专利名称：用共振散射光谱测定吡哌酸的方法
技术领域：
本发明涉及分析化学，具体是用共振散射光谱测定吡哌酸的方法。
背景技术：
卩比哌酸(Pipemidicacid)化学名称为8_こ基-5_氧代_5，8_ ニ氢_2 (I-哌嗪基)-(2，3-d)嘧啶-6-羧酸，简称PPA，是ー种吡啶酮酸类抗菌药，它具有抗菌谱广、活性 强、毒性低等特点，是ー种治疗肠道疾病的常用药物。因此，监控吡哌酸的质量有着重要的意义。目前，測定吡哌酸的方法主要有分光光度法，伏安法，示波极谱法，滴定法，化学发光法，荧光光谱法，高效液相色谱法等。这些方法中大多数都具有很多明显的缺点。如示波滴定法中所用的汞是ー种剧毒物，对操作者的健康很不利，而高效液相色谱法因仪器昂贵，操作过程较为烦琐很难普及；分光光度法操作虽然简单，但灵敏度不高，干扰大。寻找ー种操作简便，价廉，灵敏的測定吡哌酸含量的方法很有必要。目前尚未见共振散射光谱法測定吡哌酸的报道。本发明基于吡哌酸与四苯硼钠在PH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中形成离子缔合物微粒，该微粒在480 nm波长处产生ー个共振散射光谱峰，且共振散射強度与吡哌酸的浓度呈线性关系，据此，建立了一个测定吡哌酸的共振散射光谱分析新方法。
发明内容
本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供一种简单快速的用共振散射光谱测定吡哌酸的方法。实现本发明目的的原理是在pH 3. 6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，吡哌酸与四苯硼钠反应形成离子缔合物微粒，该微粒在480 nm波长处产生ー个共振散射光谱峰，且共振散射強度与吡哌酸的浓度呈线性关系，据此建立ー个用共振散射光谱测定吡哌酸的方法。用共振散射光谱测定吡哌酸的方法，包括如下步骤
(1)取5支5mL的刻度试管，依次移取100 800 μ L pH 3. O 4. 8的醋酸-醋酸钠缓冲液，50 700 UL 2. O mmol/L的四苯硼钠溶液，再加入10 950 μ L浓度为200 μ g/mL的吡哌酸标准溶液，混匀，室温放置20分钟，用二次蒸馏水稀释至2. O mL，混匀，作标准体系；
(2)另取I支5mL的刻度试管，用步骤(I)的方法，但不加吡哌酸标准液制备空白对照体系溶液；
(3)分别取按步骤(I) (2)制备的吡哌酸标准溶液及空白对照体系溶液适量，置于比色皿中，于荧光分光光度计上，设置光电倍增管电压，入射狭缝及激发狭缝仪器參数，在激发波长等于发射波长的条件下，同步扫描，得到体系的共振散射光谱，測定标准体系480 nm处的共振散射强度为/，测试空白对照体系的共振散射强度为h,并计算△ / = I-I0 ；
(4)以ΛJ对吡哌酸标准溶液的浓度关系做工作曲线；
(5)被测物样品測定取含吡哌酸的原料药，可以是研钵中研细的吡哌酸胶囊剂内容物、吡哌酸片剂药品，称取适量药品置于器皿中，每100毫克吡哌酸加O. 01 mol/L NaOH溶液I. O mL,振摇，使吡哌酸完全溶解，再加二次蒸馏水制成含吡哌酸的浓度在I. O 95μ g/mL之间，将此溶液用滤纸过滤，取适量滤液，按步骤(I) (3)操作，但步骤(I)不加吡哌酸标准溶液，而是加样品液，测定样品的共振散射强度为/#，空白的共振散射强度为ο，算出被测物的AI样=I样-ェ样ο ;
(6)根据样品测得的，查步骤(4)的工作曲线，计算出被测物药品吡哌酸的含量。所述的吡哌酸标准溶液配制方法是每100毫克吡哌酸标准品加O. 01 mol/LNaOH溶液I. O mL使溶解，再用二次蒸馏水稀释至需要的浓度。本发明的优点是与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，快速，试剂易得，灵敏度高。
图I为本发明实施例测定吡哌酸的部分共振散射光谱图。图中曲线a至c表示a: pH 3.6醋酸-醋酸钠缓冲液+O. 4 mmol/L四苯硼钠溶液；b: pH 3. 6醋酸-醋酸钠缓冲液+O. 4 mmol/L四苯硼钠溶液+20 μ g/mL批哌酸标准溶液；c: pH 3.6醋酸-醋酸钠缓冲液+O. 4 mmol/L四苯硼钠溶液+40 μ g/mL批哌酸标准溶液。
具体实施例方式实施例
(1)取5支5mL的刻度试管，依次移取300 μ L pH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，400μ L 2. O mmol/L 的四苯硼钠溶液，再加入 10 μ L、50 μ L、200 μ L、400 μ L、950 μ L 浓度为200 μ g/mL的吡哌酸标准溶液,混匀，室温放置20分钟,用二次蒸懼水稀释至2. O mL,混匀；
(2)另取I支5mL的刻度试管，用步骤(I)的方法，但不加吡哌酸标准溶液制备空白对照体系溶液；
(3)分别取按步骤(I) (2)制备的吡哌酸标准溶液及空白对照体系溶液适量，置于Icm比色皿中，于Cary Eclipse型荧光分光光度计上，设置光电倍增管电压为450v，入射狭缝、激发狭缝均为2. 5nm，激发波长等于发射波长的条件下，同步扫描，得到体系的共振散射光谱，測定标准体系480 nm处的共振散射强度为ム测试空白对照体系的共振散射强度为J0，计算 Δ J = I-I0 ；
(4)以ΛJ对吡哌酸标准溶液的浓度C做工作曲线，回归方程为Λ J =8. 55C +52. 6，吡哌酸浓度C的单位为μ g/mL ；
(5)被测物样品測定1)精密称取吡哌酸原料药100mg 2份，分别置于100 mL容量瓶中。2)精密称取规格为0. 25g的吡哌酸片20片，称定重量为5. 730g，置于研钵中研细，称取115 mg 2份，分别置于100 mL容量瓶中。按每100毫克吡哌酸加0. 01 mol/L NaOH溶液1.0 mL，分别置于上述4个容量瓶中，振摇，使吡哌酸完全溶解后，用二次蒸馏水定容至100mL，摇匀，用滤纸过滤；取0. I mL滤液，按步骤(I) (3)操作，但不加吡哌酸标准溶液，测定样品的共振散射强度为/#，空白的共振散射强度为/#。。算出被测物吡哌酸的Λ/#= J
样_1样0 ;(6)根据样品测得的，查步骤(4)的工作曲线，计算出被测物吡哌酸药品的含量。本发明实施例測定吡哌酸原料药2份，吡哌酸片2份，计算后吡哌酸原料药含量分别为99. 96%,99. 85% ;吡哌酸片含量分别为100. 1%、100. 7%，均符合中国药典的标准。本发明实施例测定吡哌酸的线性范围为1.0 95レ8/111し检出限为0.05 Ug/ mL。
权利要求
1.用共振散射光谱测定吡哌酸的方法，其特征是測定方法包括步骤如下 (1)取5mL的刻度试管，依次移取100 800 μ L pH 3. O 4. 8的醋酸-醋酸钠缓冲液，50 700 μ L 2. O mmol/L的四苯硼钠溶液，再加入10 950 μ L浓度为200 μ g/mL的吡哌酸标准溶液，混匀，室温放置20分钟，用二次蒸馏水稀释至2. O mL，混匀； (2)另取5mL的刻度试管，用步骤(I)的方法，但不加吡哌酸标准液制备空白对照体系溶液； (3)分别取按步骤(I) (2)制备的吡哌酸标准溶液及空白对照体系溶液适量，置于比色皿中，于荧光分光光度计上，设置光电倍增管电压，入射狭缝、激发狭缝，激发波长等于发射波长的条件下，同步扫描，得到体系的共振散射光谱，測定标准体系480 nm处的共振散射强度为/，测试空白对照体系的共振散射强度为ム，计算Λ J = I-I0 ； (4)以ΛJ对吡哌酸标准溶液的浓度关系做工作曲线； (5)被测物样品測定取吡哌酸原料药，或置于研钵中研细的吡哌酸胶囊剂内容物、批哌酸片剂药品，称取适量药品置于器皿中，每100毫克吡哌酸加O. 01 mo I/L NaOH溶液I. OmL,振摇，使吡哌酸完全溶解，再加二次蒸馏水制成含吡哌酸的浓度在I. O 95 μ g/mL之间，将此溶液用滤纸过滤，取适量滤液，按步骤(I) (3)操作，但步骤(I)不加吡哌酸标准溶液，而加样品液，测定样品的共振散射强度为/#，空白的共振散射强度为/#(1，算出被测物的Δ J样=J样-J样ο ; (6)根据样品测得的，查步骤(4)的工作曲线，计算出被测物药品吡哌酸的含量。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征是所述的吡哌酸标准溶液配制方法是每100毫克吡哌酸标准品加O. 01 mol/L NaOH溶液I. O mL使溶解，再用二次蒸馏水稀释至需要的浓度。
全文摘要
本发明公开了一种用共振散射光谱测定吡哌酸的方法，主要是利用吡哌酸与四苯硼钠在pH3.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中形成离子缔合物微粒，该微粒在480nm波长处产生一个共振散射光谱峰，且共振散射强度与吡哌酸的浓度呈线性关系，据此，建立一个测定吡哌酸含量的共振散射光谱分析新方法。本发明的优点是本测定方法与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，操作简便，快速，试剂易得，灵敏度高。
文档编号G01N21/63GK102645422SQ20121010820
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月13日 优先权日2012年4月13日
发明者梁爱惠, 胡茂辉, 蒋治良 申请人:广西师范大学