肾炎清片中黄芪主要成分检测方法
【专利摘要】本发明涉及中药肾炎清片中黄芪主要成分检测方法，该方法包括以下步骤：步骤1，对照品溶液的制备，步骤2，供试品溶液的制备，步骤3，将对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，步骤4，根据色谱图用外标两点法对数方程计算供试品中黄芪甲苷的含量。
【专利说明】肾炎清片中黄芪主要成分检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药制剂的检测方法，特别是肾炎清片中黄芪主要成分检测方法。
技术背景
[0002]肾炎清片，为一种治疗肾炎的中药制剂，是由黄芪、益母草、白茅根、篇蓄、瞿麦、小 蓟、石韦、地榆炭、土大黄和甘草制成。
[0003]肾炎清片方中益母草，性苦、辛而微寒，具有利水消肿、解毒活血之功，为方中君 药。白茅根性甘、寒，既能凉血止血，又能清热利尿、导热下行，适宜于膀胱湿热蕴结而致的 血尿。本方用其与益母草共为君药，可使妄行之血归于脉中而降血尿。篇蓄与瞿麦二者合 用，善于清下焦湿热而利水通淋；小蓟善治下焦结热所致尿涩赤痛、血淋尿血；石韦能上清 肺热、下走膀胱而利尿通淋；地榆长于治疗下焦病证，在本方中携诸药清热下焦火热之邪， 破解下焦淤血；土大黄可治疗血热所致的咳血、吐血、尿血、痔血、崩漏，以及外伤出血等证。 黄芪功于补气升阳、益卫固表、利水消肿、托疮生肌。肾炎清片对于降低急性肾小球肾炎、慢 性肾小球肾炎、隐匿性肾小球肾炎、紫癜性肾炎等原因所致血尿有明显作用，可减少和减轻 糖皮质激素治疗过程中的不良反应。
[0004]为使该药物生产标准化，达到疗效确切，质量稳定的目的。本发明经过研究，建立 了 一种检测本发明制剂中有效成分黄芪甲苷的方法，该方法采用HPLC法对其中的有效成 分黄芪甲苷进行含量测定。该方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均 一、稳定、有效、可控”。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种中药肾炎清片中黄芪主要成分的检测方法，该检测方法包括，对 药品中的药物有效成分黄芪甲苷进行含量测定，该测定方法采用HPLC法。
[0006]本发明的检测方法，包括以下步骤:
[0007]步骤I，对照品溶液的制备，
[0008]步骤2，供试品溶液的制备，
[0009]步骤3，将对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，
[0010]步骤4，根据色谱图计算供试品中黄芪甲苷的含量，
[0011]其中，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-水溶液，检测 器采用蒸发光散射检测器。
[0012]根据本发明，流动相乙腈-水的体积比为1:0.538-9。
[0013]根据本发明，其中步骤I所述对照品溶液的制备，方法如下:取黄芪甲苷对照品加 甲醇制成溶液。优选地，方法如下:取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每Iml含0.2-0.6mg的溶液。
[0014]根据本发明，其中步骤2中所述供试品溶液的制备，方法如下:取检测样品，加入 氨水超声处理，离心得上清液，过C18柱，甲醇洗脱，滤过，即得。优选地，方法如下:检测样品研细，取0.5-3g，加入2-8%氨水10-50ml，超声处理20min以上，离心，取上清液5_25ml，上样于C18上，10-20ml水洗，弃去，甲醇洗脱，微孔滤膜滤过，即得。
[0015]根据本发明实施方式之一，其中C18的重量不少于150mg。
[0016]根据本发明的另一实施方式，其中微孔滤膜的孔径为0.22-0.45 U m。
[0017]根据本发明，其中步骤3的方法如下:分别取对照品溶液10-20ia，供试品溶液10-20 yl，注入液相色谱仪，得到色谱图，用外标两点法对数方程计算黄芪甲苷含量。
[0018]本发明目的在于检测中药肾炎清片中的药物有效成分黄芪甲苷的含量，并通过该有效成分的含量了解肾炎清片在生产过程中是否达到生产要求，起到控制产品质量的作用。
[0019]根据本发明的检测方法，所得供试品中每片黄芪甲苷的含量不得少于0.15mg。
[0020]本发明找到一种合适的质量控制方法来确定产品的质量，该质量控制方法较为完善，操作性强，重现性好，测定偏差小，稳定性好，精密度高。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1黄芪甲苷标准曲线。
【具体实施方式】
[0022]以下通过实施例，进一步说明本发明，但不作为本发明的限制。
[0023]实验例I黄芪甲苷含量测定方法学研究
[0024]本发明的含量测定方法，是通过筛选获得的，筛选过程如下:
[0025]1、仪器与试药
[0026]仪器高效液相色谱仪:Waters2695进样系统，Waters2424ELSD检测器；WatersEmpower色谱工作站；Mettler AE240 (十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司)。
[0027]试药黄芪甲苷购自中国药品生物检定所(批号110781-200613)
[0028]乙腈为色谱纯；成品样品及阴性对照品(由本公司提供)。
[0029]2、色谱条件的选择
[0030]色谱柱:AgilentZORBAX SB-C18, 5 u m, 250X4.6mm ;流动相:乙腈:水=35:65 ;柱温:30°C ;流速lml/min ;ELSD检测器。在此色谱条件下，黄芪甲苷与样品中其它组分分离良好，理论板数按黄芪甲苷对照品峰计大于2000。
[0031]3、供试品溶液的制备
[0032]取重量差异项下肾炎清片，研细，混匀，取1.5g，精密称定，置三角瓶中，精密加入4%氨水20ml，超声处理20min，离心，精密量取上清液10ml，上样于已处理好的C18(250mg)上，5ml水洗，弃去，甲醇洗脱并定容至2ml的容量瓶中，摇匀，微孔滤膜(0.45um)滤过，即得。
[0033]4、空白试验
[0034]取缺黄芪的阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，依法进样测定，记录色谱图。结果，在对照品相同保留时间处无吸收峰。表明样品中无干扰黄芪甲苷的成分存在。
[0035]5、线性关系的考察[0036]精密称取黄芪甲苷对照品3.90mg，置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密吸取上述对照品溶液各2111、5111、10111、20111、30111、40111、50 yl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以对照品进样量的自然对数为横坐标，以峰面积的自然对数值为纵坐标，作黄芪甲苷的标准曲线。(参见图1)
[0037]表1黄芪甲苷含量测定线性试验
[0038]
【权利要求】
1.一种检测肾炎清片中黄芪主要成分的方法，包括以下步骤: 步骤I，对照品溶液的制备， 步骤2,供试品溶液的制备， 步骤3，将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图， 步骤4，根据色谱图计算供试品中黄芪甲苷的含量， 其中 色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-水溶液，检测器采用蒸发光散射检测器。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，流动相乙腈-水的体积比为1:0.538-9。
3.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤I所述对照品溶液的制备，方法如下: 取黄芪甲苷对照品加甲醇制成溶液。
4.根据权利要求3的方法，其特征在于，其中步骤I所述对照品溶液的制备，方法如下: 取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每Iml含0.2-0.6mg的溶液。
5.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤2中所述供试品溶液的制备，方法如下: 取检测样品，加入氨水超声处理，离心得上清液，过C18柱，甲醇洗脱，滤过，即得。
6.根据权利要求5的方法，其特征在于，其中步骤2中所述供试品溶液的制备，方法如下:检测样品研细，取0.5-3g，加入2-8%氨水10-50ml，超声处理20min以上，离心，取上清液5-25ml，上样于C18上，10-20ml水洗，弃去，甲醇洗脱，微孔滤膜滤过，即得。
7.根据权利要求6的方法，其中C18的重量不少于150mg。
8.根据权利要求6的方法，其中微孔滤膜的孔径为0.22-0.45 u m。
9.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤3的方法如下:分别取对照品溶液10-20 yl，供试品溶液10-20 yl，注入液相色谱仪，得到色谱图，用外标两点法对数方程计算黄芪甲苷含量。
10.根据权利要求1-9中任一权利要求所述的方法，其中所得供试品中每片黄芪甲苷的含量不得少于0.15mg。
【文档编号】G01N30/88GK103575842SQ201210257780
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月24日 优先权日:2012年7月24日
【发明者】周桂荣, 鄂秀辉, 张兰兰, 周水平 申请人:天士力制药集团股份有限公司