专利名称：一种鉴别药用植物中活性成分组的方法
技术领域：
本发明属于天然药用植物的鉴别领域，具体地，涉及一种鉴别药用植物中活性成分组的方法。
背景技术：
指纹图谱技术是借鉴法医学“指纹”的概念，针对天然产物中活性成分的多样化与复杂性而提出的，试图能够一一说明这些活性成分而对其深入研究、科学评价或有效控制其质量的一种重要技术。指纹图谱是利用现代信息采集技术和一定的定性、定量分析手段得到的能够显现天然产物特性的图像、图形、光谱及其数据等[周玉新，中药指纹图谱研究技术[M].北京，化学工业出版社.2002]，目前国际上已公识。
指纹图谱主要包括生物指纹图谱和化学指纹图谱两大类[罗国安等，中药指纹图谱的分类和发展，中国新药杂志2002，11(1) :46-51]。生物指纹图谱包括基因组学指纹图谱、蛋白质组学指纹图谱；化学指纹图谱根据所采用的化学或物理分析手段不同，主要包括色谱法和谱学法两大类。色谱法包括薄层色谱(thin layer chromatography, TLC);气相色谱(gas chromatography, GC);高效液相色谱(liquid chromatography, HPLC);高效毛细管电泳法(capillary chromatography, HPCE),主要特点是以分离技术为基础。谱学法包括紫外光谱(UV);红外光谱(IR);近红外光谱(NIR) ；X-光衍射(XRD);质谱(MS)与核磁共振(NMR)等，主要特点是以化合物分子结构鉴定为基础。指纹图谱出现后，虽然发展很快，但是，用单一手段完成的化学指纹图谱，面对活性成分复杂的天然产物，既要解决这些活性成分是什么，又要解决活性成分之间的比例及总量，存在着严重的局限性，因此，限制了化学指纹图谱的深度发展。IGD核磁共振碳谱指纹图谱技术，也叫反门控去偶核磁共振碳谱(IGD13C NMR)偶联(coupling)指纹图谱技术是在我们研究多年的核磁共振氢谱(1H NMR)指纹图谱技术[赵天增，等.1HNMR指纹法鉴定植物中药，中草药2000，31 (11) =868-870]的基础上提出的IGD核磁共振碳谱指纹图谱偶联其他手段提供的信息而形成的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。赵天增等在国内外较早提出并推广应用了天然产物核磁共振氢谱(1H NMR)指纹图谱技术，但由于不同磁场强度的仪器得到的同一样品的核磁共振氢谱的外貌差别很大，加之核磁共振氢谱谱峰之间重叠厉害，严重制约了核磁共振氢谱指纹图谱技术的发展。对于核磁共振碳谱而言，不存在上述氢谱的两个局限性，孙庆雷等[CN200510044396. 0]在国内外较早提出并应用了中药常规核磁共振碳谱(13C NMR)指纹图谱技术。但由于常规碳谱谱峰强度与对应碳数目不成比例，造成常规核磁共振碳谱不具有定量性；为此，IGD (一种碳谱谱峰强度与对应碳数目成比例的技术)核磁共振碳谱指纹图谱技术应运而生，其各碳峰峰强与对应碳数目成比例。也就是说，目前现有技术解决鉴别植物品种和评价植物源产品质量的定性和定量分析方面存在着很大的局限性，但是市场和民生迫切需要这种方法。众所周知，中药是历史悠久的药物，现代中药多为植物提取物加工而成。中药材大多受到采摘地域和采摘时间的限制，人工培育的中药材的效果大多不及天然中药材的效果。特别需要一种方法能够鉴别植物品种及其提取物中的各种活性成分，并且将其定量，然后选择出最好的提取物成分或其组合物，以便充分发挥其效果。另外，中药走出国门的障碍之一是没有组成成分及其定量标识，如果能够解决这个问题，完全有理由相信，中药可给人类带来更大的福音。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明的目的在于提供一种鉴别药用植物中活性成分组的方法为了实现上述目的，本发明提供一种鉴别药用植物中活性成分组的方法，包括以下步骤I)对药用植物进行提取，得到含有活性成分组的药用植物特征提取物；2)对所述特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式(IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测)测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；3)通过定量分析手段得到所述标准参照品的绝对含量；4)利用所述特征峰峰强度(各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度)的比值和所述绝对含量，计算出各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组的含量。其中，采用具有获得清晰IGD核磁共振碳谱指纹图谱的提取工艺作为所述药用植物的提取方式。本发明所述方法，步骤I)中特征提取物的提取方法和制备方法，都是采用常规的方法先进行实验并记录实验过程(不同的提取物提取和制备方法不同)，然后利用IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测方法检测得到的提取物，从图谱的清晰程度和是否具有代表性的活性成分组来确定都是哪些提取物是特征提取物，从而筛选出最佳的提取方法和制备方法。其中，步骤2)中，根据所述特征提取物的结构特性是从IGD核磁共振碳谱指纹图谱中选择碳峰作为各活性成分特征峰。进一步地，所述碳峰为化学位移差别较大的活性成分组中各活性成分的碳峰。更进一步地，所述化学位移差别较大指峰和峰之间的化学位移差别> 0. 01。其中，步骤2)中所述峰强度采用峰高法、面积积分法或重量法计算。其中，步骤3)中所述定量分析手段为高效液相(HPLC)、气相色谱(GC)、薄层色谱法(TLC)或称量法。其中，步骤2)和步骤3)中所述标准参照品为内标物或外标物。其中，步骤3)中所述标准参照品的绝对含量是指用定量分析手段测定的标准参照品的质量百分含量。
其中，步骤4)中，计算各活性成分的含量的偶联公式为
权利要求
1.一种鉴别药用植物中活性成分组的方法，包括以下步骤 1)对药用植物进行提取，得到含有活性成分组的药用植物特征提取物； 2)对所述特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度； 3)通过定量分析手段得到所述标准参照品的绝对含量； 4)利用所述各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度的比值和所述绝对含量，计算出各活性成分的含量及活性成分组的含量。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，采用具有获得清晰IGD核磁共振碳谱指纹图谱的提取工艺作为所述药用植物的提取方式。
3.根据权利要求I或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中，根据所述特征提取物的结构特性是从IGD核磁共振碳谱指纹图谱中选择碳峰作为各活性成分特征峰。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述碳峰为化学位移差别较大的活性成分组中各活性成分的碳峰。
5.根据权利要求r4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述峰强度采用峰高法、面积积分法或重量法计算。
6.根据权利要求r4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述定量分析手段为高效液相、气相色谱、薄层色谱法或称量法。
7.根据权利要求广4任意一项所述的方法，其特征在于，步骤2)和步骤3)中所述标准参照品为内标物或外标物。
8.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述标准参照品的绝对含量是指用定量分析手段测定的标准参照品的质量百分含量。
9.根据权利要求rs任意一项所述的方法，其特征在于，步骤4)中，计算各活性成分的含量的偶联公式为
10.根据权利要求I、任意一项所述的方法，其特征在于，所述活性成分组为单味药用植物中的活性成分组或药用植物衍生品中的活性成分组。
全文摘要
本发明提供了一种鉴别药用植物中活性成分组的方法。该方法包括对药用植物进行提取，得到含有活性成分组的药用植物特征提取物；对所述特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，根据指纹图谱得到特征提取物中若干个活性成分特征峰峰强度；并用相同方式测定出所述各活性成分相应标准参照品的特征峰峰强度；通过定量分析手段得到所述标准参照品的绝对含量；利用所述各活性成分特征峰峰强度及相应标准参照品的特征峰峰强度的比值和所述绝对含量，通过偶联公式计算出各活性成分的含量及活性成分组的含量。本发明能准确地反映药用植物中含有的活性成分以及它们之间的比例及总量，达到准确地对药用植物品种鉴别和药用植物源产品质量评价的目的。
文档编号G01N24/08GK102749348SQ20121020148
公开日2012年10月24日 申请日期2012年6月18日 优先权日2012年6月18日
发明者张海艳, 范毅, 董建军, 赵天增, 郭唯 申请人:河南省生物技术开发中心, 河南省科高植物天然产物开发工程技术有限公司