专利名称：用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法
技术领域：
本发明涉及一种配合肿瘤靶向治疗的快速检测方法，特别涉及一种用于判断肿瘤是否适用于某种靶向治疗方案的快速检测方法。
背景技术：
以往的肿瘤治疗，特别是化疗，因为药物作用范围广泛，在杀死肿瘤细胞的同时，也杀死了大量的正常细胞，导致了难以忍受的毒副作用。随着医学研究的快速进展，科学家们逐渐开发出了针对性强、毒副作用小的肿瘤靶向治疗药物。目前，这种靶向治疗由于治疗作用好、毒副作用小越来越成为肿瘤治疗的发展趋势。然而，如何能够在临床中快速、准确的判断患者肿瘤的分子类型，进而确定该患者是否适用于某种靶向治疗方案仍是目前医学界急需解决的一个难题。以乳腺癌为例，我国女性乳腺癌的发病率正以每年3%至4%的增长率急剧上升，每年有20余万妇女患乳腺癌。其中，大约20% -30%的乳腺癌患者为人类表皮生长因子受体-2(HER2)阳性乳腺癌。乳腺肿瘤患者HER2阳性意味着乳腺肿瘤细胞表面的HER2蛋白数量增多，过度传递信号，刺激癌细胞疯狂增殖。HER2阳性的患者同其他乳腺癌病人相比，肿瘤恶性程度更高，进展更快，更容易复发和远处转移，且此类病人通常对内分泌治疗不敏感，预后较差。故几家国际制药公司研发出针对HER2阳性乳腺癌的靶向治疗药物，如赫赛汀，收到了比较好的治疗效果。然而，这类靶向药只对HER2阳性的乳腺癌患者有效，对于70% -80% HER2阴性的患者却没有任何治疗效果，如果在治疗前不及时诊断明确，不仅耽误了治疗，还会给患者背负沉重的经济负担(治疗费用)。因此，如何在最短的时间里对乳腺癌患者肿瘤组织中HER2表达水平(阴性或阳性)作出准确判断对于其靶向治疗意义重大。目前乳腺癌人类表皮生长因子受体_2(HER2)检测一般采用免疫组织化学(IHC)检测HER2蛋白表达水平。虽然免疫组化(IHC)已经经过了 FDA批准，但不同的检测方法、计算的准确性和试剂的选择都会影响HER2检测的结果。美国的一项调查结果显示，近1/4患者是因检测结果不准确而接受了不恰当的治疗。IHC检测HER2蛋白过度表达的错误率平均为18%，FISH检测HER2基因扩增的错误率在13%。因此，我国病理学家根据国内外最新的研究数据讨论后达成共识，于2006年10月制订发布了我国《乳腺癌HER2检测指南》。美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理学医学院(CAP)也于2006年12月11日联合发布了《乳腺癌HER2检测的ASC0/CAP指南共识》。这些指南强调了检测中易出现误差的环节、内部及外部质量控制和保证程序，旨在使HER2检测的操作程序和对结果判读的标准化，提高HER2检测的可重复性和准确性，更准确地筛选出适用于曲妥珠单抗(赫赛汀)等药物治疗的乳腺癌患者，避免无效治疗，使患者承受不必要的经济负担。所以，开发出一种对肿瘤组织中靶点蛋白表达水平进行快速、准确检测的技术，不仅在胶体免疫检测技术中属于一种突破性进展，具有重要意义，而且也具有广泛的市场应用前景。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种可快速判断所检测肿瘤是否适用于某种靶向治疗药物的快速检测方法为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种用于判断所检测肿瘤是否适用于某种靶向治疗药物的快速检测方法，其特征在于，其包括如下步骤I)设置一试纸条，所述试纸条上设有样品垫、金标垫、检测区和吸附垫，所述检测区上设有多个按阵列形状分布的圆点；2)将被检测的肿瘤组织制成细胞裂解液，将制成的细胞裂解液滴加在试纸条的样品塾上；3)利用胶体金或胶体银与管家蛋白、细胞裂解液中的被检测蛋白的单抗或多抗分别偶联，并将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于金标垫上，烘干后阴凉保存；4)将另外一种抗相应管家蛋白或被检测蛋白的单抗或多抗固定在检测区上；
5)待检测区显色后，通过放大镜观测检测区上管家蛋白显色圆点与被检测蛋白显色圆点的个数，计算相应比值，进而判断该肿瘤组织中某种蛋白的表达是阳性还是阴性，进而确定是否以此蛋白为靶点的靶向治疗药物进行治疗。优选地，步骤2)中，制备肿瘤组织的培养液采用如下步骤，首先精确称取I克术后肿瘤组织，将其置于在I毫升相应的裂解液中匀浆、破碎，再采用12000Xg离心，最后取上清液即为肿瘤组织细胞裂解液。如上所述，本发明的用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法具有以下有益效果该检测方法快速、准确，可在30分钟内根据与管家蛋白的比例精确计算出被检测肿瘤的蛋白表达水平，判断被检测蛋白在该肿瘤中表达为阳性还是阴性，进而判断是否采用以此被检测蛋白为靶点的靶向治疗药物进行治疗。
图1为本发明试纸条的主视图。图2为本发明试纸条的俯视图。元件标号说明
1
2
3
4
5
6
底板
聚脂膜
样品垫
金标垫
硝酸纤维膜
检测区
吸附垫
具体实施例方式以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式
加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的原理下进行各种修饰或改变。请参阅图1、2。需要说明的是，本实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想，所以图式中仅显示与本发明中有关的组件而非按照实际实施时的组件数目、形状及尺寸绘制，其实际实施时各组件的型态、数量及比例可为一种随意的改变，且其组件布局型态也可能更为复杂。本发明提供一种用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法，该方法包括如下步骤首先如图1、2所示，设置一试纸条，该试纸条包括底板1，底板I上设有聚脂膜2，聚酯膜2上设有硝酸纤维膜5、样品垫3、金标垫4，硝酸纤维膜5上设有检测区6、吸附垫7，在吸附垫7虹吸作用下，样品垫3上的液体可从左向右的移动。检测区6上设有多个按阵列形状分布的圆点。下面以乳腺癌为例，对本发明技术方案做进一步的描述首先精确称取I克术后肿瘤组织(非癌旁组织)，在I毫升相应的裂解液中匀浆、破碎，12000Xg离心后，取上清液作为肿瘤组织细胞裂解液滴加在试纸条的样品垫I上，利用胶体金或胶体银与相应的管家蛋白actin、及细胞裂解液中被检测蛋白Her2的单抗或多抗分别偶联，并将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于金标垫上，在37° C环境下烘干后阴凉保存。将另外一种抗相应管家蛋actin或被检测蛋白Her2的单抗或多抗以陈列方式固定在检测区上；5分钟检测区显色后，通过放大镜观测检测区上管家蛋白显色圆点与被检测蛋白显色圆点的个数，计算相应比值，进而判断该肿瘤细胞是采用阳性还是阴性，进而确定是否采用以Her2为靶点的靶向治疗药物(如赫赛汀)进行治疗。如上所述，本发明的用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法具有以下有益效果该检测方法快速、准确，可在30分钟内根据与管家蛋白的比例精确计算出被检测肿瘤的蛋白表达水平，判断该肿瘤中被检测蛋白为阳性还是阴性，进而判断是否采用以被检测蛋白为靶点的靶向治疗药物进行治疗。综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的原理及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的原理与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
权利要求
1.一种用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法，其特征在于，其包括如下步骤 1)设置一试纸条，所述试纸条上设有样品垫、金标垫、检测区和吸附垫，所述检测区上设有多个按阵列形状分布的圆点； 2)将被检测的肿瘤组织制成细胞裂解液，将制成的细胞裂解液滴加在试纸条的样品垫上； 3)利用胶体金或胶体银与管家蛋白、细胞裂解液中被检测蛋白的单抗或多抗分别偶联，并将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于金标垫上，烘干后阴凉保存； 4)将另外一种抗相应管家蛋白或被检测蛋白的单抗或多抗固定在检测区上； 5)待检测区显色后，通过放大镜观测检测区上管家蛋白显色圆点与被检测蛋白显色圆点的个数，计算相应比值，进而判断该肿瘤组织中被检测蛋白的表达是阳性还是阴性，进而确定是否采用以此蛋白为靶点的靶向治疗药物进行治疗。
2.根据权利要求1所述的用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法，其特征在于步骤2)中，制备肿瘤组织的细胞裂解液采用如下步骤，首先精确称取I克术后肿瘤组织，将其置于在I毫升相应的裂解液中匀浆、破碎，再采用12000Xg离心，最后取上清液即为肿瘤组织细胞裂解液。
全文摘要
本发明提供一种用于判断肿瘤靶向治疗的快速检测方法，该检测方法在检测区设置按阵列形状分布的圆点，利用胶体金或胶体银与相应的管家蛋白、被检测蛋白的单抗或多抗分别偶联，并将偶联后形成的胶体金或胶体银抗体复合物滴加于金标垫上，将另外一种抗相应管家蛋白或被检测蛋白的单抗或多抗以陈列形式固定在检测区上，这样通过管家蛋白与肿瘤细胞中被检测蛋白显色后圆点的个数比确定肿瘤中被检测蛋白的表达水平。该检测方法可快速准确的判断所检测肿瘤组织中被检测蛋白(即靶向治疗的靶点)表达为阳性还是阴性，进而判断是否该采用以该蛋白为靶点的靶向治疗药物进行治疗。
文档编号G01N33/68GK103048468SQ201210520149
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月6日 优先权日2012年12月6日
发明者糜军 申请人:苏州海吉亚生物科技有限公司