及其质量控制技术研究，解决高纯度山茶苷A化学对照品的问题，对中药现代化的作用是显而易见的，具有重大的实际意义和学术价值。山茶苷A是从亮叶杨桐叶植物分离得到的活性物质，从公开文献所知，已有文献报道山茶苷A的提取方法，如1.题名亮叶杨桐叶中山茶苷A的分离纯化及其抗氧化性能的研究作者袁尔东，宁正祥，刘本国，榻景益等，华南理工大学轻工与食品学院刊名食品工业科技，2008，(4) :212 - 21文摘:采用大孔树脂法对亮叶杨桐叶中山茶苷A进行分离纯化。结果显示，采用DlOl树脂，以3. Omg/mL流速上样，以无水乙醇3. Omg/mL流速洗脱，获得山茶苷A精制品的纯度可达91.7%。2.题名亮叶杨桐叶黄酮类提取物的鉴定及其抗氧化活性研究作者刘本国，战宇，宁正祥，高建华，许克勇刊名林产化学与工业，2008，28 (I) 6 - 10.文摘为了开发亮叶杨桐——这种中国特有的植物，采用传统的有机溶剂提取法获得了亮叶杨桐叶的黄酮类提取物(FE)。高效液相色谱(HPLC)和多级串联电喷雾质谱(ESI -MSn)的分析表明，亮叶杨桐叶的主要黄酮类化合物为山茶苷A，其在FE中的质量分数为51. 19%± I. 13%。3.山茶苷A和山茶苷B的制备方法和用途，中国专利申请(专利)号200810062110. 5申请(专利权)人浙江大学地址浙江省杭州市西湖区浙大路38号摘要一种高纯度山茶苷A和山茶苷B的制备方法，以石崖茶为原料，用水醇溶剂系统提取，减压浓缩，以中极性有机溶剂萃取脱脂，水相继续浓缩石崖茶总黄酮，将总黄酮经水醇系统重结晶得到山茶苷A，将总黄酮用碳酸钾是山茶苷A转化成山茶苷B后通过离子交换层析或直接用水醇系统重结晶，得到山茶苷B。本发明设计合理，制备工艺简便，生产成本底，得率及纯度高，经过液-液萃取后采用重结晶法即可获得高纯度的山茶苷A和B，避开了常用的柱层析方法，有效降低有机溶剂消耗及能耗，减少环境污染，适于工业
化生产。上述方法从不同角度论述了山茶苷A的提取分离，分离纯度较高，但纯度均未达到中药化学对照品的要求，即纯度大于98%，且没有山茶苷A纯度与质量控制方法，无法满足高纯度山茶苷A化学对照品的需要。
发明内容
本发明的目的为了克服现有的山茶苷A纯度低、收率低或生产成本高的不足，以及无系统的山茶苷A的提取纯化与质量控制方法，提供一种高纯度山茶苷A的制备及其质量控制方法，该方法制备得到的山茶苷A纯度高、质量好，可以作为化学对照品或标准品，保证质量控制。本发明是从山茶科杨桐属植物亮叶杨桐Adinandra nitida Merr. ex Li的叶子中经提取、分离、精制、纯化而制得的山茶苷A，其化学名、分子式、结构式如下
中文名山茶苷A
化学名芹菜素一5 — 0 — a — L —吡喃鼠李糖基(I — 4) — 6" — 0 —乙酰基一3 — D —批喃葡萄糖式(apigenin-5-0- a -L-rhamnosyl- (I — 4) _6 " -acetyl- 3 -D-glucoside)
英文名Camellianin A ；
分子式C29H32O15 ;结构式如下
权利要求
1.一种高纯度山茶苷A的制备方法，其特征在于包括以下工艺过程取山茶科杨桐属植物亮叶杨桐的干燥叶子，粉碎，每公斤亮叶杨桐的干燥叶子用5 - 10倍重量的50 -90% w/w的乙醇的提取2 — 8次，滤过，合并滤液，回收乙醇，得浸膏，经硅胶柱层析，用醋酸乙酯-甲醇梯度洗脱，收集含山茶苷A的流分，薄层色谱TLC检测合并，浓缩，氯仿一甲醇重结晶，即得纯度为重量含量80 90%的山茶苷A粗结晶；将粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，色谱柱为C 一 18柱，利用乙腈-水为流动相洗脱，流速为5 10 mL/min,检测波长为330nm，柱温为25°C — 35°C，收集山茶苷A组分，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90% - 98%之间和纯度大于 98%以上的山茶苷A，减压浓缩，得到纯度90% - 98%之间以及大于98%以上的山茶苷A ； 所述的醋酸乙酯-甲醇配比为100:0 60:40 ; 所述的氯仿-甲醇配比为5:1 5:5; 所述的制备高效液相色谱法的流动相乙腈-水配比为15:85 50:50 ; 所述的分析HPLC条件为色谱柱为C 一 18柱；流动相为乙腈0. 2%磷酸溶液=20:80 50:50 ;检测波长为 330nm ;流速为 O. 6 mL/min I. 5mT,/miη。
2.如权利要求I所述的高纯度山茶苷A的质量控制方法，其特征在于采用薄层色谱分析方法或HPLC分析方法，所述的薄层色谱分析方法薄层板聚酰胺薄膜；3种展开剂系统系统(I)乙醇-丙酮-水重量比例7:5:6，系统(2)甲醇-冰醋酸-水重量比例9:0. 5:0. 5，系统(3)乙醇-水重量比例1:1 ;点样取本品适量，用甲醇制lmg/mL的溶液，在同一聚酰胺薄膜上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为O. 5微克、I微克、3微克、5微克、10微克；置展开缸分别展开，展距15cm;定位喷以3%三氯化铝乙醇溶液，晾干，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外灯(365nm)下检视；结果在薄层色谱中，可见蓝色的单一的荧光斑点，3种展开剂系统，5个不同浓度的梯度点样，均为单一斑点，未见杂质斑点。
3.根据权利要求2所述的高纯度山茶苷A的质量控制方法，其特征在于所述的液相色谱方法色谱条件色谱柱C — 18,4. 6X 250mm, 10微米；流速0. 6 — I. 5ml/min ;进样量10 20微升；面积归一化法定量；系统条件(I)流动相甲醇-O. 2%磷酸溶液重量比例46:54-60:40 ;检测波长330nm ;系统条件(2)流动相乙腈一 O. 2%磷酸溶液重量比例21:79 — 50:50 ;检测波长330nm ;系统条件(3)流动相乙腈一 O. 2%磷酸溶液重量比例21:79 — 50:50 ;检测波长260nm ； 含量与纯度测定精密称取于105°C干燥至恒重的对照品适量，加80%甲醇水溶液制成每Iml含Img的溶液，在测定条件下，进样20微升，注入液相色谱仪，用2个流动相溶剂系统分别记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2. 5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果系统测定对照品含量在均98%以上；杂质检查，分别在不同系统记录的色谱图中，除溶剂峰外，杂质峰面积总和结果均小于2. 0% ； 峰纯度检测取对照品适量，按流动相系统，在高效液相色谱仪上，用二极管阵列DAD检测器进行峰纯度检查，山茶苷A的HPLC色谱峰>98%，其色谱峰紫外吸收光谱图，三维图谱以及5点光谱图完全重合，表明为单一纯物质峰。
全文摘要
本发明公开了一种以山茶科杨桐属植物亮叶杨桐为原料，提供一种高纯度山茶苷A的制备方法、检测方法与用途，其方法是先将山茶科杨桐属植物亮叶杨桐粉碎，用乙醇加热回流提取，乙醇提取物经硅胶柱层析，用醋酸乙酯-甲醇混合溶剂洗脱，用薄层色谱检测，收集含有山茶苷A的洗脱液，合并，减压浓缩，重结晶，得到山茶苷A粗结晶。再用反相硅胶C－18柱制备高效液相法分离，对所收集的每一份洗脱液利用分析型高效液相色谱检测，合并保留时间相同而且纯度在90%～98%之间和98%以上的山茶苷A组分，减压浓缩，即可分别得到纯度在90%～98%之间的山茶苷A和纯度大于98%的山茶苷A组分，并采用薄层色谱和液相色谱进行质量控制。该方法不仅能提高山茶苷A纯度，而且能降低生产成本。
文档编号G01N30/90GK102628839SQ201210040708
公开日2012年8月8日 申请日期2012年2月22日 优先权日2012年2月22日
发明者兰太进, 刘元, 刘布鸣, 宋志钊, 张宁宁, 黄艳 申请人:广西壮族自治区中医药研究院