一种生脉注射液中莽草酸的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种生脉注射液中莽草酸的测定方法，包括将生脉注射液适当稀释后注入高效液相色谱仪中，采用外标法测定莽草酸的含量。
【专利说明】一种生脉注射液中莽草酸的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药领域，具体涉及一种生脉注射液中莽草酸的测定方法。
【背景技术】
[0002]生脉注射液是根据中医著名经典古方“生脉散”研制而成的可供静脉注射的中药注射液，由人参、麦冬、五味子三味中药配伍并采用现代科学技术提取精制而成。
[0003]古方“生脉散”历经上千年长期应用，安全有效，经久不衰。古代医家既用于抢救热伤元气、津液耗伤、脉微欲绝等重症，又用以作为气阴两虚病人的补益剂。关于生脉散方名的含义，吴琨在《医方考》中说:“名曰生脉者，以脉得气则充，失气则弱，故名之”。中医之脉者，主于心，而发源于肺，然肺中之气，所赖以生者，尤必资籍于肾阴。故《医方集解》曰:“盖心主脉，肺朝百脉，补肺清心，则气充而脉复，故曰生脉也。”可以说，生脉散是依据其功效而命名的。生脉亦可解之为复脉，“人有将死脉绝者，服此能复生之”。较形象地说明了生脉散的功效及其在急重症抢救中的作用。
[0004]莽草酸(Shikimic Acid，化学名:3，4，5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸)是植物及微生物中，苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸生物合成时，从磷酸烯醇丙酮酸开始，与4-磷酸赤藓糖合成的三羟基芳香族中间产物。是各种芳香族化合物的来源，也是一些次生代谢产物的重要原料。
[0005]目前，生脉注射液中尚未报道莽草酸。莽草酸主要来源于八角茴香，是八角茴香的有效成分，是抗病毒药物“达菲”的主要原料。另五味子与八角茴香同属于木兰科植物，据我们测定五味子药材中也含有大量的莽草酸成分，故认为可将莽草酸作为五味子药材中一有效特征成分进行控制。
[0006]生脉注射液处方中，五味子生药占较高比例，且本品成品中据测定很高。故以莽草酸成分作为生脉注射液质量标准中五味子特征有效成分为测定指标项，比五味子醇甲含量测定更具合理性。
[0007]由于中药具有复杂的物质基础，因此其质量控制手段无法表征其复杂的生物物质成分，实际上难以控制其内在品质。因此，如何有效地、特异性的控制生脉注射液的品质成为人们研究的热点。
【发明内容】
[0008]本发明目的在于提供一种生脉注射液中莽草酸的测定方法。该方法针对性强，为中药注射剂的质量标准控制提供了新的手段。
[0009]本发明一种生脉注射液中莽草酸含量测定方法，通过以下技术方案实施:
a.取生脉注射液样品，适当稀释后作为供试品；
b.取莽草酸对照品，配制成约80μ g/ml ；
c.进行高效液相色谱测定,其中色谱条件为，色谱柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm 4micron，检测波长:20(T230nm ；柱温:25?40 O ;流速:0.5~0.7ml/mim ;流动相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液(H3PO4 调 pH 到 2.0~3.0)；
d.采用外标法，利用峰面积计算出莽草酸的含量。
[0010]优选地，本发明一种生脉注射液中莽草酸含量测定方法，通过以下技术方案实施:
a.取生脉注射液样品，稀释20-50倍后，作为供试品；
b.取莽草酸对照品，配制成约80μ g/ml ；
c.进行高效液相色谱测定,其中色谱条件为，色谱柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm，4micron，检测波长:200-230nm ；柱温:25-40 O ;流速:
0.5-0.7ml/mim ;流动相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液，H3PO4 调 pH 到 2.0~3.0 ；
d.采用外标法，利用峰面积计算出莽草酸的含量。
[0011]最优选地，本发明一种生脉注射液中莽草酸含量测定方法，通过以下技术方案实施:
a.取生脉注射液样品，稀释20倍后，作为供试品；
b.取莽草酸对照品，配制成约80μ g/ml ；
c.进行高效液相色谱测定,其中色谱条件为，色谱柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250 X 4.60mm, 4micron,检测波长:218nm ;柱温:30°C ;流速:0.6ml/mim ;流动相:20mM /L 的 KH2PO4 溶液(H3PO4 调 pH 到 2.5)；
d.采用外标法，利用峰面积计算出莽草酸的含量。
[0012]本发明生脉注射液中以莽草酸计，含量不得低于1.2mg/ml。
[0013]本申请的生脉注射液的制备方法如下: a.按照下述重量份取药材:红参25份，五味子39份，麦冬78份；
b.红参提取:取红参切薄片或粉碎，加乙醇进行连续或分次回流提取，合并提取液，冷藏,滤过,适当浓缩回收乙醇,加适量活性炭,搅拌过滤,滤液调节pH值近中性，静置，滤液浓缩至稠膏，加注射用水，搅匀，冷藏，滤过，加入适量活性炭煮沸，滤过，待配制；
c.五味子蒸馏液:取五味子，粉碎后加水蒸馏，收集蒸馏液，冷藏，待配制；
d.五味子提取液:蒸馏后的药渣加水煎煮，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入乙醇进行二次醇沉，滤液调节pH值近中性，冷藏，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏,加入注射用水，搅拌，冷藏，滤过，滤液加入适量活性炭煮沸30分钟，稍冷，过滤至澄明，待配制；
e.麦冬提取:取麦冬，加水煎煮，后同五味子提取液的方法，待配制；
f.取上述红参提取液、麦冬提取液、五味子提取液，五味子蒸馏液，，混合，加热，静置，滤过，加入聚山梨酯80，混合均匀，使其完全溶解，补水，搅匀，调pH值，滤过，灌封，灭菌，得生脉注射液。
[0014]优选地，本申请的生脉注射液的制备方法如下:
a.按照下述重量份取药材:红参25份，五味子39份，麦冬78份；
b.红参提取:取红参片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加热回流提取4-5次，每次2小时，或者连续回流提取6.5小时，合并回流液，冷藏，滤过，回收乙醇至每Iml含生药
0.3~0.4g，加适量活性炭，搅拌过滤，滤液调节pH值近中性，静置，滤液浓缩至稠膏，加注射用水，搅匀，冷藏，滤过，加入适量活性炭煮沸，滤过，待配制；
c.五味子蒸馏:取五味子，粉碎后加水蒸馏，收集蒸馏液，冷藏，待配制；d.五味子提取液:蒸馏后的药渣加水煎煮，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入乙醇进行二次醇沉，第一次使含醇量达到80%，第二次使含醇量达到85%，滤液调节pH值近中性，冷藏，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏,加入注射用水,搅拌,冷藏,滤过,滤液加入适量活性炭煮沸30分钟，稍冷，过滤至澄明，待配制；
e.麦冬提取:取麦冬，加水煎煮，后同五味子提取液方法；
f.取红参提取液、麦冬提取液、五味子提取液，五味子蒸馏液，分别初滤后再超滤，混合滤液，加入0.5-0.9%聚山梨酯80，使其完全溶解，补水至药材三味药材总量1.5~2.0倍的体积，搅匀，调pH值7.5。精滤，灌封，灭菌。
[0015]本申请的生脉注射液中莽草酸的测定方法，专属性强，在4-128 μ g/ml的浓度范围内，线性良好，该方法可以用于生脉注射液中莽草酸的含量测定。
[0016]以下通过方法学考察，说明本发明的有益效果。
[0017]1、专属性研究
按照实施例1的方法，取生脉注射液生产中的红参注射液、麦冬注射液和吐温，按配制比例配成不含五味子液生生脉注射液阴性样。将生脉注射液和缺五味子液阴性用注射用水稀释50倍后，按方法进样。A:莽草酸对照品；B:生脉注射液；C:缺五味子液阴性，各样均进5μ I。结果见图1-图3 ;
2、检测波长的确定
精密称取莽草酸对照品适量，用2m mo I/L的ΚΗ2Ρ04、Η3Ρ04调pH = 2.5的水溶液，稀释至含量约为40 μ g/ml的对照品溶液。取对照品溶液190-400nm波长扫描，得莽草酸紫外光谱图，见图4。可以看出，莽草酸在190-250nm有吸收，最大吸收值在218nm ；
3、色谱条件
色谱柱:Synergi 4u Hydro-RP 80A, 250 x 4.6 mm ;检测波长:218nm ;柱温:25°C ;流动相:单泵，20mM/L 的 KH2PO4 (H3PO4 调 pH 到 2.5);流速:0.6ml/mim ;进样量:10μ L ；以莽草酸计塔板数不得低于15000 ；
4重复性实验 4.1日内精密度
按照实施例1的方法制备样品，取生脉注射液样，稀释50倍后，进样5μ 1，连续进样6次，所得莽草酸峰峰面积计算RSD = 0.12%，见表1。说明本方法对于测定莽草酸日内精密度好；
表1、精密度实验数据测定表
【权利要求】
1.一种生脉注射液中莽草酸的测定方法，由下述步骤组成: a.取生脉注射液样品，适当稀释后作为供试品； b.取莽草酸对照品，配制成约80μ g/ml ； c.进行高效液相色谱测定,其中色谱条件为，色谱柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm 4micron，检测波长:200-230nm ；柱温:25-40 O ;流速:0.5-0.7ml/mim ;流动相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液，H3PO4 调 pH 到 2.0~3.0 ； d.采用外标法，利用峰面积计算出莽草酸的含量。
2.权利要求1所述的方法，其中步骤a中稀释为20-50倍。
3.权利要求1所述的方法，其中步骤c中流动相为:15~25mM/L的KH2PO4溶液，H3PO4调pH到2.0~3.0。
4.权利要求1所述的方法，其特征在于由下述步骤组成: a.取生脉注射液样品，稀释20-50倍后，作为供试品； b.取莽草酸对照品，配制成约80μ g/ml ； c.进行高效液相色谱测定,其中色谱条件为，色谱柱:PhenomenexSynergi 4 μ mHydro-RP 80A 250X4.60mm，4micron，检测波长:200-230nm ；柱温:25-40 O ;流速:0.5-0.7ml/mim ;流动相:15~25mM /L 的 KH2PO4 溶液，H3PO4 调 pH 到 2.0~3.0 ； d.采用外标法，利用峰面积计算出莽草酸的含量。
5.权利要求1所述的方法，其中生脉注射液按照下述步骤制成: a.按照下述重量份取药材:红参25份，五味子39份，麦冬78份； b.红参提取:取红参切薄片或粉碎，加乙醇进行连续或分次回流提取，合并提取液，冷藏,滤过,适当浓缩回收乙醇,加适量活性炭,搅拌过滤,滤液调节pH值近中性，静置，滤液浓缩至稠膏，加注射用水，搅匀，冷藏，滤过，加入适量活性炭煮沸，滤过，待配制； c.五味子蒸馏液:取五味子，粉碎后加水蒸馏，收集蒸馏液，冷藏，待配制； d.五味子提取液:蒸馏后的药渣加水煎煮，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入乙醇进行二次醇沉，滤液调节pH值近中性，冷藏，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏,加入注射用水，搅拌，冷藏，滤过，滤液加入适量活性炭煮沸30分钟，稍冷，过滤至澄明，待配制； e.麦冬提取:取麦冬，加水煎煮，后同五味子提取液的方法，待配制； f.取上述红参提取液、麦冬提取液、五味子提取液，五味子蒸馏液，混合，加热，静置，滤过，加入聚山梨酯80，混合均匀，使其完全溶解，补水，搅匀，调pH值，滤过，灌封，灭菌，得生脉注射液。
6.权利要求5的方法，其特征在于，生脉注射液由下述步骤组成: a.按照下述重量份取药材:红参25份，五味子39份，麦冬78份； b.红参提取:取红参片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加热回流提取4-5次，每次2小时，或者连续回流提取6.5小时，合并回流液，冷藏，滤过，回收乙醇至每Iml含生药0.3~0.4g，加适量活性炭，搅拌过滤，滤液调节pH值近中性，静置，滤液浓缩至稠膏，加注射用水，搅匀，冷藏，滤过，加入适量活性炭煮沸，滤过，待配制； c.五味子蒸馏:取五味子，粉碎后加水蒸馏，收集蒸馏液，冷藏，待配制； d.五味子提取液:蒸馏后的药渣加水煎煮，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入乙醇进行二次醇沉，第一次使含醇量达到80%，第二次使含醇量达到85%，滤液调节pH值近中性，冷藏，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏,加入注射用水,搅拌,冷藏,滤过,滤液加入适量活性炭煮沸30分钟，稍冷，过滤至澄明，待配制； e.麦冬提取:取麦冬，加水煎煮，后同五味子提取液方法； f.取红参提取液、麦冬提取液、五味子提取液，五味子蒸馏液，分别初滤后再超滤，混合滤液，加入0.5-0.9%聚山梨酯80，使其完全溶解，补水至药材三味药材总量1.5~2.0倍的体积，搅匀，调PH值7.5 ;精滤，灌封，灭菌。
7.权利要求1所述的方法，其中生脉注射液中以莽草酸计，含量不得低于1.2mg/ml。
【文档编号】G01N30/02GK103837610SQ201210486122
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2012年11月26日 优先权日:2012年11月26日
【发明者】赵炳祥, 朱雅宁, 董礼, 王虎山, 侯新莲, 吴建国, 祝勇军 申请人:雅安三九药业有限公司