专利名称：检测肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡及样品处理方法
技术领域：
本发明涉及一种检测8种肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡及样品处理方法，属于瘦肉精检测技术领域。
背景技术：
β -肾上腺素受体激动剂能够加强心脏收缩、扩张骨骼肌血管和支气管平滑肌，兽医学和医学上用于治疗休克和支气管痉挛。实验证实，肾上腺素受体激动剂类药物在动物体内对营养物质具有重新分配的作用，促进动物肌肉生长，促进动物体蛋白质沉淀，特别是骨骼肌中蛋白质的合成，抑制动物脂肪合成和积累，从而改善胴体品质，使生长速度加快，瘦肉相对增加10%以上。因其效果好，经济回报高，因而国内外不少养殖场都非法使用本类药物作饲料添加剂，造成畜禽肌肉组织中的残留，通过食物链对人体产生毒性作用，极大的影响动物源性食品的安全性。
人食用了 β -肾上腺素受体激动剂残留的动物源性食品，可引起头晕、心跳加快、肌肉震颤、心悸、呼吸困难等症状，严重的可引起中毒，对人体危害极大。近年来随着不断发生的因食用残留β -肾上腺素受体激动剂的肉制品而造成的大规模中毒事件，欧盟、美国、中国等国家和地区都先后立法禁止在畜禽生产中使用促进动物生长的β_肾上腺素受体激动剂作为饲料添加剂。2002年我国农业部、卫生部发出的公告《禁止在饲料和动物饮水中使用的药品种目录》(农业部公告第176号)明确禁止盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西马特罗、盐酸多巴胺7种肾上腺素受体激动剂在食品动物中的使用，2012年12月苯乙醇胺A被农业部第1519号公告列为“禁止在饲料和动物饮水中使用的物质”。肾上腺素受体激动剂种类繁多，目前对于动物源性食品中肾上腺素受体激动剂的免疫胶体金检测卡，检测的主要还是单项物质或者几项物质，监管部门并不知道养殖户使用了何种肾上腺素受体激动剂，检测存在一定的盲目性，常常造成漏检。因此本发明的这种同时检测8种禁止在饲料和动物饮水中使用的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测联卡具有非常迫切的市场需要与广泛的市场前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能同时检测8种肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡，克服现有技术只能逐一单项或者几项检测的缺陷。本发明的8种肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西马特罗、盐酸多巴胺和苯乙醇胺A蛋白质偶联物和兔抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水棉、PVC胶板及塑料模具等组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水棉。8种禁止在饲料和动物饮水中使用的肾上腺素受体激动剂盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西马特罗、硫酸沙丁胺醇和苯乙醇胺A的胶体金检测卡检测样品的处理方法，检测样品为尿液样品、饲料样品或动物组织、肝脏等样品，对于各种不同的检测样品有不同的处理方法。针对尿液样品的处理方法是取待检尿样，若样品比较混浊时，可3000 r/min以上,离心5 min或过滤,取上清进行检测。针对饲料样品的处理方法是准确称取2±0. 05 g均质后的饲料样品于50 mL离心管中；加入10 mL O. 05 M HC1，充分涡动I min ;加入10 mL O. 05 M NaOH溶液调pH值至7-8充分涡动30 S，静置5 min，取3-4滴上清液进行检测。针对动物组织、肝脏样品的处理方法是准确称取2±0. 01 g均质后的新鲜组织样品于50 mL离心管中；加入I mL 50 mM,pH7.0 Tris-HCl样品抽提液 ，涡动至组织完全分散；经100°C水浴10分钟，冷却至室温，弃掉乳化层，取清亮的中间部分作为测试样品。本发明的8种禁止在饲料和动物饮水中使用的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测联卡能同时检测出尿液样品、饲料样品或动物组织、肝脏等样品中含有的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西马特罗、盐酸多巴胺和苯乙醇胺A，本双排四联检测卡易于制备且节省检测费用，使用方便快速，结果准确，大大提高肾上腺素受体激动剂的检测率。
图I8种禁止在饲料和动物饮水中使用的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测联卡的外壳、测试条在外壳内的安置图及硝酸玻璃纤维素膜上显示印迹示意图。I、加样孔，2、盐酸克伦特罗蛋白质偶联物检测带，3、莱克多巴胺蛋白质偶联物检测带，4、沙丁胺醇蛋白质偶联物检测带，5、硫酸特布他林蛋白质偶联物检测带，6、质控带，7、检测窗孔，8、测试条，9、硫酸沙丁胺醇蛋白质偶联物检测带，10、西马特罗蛋白质偶联物检测带，11、盐酸多巴胺蛋白质偶联物检测带，12、苯乙醇胺A蛋白质偶联物检测带，13、质控带，14、测试条，15、夕卜壳。图28种禁止在饲料和动物饮水中使用的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测联卡的测试条结构示意图。16、样品垫，17、胶体金膜，18、支撑背板，19、硝酸纤维素膜，20、吸水棉。
具体实施例方式实施例I :结合附图I和2进一步说明
8种肾上腺素受体激动剂的双排四联胶体金检测卡，它是在检测卡外壳15中设置两条测试条8和14，检测卡外壳15的结构及测试条8和14的设置参见附图1，检测卡外壳15为长条扁平薄壳状外壳，长7cm，宽2cm，厚O. 5cm,薄壳壁厚O. Icm,由工程塑料制成。检测卡外壳15由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳15壳盖上有检测窗孔7和加样孔1，测试条8和14放置在检测卡外壳15的壳座内。测试条8是多层结构的窄条薄片底层是支撑背板18，支撑背板18中部叠置粘贴硝酸纤维素膜19，硝酸纤维素膜19上包被有四条测试线和一条质控线，第一条检测带2，包被有盐酸克伦特罗蛋白质偶联物，第二条检测带3，包被有莱克多巴胺蛋白质偶联物，第三条检测带4，包被有沙丁胺醇蛋白质偶联物，第四条检测带5，包被有硫酸特布他林蛋白质偶联物，质控带6包被有兔抗鼠IgG抗体；测试条14同测试条8—样，其测试线上的包被物依次为第一条硫酸沙丁胺醇蛋白质偶联物检测带9，第二条西马特罗蛋白质偶联物检测带10，第三条盐酸多巴胺蛋白质偶联物检测带11，第四条苯乙醇胺A蛋白质偶联物检测带12，检测带包被的蛋白质偶联物浓度大约为I mg/mL，质控带13包被兔抗鼠IgG抗体浓度大约为O. I mg/mL。支撑背板18—端叠置粘贴样品垫16，另一端叠置粘贴吸水棉20，硝酸纤维素膜19两端分别与样品垫16后端面和吸水棉20的前端面紧密搭接，在样品垫16与硝酸纤维素膜19的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜17，测试条8中的胶体金膜为含抗盐酸盐酸克仑特罗抗体、莱克多巴胺抗体、沙丁胺醇抗体和硫酸特布他林抗体胶体金标记物的玻璃纤维素膜，测试条14中的胶体金膜为含抗硫酸沙丁胺醇抗体、西巴特罗抗体、盐酸多巴胺抗体和苯乙醇胺A抗体胶体金标记物的玻璃纤维素膜。胶体金膜是将抗体与胶体金标记后，用微量枪头将其均匀涂布在玻璃纤维素膜上，烘干后备用。胶体金膜17、样品垫16及吸水棉20与硝酸纤维素膜19搭接长度为O. I cm-0. 2 cm。吸水棉20材料是吸水纸，样品垫16材料是吸水玻璃纤维素膜。实施例2 :检测样品的处理方法
本发明的8种禁止在饲料和动物饮水中使用的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测联卡用于同时检测动物尿液样品、畜牧饲料样品或动物组织、肝脏等样品中是否含有盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西马特罗、盐酸多巴胺和苯乙醇胺A，据此确保动物源性食品的安全问题。对于各种不同的检测样品有不同的处理方法
针对尿液样品的处理方法是取待检尿样，若样品比较混浊时，可3000 r/min以上，离心5 min或过滤,取上清进行检测。针对饲料样品的处理方法是准确称取2±0. 05 g均质后的饲料样品于50 mL离心管中；加入10 mL O. 05 M HC1，充分涡动I min ;加入10 mL O. 05 M NaOH溶液调pH值至7-8充分涡动30 S，静置5 min，取3-4滴上清液进行检测。针对动物组织、肝脏样品的处理方法是准确称取2±0. 01 g均质后的新鲜组织样品于50 mL离心管中；加入I mL 50 mM,pH7.0 Tris-HCl样品抽提液，涡动至组织完全分散；经100°C水浴10分钟，冷却至室温，弃掉乳化层，取清亮的中间部分作为测试样品。免疫胶体金检测卡的主要反应是利用抗原与抗体之间能够发生高特异性免疫反应的性质和抗体或抗原(含半抗原)上特殊标记物(胶体金)的放大作用来对超微量残留物进行定性定量检测的一种分析方法。在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与含盐酸克伦特罗蛋白质偶联物、莱克多巴胺蛋白质偶联物、沙丁胺醇蛋白质偶联物、硫酸特布他林蛋白质偶联物、硫酸沙丁胺醇蛋白质偶联物、西马特罗蛋白质偶联物、盐酸多巴胺蛋白质偶联物、苯乙醇胺A蛋白质偶联物，以及质控带兔抗鼠IgG抗体反应，形成紫红色条带。当样品中有相应的待检盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西马特罗、盐酸多巴胺和苯乙醇胺A存在，则样品加入后即与相应的抗体发生反应，而不会与相应的检测带所含的盐酸克伦特罗蛋白质偶联物、莱克多巴胺蛋白质偶联物、沙丁胺醇蛋白质偶联物、硫酸特布他林蛋白质偶联物、硫酸沙丁胺醇蛋白质偶联物、西马特罗蛋白质偶联物、盐酸多巴胺蛋白质偶联物、苯乙醇胺A蛋白质偶联物反应，从而检测线不显色。本发明经试验，使用8种肾上腺素受体激动剂的胶体金检测联卡进行检测时，用滴管吸取待检样品上清液，加入3-4滴于加样孔I中,加样后3-5 min，观察检测窗孔7的显色区，判断结果，保存30分钟后结果不会发生变化。经200次试用，除2例不明确外，其余198例均达到了满意效果，准确率达99%，因此，本发明具有方法简单，方便快捷，检测结果稳定、准确等特点，是动物源性食品中肾上腺素受体激动剂检测上的创新。·
权利要求
1.肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡，其特征在于包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西巴特罗、盐酸多巴胺和苯乙醇胺A蛋白质偶联物和兔抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水棉、PVC胶板及塑料模具，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水棉。
2.权利要求I所述的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡的样品处理方法，其特征在于针对尿液样品的处理方法是取待检尿样，若样品比较混浊时，可3000 r/min以上，离心.5 min或过滤,取上清进行检测。
3.权利要求I所述的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡的样品处理方法，其特征在于针对饲料样品的处理方法是准确称取2±0. 05g均质后的饲料样品于50 mL离心管中；加入10 mL O. 05 M HCl，充分涡动I min ;加入10 mL O. 05 M NaOH溶液调pH值至7-8充分润动30 s,静置5min,取3_4滴上清液进行检测。
4.权利要求I所述的肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡的样品处理方法，其特征在于针对动物组织、肝脏样品的处理方法是准确称取2±0. 01 g均质后的新鲜组织样品于.50 mL离心管中；加入I mL 50 mM, pH7. O Tris-HCl样品抽提液，涡动至组织完全分散；经.100°C水浴10分钟，冷却至室温，弃掉乳化层，取清亮的中间部分作为测试样品。
全文摘要
本发明涉及检测肾上腺素受体激动剂的胶体金检测卡及样品处理方法，属于瘦肉精检测技术领域。包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、硫酸特布他林、硫酸沙丁胺醇、西巴特罗、盐酸多巴胺和苯乙醇胺A蛋白质偶联物和兔抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水棉、PVC胶板及塑料模具等组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水棉。本发明优点是能同时检测出尿液、饲料、动物组织和肝脏中含有的8种肾上腺素受体激动剂，方法简单、快捷，结果准确。
文档编号G01N33/577GK102901821SQ201210373270
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者杜道林, 洪霞, 薛永来, 张祯 申请人:江苏维赛科技生物发展有限公司