专利名称：氯桂丁胺的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及氯桂丁胺的质量控制方法，属于药品质量控制技术领域。
背景技术：
氯桂丁胺是一芳香基丙烯酰胺衍生物，是3，4- 二氯桂皮酰另丁胺的简略名，其化学名称为(IS, IR)-(E)-3-(3,4-二氯苯基)-N-(I-甲基丙基)-2_丙烯酰胺。该化合物属于一种创新的桂皮酰胺类衍生物，动物试验证明它具有较强的抗癫痫作用。如何快速、准确的控制氯桂丁胺的质量是需要解决的技术问题。本发明的发明目的是提供一种氯桂丁胺质量控制方法，该方法能够快速、准确的检测出氯桂丁胺产品的质量。本发明技术方案是一种氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于该方法中包括氯桂丁胺的含量和有关物质的测定，方法为供试品溶液的制备取样品约2. 5mg，精密称定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇勻。该样品每Iml含供试品IOOug,备用。对照品溶液的制备取对照品约2. 5mg,精密称定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇勻。该样品每Iml含对照品IOOug,备用。其中对照品制备取氯桂丁胺一次精制品350克，去离子水2500ml，浓氨水40ml。 加热搅拌至氯桂丁胺为熔融状态。回流10分钟。静置分层，降温，氯桂丁胺固化。倾出上层水。加入去离子水1000ml，加热搅拌回流10分钟。静置分层，降温，氯桂丁胺固化。倾出上层水(以上操作的目的是去除少量存在的中间体3，4 二氯苯基丙烯酸)。加入80%乙醇 600ml，活性炭20克，加热搅拌回流20分钟，热滤，滤液于10 15°C放置5 6小时自然结晶。过滤，用75%乙醇150ml洗涤结晶。滤干，红外干燥至恒重。得氯桂丁胺二次精制品。氯桂丁胺二次精制品260克，80%乙醇440ml，加热至回流。热滤。滤液于10 15°C放置5 6小时自然结晶。过滤，结晶用75%乙醇IOOml洗涤。滤干，红外干燥至恒重。得氯桂丁胺对照品。系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶做为填充剂，以醋酸盐缓冲溶液-甲醇(20 : 80，体积比)为流动相；流速为每分钟Iml ;检测波长为276nm。理论板数按氯桂丁胺峰计算应不低于 2000。其中醋酸盐缓冲溶液的制备醋酸I. 4g，加水980ml使溶解，加冰醋酸约2. 6ml，调节ρΗ4· 2±0· 1，补水至1000ml，摇匀。含量测定取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氯桂丁胺对照品溶液20ul，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。有关物质含量的测定对照品溶液稀释为每Iml含氯桂丁胺O. 5ug。
照含量项下的方法试验，取对照液20ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%，再取供试溶液和稀释后的对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试溶液色谱图中显示的杂质峰，除溶剂峰外，各杂质峰面积的总和不得大于对照液主峰的面积(O. 5% )。本发明氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于该方法中还包括残留有机溶剂吡啶的测定，其方法是色谱条件与系统适用性以直径为O. 25 O. 18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱长I. 6m,内径3. 2mm，柱温170°C，进样器温度200°C，氢火焰离子化检测温度为200°C，内标物苯与吡啶的分离度不小于I. 5，理论板数按吡啶峰计算应不低于1000。内标溶液的制备精密量取苯适量，加二甲亚砜-水(3 7)混合溶剂溶解并稀释成每Iml含IOug的溶液，摇匀，密闭保存，作为内标溶液。标准溶液的制备精密量取吡啶适量,加同一混合溶剂并稀释成每Iml含IOug的溶液，摇匀，密闭保存，作为标准溶液。供试品溶液的制备精密称取本品适量,加同一混合溶剂溶解并稀释成每Iml含 50mg的溶液，作为供试品溶液。测定方法精密量取标准溶液和供试品溶液各1ml，分置于顶空进样瓶中，并分别精密加入内标溶液1ml、同一混合溶剂1ml，混合。在60°C恒温水浴中加热30分钟，用顶空进样法进样，同时进行空白试验。供试品溶液所得的峰面积比不得大于由标准溶液所得峰面积比(O. 02% ) ο本发明氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于还包括鉴别。本发明氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法是取本品50克，置IOml试管，加lmol/L盐酸羟胺的1，2_丙二醇溶液4ml，煮沸5分钟，使溶液呈黄色，放置至室温，加5%三氯化铁溶液5 6滴，轻摇，放置片刻，显紫红色，加 1，2_丙二醇2ml，静置，两液界面的紫红色更加明显可辨。本发明氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法是在含量项下记录的色谱图中供试品主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致。本发明氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法是本品的红外吸收图谱应与对照品的图谱一致。本发明的有益效果是提供了一种氯桂丁胺的质量控制方法，该方法能在较短时间内快速准确的检测氯桂丁胺的含量、有关物质和残留溶剂的含量。实验例I有关物质的分离(I)概况依申请号为201010179527. 7的中国专利，制备氯桂丁胺。由起始原料3，4_ 二氯苯甲醛制备中间体3，4- 二氯苯丙烯酸的perkin反应收率约为81% (按一次精制品计)， 二次精制品的含量约为99. 5%, HLPC检测为单峰。用含量98 99%的中间体投入后一步反应，则前步反应的副产物引入最后产品的可能性甚小。由中间体3，4_ 二氯苯丙烯酸经过氯化反应和胺解反应制备氯桂丁胺的粗品收率约为82%。分离出氯桂丁胺后的母液浓缩、干燥得深棕色残渣(以下称总残渣)。总残渣的量相当于氯桂丁胺的五分之一，每结晶出Ikg的氯桂丁胺，母液浓缩可得到200g的总残渣。此总残渣含有反应后的所有有关物质，氯桂丁胺中可能会含有的杂质或有关物质必定与总残渣的组成直接相关。总残渣经柱层析、薄层层析、高效液相色谱分析可以粗知其中约含70 80%的氯桂丁胺，15 20%的中间体3，4_ 二氯苯丙烯酸。其他组分则为氯化、胺解产物。(2)有关物质的分离中间体的分离取总残渣50g，加入二氯甲烷150ml，水100ml。搅拌下加入40%氢氧化钠溶液至 PH8. 5，搅拌10分钟。静置分层。水层加入浓盐酸至pH2，有沉淀析出。过滤，用30ml水洗， 用50ml 二氯甲烷洗。干燥，得白色粉末7. 57g。经用95%乙醇重结晶得到白色结晶6. 81g， 熔点226 227°C .薄层检测为单一物质。经IR、HLPC检测，此化合物至中间体3，4- 二氯苯丙烯酸(以下称为杂质一)。氯桂丁胺的分离取总残渣50g，加二氯甲烷150ml，水100ml。搅拌下加入40%氢氧化钠溶液至 PH8.5，搅拌10分钟。静置分层。二氯甲烷层用水30ml洗，蒸馏除尽二氯甲烷。残留物用 80%乙醇IOOml加热溶解。15°C搅拌析出结晶，过滤，用70%乙醇30ml洗涤结晶，干燥得微黄色结晶38. 98g。用80%乙醇脱色重结晶后得白色结晶。熔点104 106°C。薄层检测为单一物质。经IR、HLPC检测，确认此化合物为氯桂丁胺。弱极性杂质(杂质二与杂质三的分离)取总残渣300g，用石油醚(bp60 90°C ) 1500ml分三次提取，合并提取液，除去大部分石油醚。冰箱放置过夜，有结晶析出。过滤，结晶用石油醚洗涤，得一淡黄色结晶3. Igo 用石油醚脱色重结晶得一白色结晶，熔点119 121°C，薄层检测为单一物质。它在总残渣中约占I. 03%。经元素分析为一不含氮的有机物，核磁共振1H谱、13C谱、H-H谱相关谱证明为3，4_ 二氯苯丙烯酸甲酯(以下称为杂质二)。用3，4- 二氯苯丙烯酸与甲醇反应合成的化合物，经元素分析、红外光谱与杂质二相同，进一步确证了杂质二的结构。分离出杂质二后的母液部分浓缩，得少量黄棕色膏状物，因其量甚微，柱层析分离未能得到单一物质，薄层层析时Rf值与杂质二接近，也属于弱极性杂质(以下称杂质三)薄层原点物质的分离取总残渣50g，去除3，4- 二氯苯丙烯酸和氯桂丁胺后的各母液部分去除溶剂后合并，加入二氯甲烷100ml，水100ml，搅拌，静置分层，二氯甲烷层去除溶剂至干，所得深棕色残留物用硅胶做柱层析，用大量乙酸乙酯充分洗脱，洗去氯桂丁胺和中间体，残留物为强极性。在甲醇、乙醇中溶解度很大，改用甲醇洗脱，浓缩甲醇洗脱液至干，得一深棕色物质，薄层检测时，用正己烷-丙酮-冰醋酸溶剂系统展不开，留在原点(以下称为杂质四)实验例2有关物质的测定(I)色谱条件的选择色谱条件色谱柱INERTSIL 0DS_35um 4. 6 X 250mm检测波长276nm
流速lml/min流动相醋酸盐缓冲溶液ρΗ4· 2 ±O. I-甲醇20 80流动相选择试验取氯桂丁胺对照品，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成100ug/ml的供试液，取 20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。试验了以下几种流动相，结果记录在表I中。表I
名称体积比保留时间，分钟分离状况氯桂丁胺3, 4-二氯苯丙烯酸甲醇-水80:208.88,8两峰重叠75:25121270:302121乙腈-水80:207. 251.91两峰虽能分开，但中间体峰的保留时间太短75:256.22. I70:305.482. 17甲醇-缓冲溶液80:208.76.3分离较好乙腈-缓冲溶液82:185. 204. 08分离较好实验结果表明pH对3，4_ 二氯苯丙烯酸的分离影响较大，其在酸性条件下较稳定，用醋酸盐缓冲溶液pH4.2±0. I代替水。两个系统分离效果都不错，醋酸盐缓冲溶液 pH4.2±0. I-甲醇20 80系统，主峰尖锐对称，保留时间适中，从分离效果和节省费用考虑，故选用醋酸盐缓冲溶液(PH4. 2±0. I)-甲醇(20 : 80，体积比)作为流动相。醋酸盐缓冲溶液配制法称取醋酸铵I. 4g，加超纯水950ml，搅拌使溶解，加冰醋酸约2. 6ml，调节ρΗ4. 2±0· 1，补水至IOOOml即得。(2)系统适应性试验取氯桂丁胺、中间体3，4- 二氯苯丙烯酸适量，精密称定，分别加甲醇溶解并稀释成约100ug/ml的溶液,在上述色谱条件下,取20ul注入液相色谱仪,记录色谱图。理论板数以氯桂丁胺峰计为4456。氯桂丁胺及制备工艺可能引入的杂质(杂质一、二、三、四)及总残渣，同上述操作，考察色谱条件及分离效果，均能得到较满意的结果。保留时间分别为氯桂丁胺8. I分钟，杂质一 4. 9分钟，杂质二 11.6分钟。破坏性试验酸破坏取氯桂丁胺供试液(100ug/ml)3ml，加稀盐酸2ml，置沸水浴中加热2小时，用10%氢氧化钠调节pH近中性，过滤。碱破坏取氯桂丁胺供试液(100ug/ml) 3ml，加10%氢氧化钠2ml，置沸水浴中加热2小时，用稀盐酸调节pH近中性，过滤。双氧水破坏取氯桂丁胺供试液(100ug/ml) 3ml，加双氧水1ml，放置I小时，过滤。强光照射强光4500Ix±500Ix照射20天的样品，加甲醇制成100ug/ml的供试液。
7
分别取上述已破坏的样品20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。酸碱破坏的样品在
8.3分钟、5. I分钟的峰，分别于氯桂丁胺、3，4-二氯苯丙烯酸的保留时间相吻合(由于更换了色谱柱，保留时间稍有变化)，可以认为本品经酸、碱破坏后的分解产物即是中间体3， 4-二氯苯丙烯酸。强光照射的样品，色谱峰变化不大。双氧水破坏的样品在2. 7分钟有一个大峰，其它峰没有明显变化，说明对酰胺键没有影响，主要是侧链C = C双键被氧化。试验证明本品的各杂质峰在主峰保留时间的二倍以内，均能分离完全，且不干扰主峰测定。测得的分离度，理论板数也符合要求，所设色谱条件可行。检测限取杂质一 8. Ong/ml的供试液20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得检测限为 O. 16ng0取杂质二 7. 7ng/ml的供试液20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得检测限为
O.15ng。校正因子测定取氯桂丁胺对照品与杂质一、杂质二适量，精密称定，分别加入甲醇溶解并稀释制成约各含O. 5ug/ml的混合溶液，摇匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，计算校正因子。结果见表2。表2校正因子
权利要求
1.一种氯桂丁胺的质量控制方法，其特征在于包括氯桂丁胺的含量和有关物质的测定。
2.权利要求I所述质量控制方法，其特征在于氯桂丁胺含量的测定方法是供试品溶液的制备取样品约2. 5mg，精密称定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇勻，该样品每Iml含供试品IOOug,备用；对照品溶液的制备取对照品约2. 5mg，精密称定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇勻，该样品每Iml含对照品IOOug,备用；其中对照品制备取氯桂丁胺一次精制品350克，去离子水2500ml，浓氨水40ml，加热搅拌至氯桂丁胺为熔融状态，回流10分钟，静置分层，降温，氯桂丁胺固化。倾出上层水。 加入去离子水1000ml，加热搅拌回流10分钟，静置分层，降温，氯桂丁胺固化。倾出上层水 (以上操作的目的是去除少量存在的中间体3，4 二氯苯基丙烯酸)，加入80%乙醇600ml， 活性炭20克，加热搅拌回流20分钟，热滤，滤液于10 15°C放置5 6小时自然结晶，过滤，用75%乙醇150ml洗涤结晶，滤干，红外干燥至恒重。得氯桂丁胺二次精制品；氯桂丁胺二次精制品260克，80%乙醇440ml，加热至回流，热滤。滤液于10 15°C放置5 6小时自然结晶，过滤，结晶用75%乙醇IOOml洗涤，滤干，红外干燥至恒重，得氯桂丁胺对照品。系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶做为填充剂，以醋酸盐缓冲溶液-甲醇(20 : 80，体积比) 为流动相；流速为每分钟Iml ;检测波长为276nm，理论板数按氯桂丁胺峰计算应不低于 2000 ；其中醋酸盐缓冲溶液的制备醋酸I. 4g，加水980ml使溶解，加冰醋酸约2. 6ml，调节 ρΗ4· 2±0· 1，补水至 1000ml，摇匀。含量测定取供试品溶液20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氯桂丁胺对照品溶液20ul，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
3.权利要求I所述质量控制方法，其特征在于氯桂丁胺有关物质含量的测定方法是 对照品溶液稀释为每Iml含氯桂丁胺O. 5ug ；照含量项下的方法试验，取对照液20ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%，再取供试溶液和稀释后的对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试溶液色谱图中显示的杂质峰，除溶剂峰外，各杂质峰面积的总和不得大于对照液主峰的面积(O. 5% )。
4.权利要求I所述质量控制方法，其特征在于还包括残留溶剂吡啶的测定。
5.权利要求4所述质量控制方法，其特征在于该方法中残留溶剂吡啶的测定方法是 色谱条件与系统适用性以直径为O. 25 O. 18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱长I. 6m,内径3. 2mm,柱温170°C，进样器温度200°C，氢火焰离子化检测温度为200°C，内标物苯与吡啶的分离度不小于I. 5，理论板数按吡啶峰计算应不低于 1000 ；内标溶液的制备精密量取苯适量，加二甲亚砜-水(3 7)混合溶剂溶解并稀释成每 Iml含IOug的溶液，摇匀，密闭保存，作为内标溶液；标准溶液的制备精密量取吡啶适量，加同一混合溶剂并稀释成每Iml含IOug的溶液，摇匀，密闭保存，作为标准溶液；供试品溶液的制备精密称取本品适量，加同一混合溶剂溶解并稀释成每Iml含50mg 的溶液，作为供试品溶液；测定方法精密量取标准溶液和供试品溶液各1ml，分置于顶空进样瓶中，并分别精密加入内标溶液Iml、同一混合溶剂Iml，混合，在60°C恒温水浴中加热30分钟，用顶空进样法进样，同时进行空白试验，供试品溶液所得的峰面积比不得大于由标准溶液所得峰面积比 (O. 02% )。
6.权利要求I所述质量控制方法，其特征在于还包括鉴别。
7.权利要求6所述质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法是取本品50克，置IOml试管，加lmol/L盐酸羟胺的1，2_丙二醇溶液4ml，煮沸5分钟， 使溶液呈黄色，放置至室温，加5%三氯化铁溶液5 6滴，轻摇，放置片刻，显紫红色，加I， 2-丙二醇2ml，静置，两液界面的紫红色更加明显可辨。
8.权利要求6所述质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法是在含量项下记录的色谱图中供试品主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致。
9.权利要求6所述质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法是本品的红外吸收图谱应与对照品的图谱一致。
全文摘要
本发明涉及氯桂丁胺的质量控制方法，属于药品质量控制技术领域。本发明通过一定的化学处理和条件探索，通过高效液相法对氯桂丁胺的有关物质、含量和残留溶剂进行了分析，提供了一种氯桂丁胺质量控制方法，该方法能够快速、准确的检测出氯桂丁胺的含量。
文档编号G01N30/02GK102590391SQ201210062100
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月2日 优先权日2012年3月2日
发明者于忠文, 林春, 高然 申请人:威海迪素制药有限公司, 迪沙药业集团山东迪沙药业有限公司, 迪沙药业集团有限公司