专利名称：检测黄曲霉素的试剂盒或试纸条的制作方法
技术领域：
本发明涉及检测黄曲霉素的试剂盒或试纸条。
背景技术：
随着人类生活水平的改善，食品安全日益成为餐桌上人们最为关注的问题之一吗，人们每天都会食用的牛奶可能会含有对人体健康有害的黄曲霉素W。哺乳动物摄入被黄曲霉素B1污染的饲料或食品后，在体内可被羟化而生成黄曲霉素乂。研究表明，黄曲霉素札为强致癌剂。世界卫生组织制定食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15y g/kg，美国联邦政府有关法律规定人类消费的牛奶中的含量不能超过0. g/kg，其他动物饲料中的含量不能300ii g/kg。我国今年发布的《GB 2761-2011食品中真菌毒素限量》国家标准中规定食品中黄曲霉素M1在乳及乳制品中的限量为0. 5 y g/kg。而欧盟国豕规定更加严格，原奶、 热处理奶及加工奶产品中M1限量为0. 05ii g/kg，墨儿食品(包括婴幼儿奶)中M1限量为
0.025 ii g/kg。因此，建立特异、敏感的黄曲霉素M1的检测方法是当务之急。目前国内外研究主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、免疫亲和柱法以及酶联免疫法等。TLC法的特异性较差，灵敏度也相对较差，所需标准品浓度较高，潜在的污染性较高。HPLC法所需仪器设备投资大，操作技术要求高，净化柱消耗较多，检测成本较高，免疫亲和柱特异性较好，但需结合HPLC仪和荧光光度计才能定量检测，检测技术要求和成本较高。ELISA法相比而言，操作简便、快捷、污染较小、灵敏度也较高，适合批量样品的普检和筛选，特别是研制成功的试剂盒，给检测人员带来很大的方便，同时也节省了成本，符合目前国际上检测领域的发展方向。免疫胶体金层析技术不需任何仪器设备和试剂， 特别适合于基层单位大批量时间紧的检测和大面积普查，因此酶免疫法在食品安全分析中应用广泛。
发明内容
本发明的目的是提供检测黄曲霉素试剂盒的或试纸条。本发明提供的检测黄曲霉素的酶联免疫试剂盒，包括抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1分泌的单克隆抗体。抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1，简称杂交瘤细胞2A1，已于2012年2月 15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，保藏号为CGMCC No. 5779。所述试剂盒可为如下I)至4)中的任意一种I)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物、所述单克隆抗体和酶标记抗抗体的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原；2)包括式(I)所示化合物的酶标记物、所述单克隆抗体和抗抗体的试剂盒；其中， 所述抗抗体作为包被原；3)包括式(I)所示化合物的酶标记物和所述单克隆抗体的试剂盒；其中，所述单克隆抗体作为包被原；4)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物和所述单克隆抗体的酶标记物的
试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原。
权利要求
1.一种检测黄曲霉素的酶联免疫试剂盒，包括抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞 2A1分泌的单克隆抗体；所述抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1的保藏编号为CGMCC No.5779。
2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒为如下I)至4)中的任意一种1)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物、所述单克隆抗体和酶标记抗抗体的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原；2)包括式(I)所示化合物的酶标记物、所述单克隆抗体和抗抗体的试剂盒；其中，所述抗抗体作为包被原；3)包括式(I)所示化合物的酶标记物和所述单克隆抗体的试剂盒；其中，所述单克隆抗体作为包被原；4)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物和所述单克隆抗体的酶标记物的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原；
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述载体蛋白为卵清蛋白或牛血清白蛋白。
4.如权利要求I至3中任一所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括洗涤液、样品浓缩液、底物显色液和终止液中的至少一种。
5.一种检测黄曲霉素的胶体金试纸条，由样品吸收垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫组成；沿试纸条的轴向，所述样品吸收垫、所述胶体金垫、所述反应膜和所述吸水垫依次按顺序连接，样品吸收垫的末端与胶体金垫的始端相连，胶体金垫的末端与反应膜的始端相连， 反应膜的末端与吸水垫的始端相连；所述胶体金垫上包被有胶体金标记的单克隆抗体；所述单克隆抗体为抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1分泌的单克隆抗体；所述抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞 2A1的保藏编号为CGMCC No. 5779 ；所述反应膜上有检测区和质控区，检测区和质控区均为与所述试纸轴向垂直的条带状；检测区位于靠近胶体金垫末端的一侧；质控区位于远离胶体金垫末端的一侧；检测区包被有式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物，质控区包被羊抗鼠二抗。
6.权利要求I至4中任一所述试剂盒，或，权利要求5所述胶体金试纸条，在检黄曲霉素中的应用。
7.权利要求I至4中任一所述试剂盒，或，权利要求5所述胶体金试纸条，在检测待测样本是否含有黄曲霉素中的应用。
8.如权利要求I至4中任一所述的试剂盒，或权利要求5所述的胶体金试纸条，或如权利要求6或7所述的应用，其特征在于所述黄曲霉素为黄曲霉素M1或黄曲霉素M2。
全文摘要
本发明公开了一种检测黄曲霉素试剂盒或试纸条。本发明提供的检测黄曲霉素的酶联免疫试剂盒，包括抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1分泌的单克隆抗体；所述抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1的保藏编号为CGMCC No.5779。本发明的试剂盒和试纸条具有灵敏度高、准确度高、精密度高、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点，能同时快速检测大批量样品，可实现现场高通量快速检测。本发明提供的试剂盒和试纸条，适用于测定奶制品中黄曲霉素的残留量。本发明的抗体、试剂盒、试纸条及检测方法在黄曲霉素的检测中将发挥重大作用。
文档编号G01N33/577GK102590519SQ201210045398
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月24日 优先权日2012年2月24日
发明者何丹婷, 吴小平, 徐飞, 李向梅, 李娜, 杨铮, 王照鹏, 赵宁 申请人:北京维德维康生物技术有限公司