专利名称：虾中铅的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种铅的测定方法，具体涉及一种虾中铅的测定方法，属于食品检验的技术领域。
背景技术：
目前，有关铅浓度的检测方法已经很多，常用的有分子光谱法、火焰原子吸收光谱法、石墨炉原子吸收光谱法、氢化物-原子荧光光谱法等。火焰原子吸收光谱法、石墨炉原子吸收光谱法和氢化物-原子荧光光谱法仪器昂贵，成本高，无法广泛应用到实际检测中，而分光光度法成本相对低，操作也简单。 测铅的新型显色剂Meso-四-(3，5_ 二溴_4_羟基苯)卟啉被称为“超高灵敏显色剂”，常被用在水中铅的快速检测中。但是显色反应条件为强碱性，此条件下，样品中的钙镁等离子会生成沉淀，干扰检测结果，而且受分光光度计本生的检测限限制，无法满足国标中对虾中铅最低限的要求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供虾中铅的测定方法，以解决现有技术所存在的诸多不足之处。本发明用沉淀的方法对虾中铅进行了富集，采用Meso-四-(3，5_ 二溴-4-羟基苯)叶啉分光光度法检测虾中铅的含量，并避免使用催化剂8-羟基喹啉，简化操作步骤，提高方法准确性，本发明适用于规模化检测。本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现虾中铅的测定方法，其特征在于，包括以下步骤(a)制备样品取虾肉在坩埚中先炭化，然后置马弗炉中灰化，取出坩埚，放冷后再加硝酸，加热直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，用碱调节样液的PH，移入容量瓶用去离子水定容，制成样液a ；移取样液a于3只比色管中，分别加入的Na2CO3，然后分别移入1、2、3号离心管，离心，弃上清液；在I号离心管加入氢氧化钠，混匀，离心，取上清液倒入2号离心管，混匀，离心，取上清液倒入3号离心管，混匀，离心，取上清液移入比色管中，此操作重复3次，制成待测样液b ;(b)制备标准曲线移取铅标准液于容量瓶中，用去离子水定容，得到铅标准系列，然后移入比色管中，依次加入显色剂，氢氧化钠，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏齐U，用去离子水定容，用试剂空白作参比，在分光光度计中，47(T490nm处测其吸光值，根据实验数据绘制标准曲线；(C)检测结果
移取样液b于比色管中，然后加入显色剂，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，最后用去离子水定容，用试剂空白作参比，47(T490nm处测其吸光值，根据标准曲线得出样液中铅含量。步骤(a)中，所述马弗炉的温度为40(T60(TC，灰化时间为4 10h。步骤(a)中，所述虫下肉硝酸=10 40g :1. 00 5. 00ml。步骤(a)中,所述碱为氢氧化钠,所述pH为2 5。步骤(a)中，所述容量瓶为50ml。步骤(a)中，所述移取样液a为5. 00^20. 00ml。步骤(a)中，所述Na2CO3的浓度为0. 01 lmol/1，体积为I. 00 5. OOml0步骤(a)中，所述离心2 IOmin,转速为3000 8000rpm。步骤(a)中，所述的氢氧化钠浓度为0. f lmol/1，体积为I. 00^5. 00ml。步骤(b)和(c)中，所述显色剂为Meso-四-(3, 5_ 二溴_4_轻基苯)P卜啉。步骤(b)中，铅标准液定容得到浓度为0. 10 u g/ml、0. 20 U g/ml、0. 30 U g/ml>
0.40u g/ml>0. 50u g/ml、0. 60u g/ml>0. 70u g/ml>0. 80u g/ml、0. 90u g/ml>I. OOu g/ml铅标准系列。步骤(b)中，然后，容量瓶的体积为IOml,移入比色管中的铅标准液为
1.00^10. OOml,显色剂浓度为0. 01% 0. 05%,体积为0. 50^10. OOml,氢氧化钠浓度为
0.I lmol/1，体积为 2. 00 10. 00ml。步骤(b)和(C)中，所述沸水浴中加热时间为f30min。步骤(b)和(c)中，所述增敏剂为1% 20%曲拉通X-IOO(OP)，体积为I. 00 5. 00ml。步骤(c)中，移取样液b 1.0(Tl0. OOml于比色管中，然后加入0. 5(TlO. OOml显色剂。本发明的有益效果本发明米用的显色剂Meso-四-(3, 5_ 二溴_4_轻基苯)卩卜啉被称为“超闻灵敏显色剂”，常被用在水中铅的快速检测中。本发明采用的沉淀法不仅对待测样液进行了富集，克服了仪器及显色剂检测限的局限，同时避免了钙镁等离子对检测结果的干扰，并使操作更加简单易操作，同时节约了成本。
以下结合附图
和具体实施方式
来进一步说明本发明。图I为本发明的工艺流程图。图2为本发明的显色剂和络合物的的光谱扫描图。图3为本发明的T(DBHP)P用量的影响图。图4为本发明的NaOH用量的影响图。图5为本发明的OP用量的影响图。图6为本发明的温度的影响图。图7为本发明的时间的影响图。图8为本发明的标准曲线图。图9为本发明的标准曲线图。具体实施例方式为了使本发明的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。实施例I虾中铅的测定方法的影响因素(I)测定显色剂及其络合物的吸收曲线，获得最大吸收波长。只要分别把把显色剂和络合物放入比色皿 中，用分光光度计进行波长扫描即可，只要操作人员会使用分光光度计就可以。通过络合物最大波长的选择实验,显色剂Meso-四-(3, 5_ 二溴_4_轻基苯)P卜啉的最大吸收波长为380nm，而生成的络合物的吸收峰在479nm处，见图2，系列I为显色剂的吸收光谱，系列2为生成络合物的吸收光谱。(2)分别研究显色剂用量、pH值调节剂、增敏剂用量、反应温度、时间对反应的影响。具体操作是其他条件不变，单因素改变。I)显色剂用量的选择在6只比色管中依次各加入4. OOml I U g/ml铅标准溶液，I. OOml氢氧化钠溶液(0. 3mol/l)，0. 50ml,0. 80ml,1. 30ml,1. 50ml,1. 80ml,2. OOml T(DBHP)P (0. 016%)，混匀后放入沸水浴中加热5min，加入I. OOml 0P(5%)，用水定容至10. OOml,以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，结果如图3。2 )氢氧化钠用量选择吸取4. OOml I u g/ml铅标准溶液于8支比色管中，分别加入T(DBHP)P (0. 016%)
I.Oml,依次再加入氢氧化钠溶液(0. 3mol/l) 0. IOml.O. 20ml,0. 40ml,0. 60ml,0. 70ml、
0.80ml、I. 00ml、I. 20ml，混匀后放入沸水浴中加热5min，加入I. OOml OP (5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，结果见图4。3)增敏剂用量的选择吸取4. OOmL I y g/ml铅标准溶液于8支比色管中，各加入T (DBHP)P (0. 016%)
1.50ml，氢氧化钠溶液(0. 3mol/l) 0. 50mL,混匀后放入沸水浴中加热5min，分别加入
0.OOml.O. 20ml,0. 40ml,0. 50ml,0. 60ml,0. 70ml,0. 80ml、I. OOml OP(5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，见图5。4)反应温度的选择吸取4.00ml I y g/ml铅标准溶液于6支比色管中，各加入T (DBHP) P (0. 016%)
1.50ml，氢氧化钠溶液(0. 3mol/l)0. 50mL，混匀后放入水浴锅中加热5min，温度分别设定为25°C、40°C、55°C、70°C、85°C、100°C，然后加入I. OOml OP(5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，见图6。5)时间对反应的影响吸取4. OOml I u g/ml铅标准溶液于5支比色管中，分别加入T(DBHP)P (0. 016%)
I.50ml,氢氧化钠溶液(0. 3mol/l) 0. 5ml,混勻后放入沸水浴中加热,加热时间分别设定为lmin、2min、3min、4min、5min，加入I. OOmLOP (5%)，用水定容，以试剂空白为参比，在分光光度计上测得其在479nm处的吸光值，结果见图7。实施例2本发明的检测应用
虾中铅的测定方法，如图I所示，包括以下步骤(a)制备样品取虾肉2(T25g于坩埚中，先炭化，然后置马弗炉中550°C，灰化5h，取出坩埚，放冷后再加I. OOml硝酸，小火加热不是干涸，直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，用2. 88mol/l氢氧化钠调节样液的pH至2 5，移入50ml容量瓶用去离子水定容，制成样液a ；移取样液a 10. OOml于3只比色管中，分别加入的Na2CO3，然后分别移入1、2、3号
离心管，离心，弃上清液；在I号离心管加入氢氧化钠(2. OOml 0. 3mol/l),混匀，离心，取上清液倒入2号离心管，混勻，5000rpm离心3min,取上清液倒入3号离心管,混勻，5000rpm离心3min,取上清 液移入比色管中，此操作重复3次，制成待测样液b。(b)制备标准曲线移取浓度为10. 0 U g/ml铅标准液0. 10、0. 20、0. 30、0. 40、
0.50,0. 60,0. 70,0. 80,0. 90,1. OOml于8个IOml比色管中，移取铅标准液于IOml容量瓶中，用去离子水定容得到浓度为0. IOiI g/ml、0. 20 u g/ml、0. 30 u g/ml、0. 40 u g/ml、
0.50u g/ml、0. 60u g/ml、0. 70u g/ml、0. 80u g/ml、0. 90u g/ml、I. 00u g/ml 铅标准系列.移入比色管中的铅标准液为4ml,然后依次加入I. 50ml显色剂,2. OOml 0. 3mol/l的氢氧化钠，将比色管放入沸水浴中加热3min，放冷水中冷却至室温，用5%曲拉通X-100 (OP)定容，用试剂空白调零，479nm处测其吸光值，根据实验数据绘制标准曲线，见图8。(C)检测结果移取待测样液b 6. OOml于比色管中，然后依次加入I. 50ml显色剂，将比色管放入沸水浴中加热3min，放冷水中冷却至室温，加I. OOml 5%曲拉通X-100 (0P),最后用去离子水定容，用试剂空白调零，479nm处测其吸光值为0. 035，根据标准曲线得出样液b中铅含量为0. 037 ii g/ml，计算得出虾中铅的含量为0. 099mg/kg。步骤(b)和(c)中，显色剂为Meso-四-(3，5_ 二溴-4-羟基苯)叶啉。使用剂量为 I. 50ml 0. 016% Meso-四-(3，5- 二溴-4-羟基苯)卟啉。实施例3本发明与石墨炉原子吸收光谱法应用的比较石墨炉原子吸收光谱法的主要步骤(a)样品制备取虾肉5. 0(T10. OOg在坩埚中先炭化，然后置马弗炉中灰化，取出坩埚，放冷后再加硝酸，加热直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，再用去离子水反复洗涤坩埚，洗液并入25ml容量瓶中，定容至刻度，备用。(b)测定仪器条件波长283. 3nm,狭缝0. 2nnTl. Onm,灯电流5mT7mA，干燥温度120°C，20s;灰化温度450°C，持续15s，原子化温度200(TC，持续4s，背景矫正为氘灯。标准曲线的绘制吸取系列铅标准10. 0, 20. 0,40. 0,60. 0,80. 0,100. Ong/ml各lOiil，注入石墨炉，测得吸光度值，并制成标准曲线，如图9。试样的测定分别吸取样液和试剂空白各10 yl，注入石墨炉，测得吸光度值，代入标准曲线，求得样液中铅的含量，见表I。本发明与石墨炉原子吸收光谱法的对比，见表2。表I石墨炉原子吸收光谱法的检测结果编号 Abs 浓度(Mg/1) SD RSD(%) 样品中铅含量______平均值(mg/kg)
10.680 136.955 0.0349 5.1284 20.375 52.003 0.0461 5.61590.094
30.410 59.787 0.0253 6.1767 _表2本发明与石墨炉原子吸收光谱法的比较
比较项目本发明方法石墨炉原子吸收法
检出限0.035(y g/L)0. 7ng/L
精密度L 2576
~回收率83. 5~93. 385. 3~101. 2本发明用沉淀法对待测样液进行了富集，采用显色剂Meso-四_(3，5_ 二溴_4_羟基苯)叶啉分光光度法对虾中铅进行了检测。沉淀法不仅对待测样液进行了富集，克服了仪器及显色剂检测限的局限，同时避免了钙镁等离子对检测结果的干扰，提高了结果的准确性。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
权利要求
1.虾中铅的测定方法，其特征在于，包括以下步骤 (a)制备样品 取虾肉在坩埚中先炭化，然后置马弗炉中灰化，取出坩埚，放冷后再加硝酸，加热直至残渣中无炭粒，待坩埚稍冷，用碱调节样液的PH，移入容量瓶用去离子水定容，制成样液a ； 移取样液a于3只比色管中，分别加入的Na2CO3，然后分别移入1、2、3号离心管，离心，弃上清液； 在I号离心管加入氢氧化钠，混匀，离心，取上清液倒入2号离心管，混匀，离心，取上清液倒入3号离心管，混匀，离心，取上清液移入比色管中，此操作重复3次，制成待测样液b ; (b)制备标准曲线 移取铅标准液于容量瓶中，然后用去离子水定容，得到铅标准系列，然后移入比色管中，依次加入显色剂，氢氧化钠，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏齐U，用去离子水定容，以试剂空白作参比，在分光光度计中，47(T490nm处测其吸光值，根据实验数据绘制标准曲线； (c)检测结果 移取样液b于比色管中，然后加入显色剂，将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，最后用去离子水定容，以试剂空白作参比调零，47(T490nm处测其吸光值，根据标准曲线得出样液中铅含量。
2.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述马弗炉的温度为40(T60(TC，灰化时间为4 10h。
3.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述虾肉硝酸=l(T40g :1. 00 5. OOml0
4.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述碱为氢氧化钠，所述pH为2 5。
5.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述容量瓶为50ml o
6.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述移取样液a 为 5. 00 20. 00ml。
7.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述Na2CO3的浓度为0. 01 I. Omol/1，体积为I. 00 5. 00ml。
8.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述离心2 lOmin，转速为 3000 8000rpm。
9.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(a)中，所述的氢氧化钠浓度为0. I I. Omol/1，体积为I. 00 5. 00ml。
10.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(b)和(c)中，所述显色剂为Meso-四-(3,5- 二溴-4-轻基苯)卩卜啉。
11.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(b)中，铅标准液定容得到浓度为 0. 10 u g/ml、0. 20 u g/ml、0. 30 u g/ml、0. 40 u g/ml、0. 50 u g/ml、0. 60 u g/ml、0.70 V- g/ml、0. 80 u g/ml、0. 90 u g/ml、I. OO u g/ml 铅标准系列。
12.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(b)中，容量瓶的体积为10ml，移入比色管中的铅标准液为I. (TlO. 0ml，显色剂的浓度为0. 01°/T0. 05%，体积为.0.50^10. 00ml，氢氧化钠浓度为 0. ri. Omol/1，体积为 2. 00^10. 00ml。
13.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(b)和(c)中，所述沸水浴中加热时间为f 30min。
14.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(b)和(c)中，所述增敏剂为1% 20%曲拉通X-100 (OP)，体积为I. 00 5. OOml0
15.根据权利要求I所述的虾中铅的测定方法，其特征在于步骤(c)中，移取样液bl. 00^10. OOml于比色管中，然后加入0. 5(TlO. OOml显色剂。
全文摘要
一种虾中铅的测定方法，包括(a)制备样品虾肉在坩埚中先炭化，然后灰化，调pH，制成样液a；移取样液a于比色管中，加入Na2CO3，离心，弃上清液；然后加入NaOH，混匀，离心取上清液移入比色管中，制成待测样液b。(b)制备标准曲线制备系列浓度的铅标准液，移入比色管，依次加入显色剂，氢氧化钠，然后放入沸水浴中加热，再冷却至室温，加增敏剂，最后定容，测其吸光度，绘制标准曲线。(c)检测结果移取样液b于比色管中，加入显色剂，然后将比色管放入沸水浴中加热，放冷水中冷却至室温，加增敏剂，最后用去离子水定容，测其吸光值，得出铅含量。本发明操作简单提高了准确性。
文档编号G01N21/31GK102749298SQ201210237889
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月10日 优先权日2012年7月10日
发明者何平, 钟耀广 申请人:上海海洋大学