一种藏药组合物风湿塞隆制剂的质量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种藏药组合物风湿塞隆制剂的质量检测方法。本发明对现有的风湿塞隆制剂的质量标准进行了相应的提高，对原标准中紫草茸、木香的鉴别方法进行了优化，并在原标准的基础上增加了刺柏、丁香、绿绒蒿、藏茜草、豆蔻的鉴别，增加了总黄酮、印度獐牙菜的含量测定方法，马兜铃酸A的检查方法，进一步确保了产品质量安全、有效、均一、稳定、质量可控。
【专利说明】—种藏药组合物风湿塞隆制剂的质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种藏药组合物的质量检测方法，特别涉及一种藏药组合物风湿塞隆制剂的质量检测方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]风湿一词起源于古希腊，公元前4世纪，《希波克拉底全集》有关人体解剖一文中认为:人体的体液由于湿冷而下注于四肢、内脏引起疾病，即为风湿。我国《黄帝内经》也把风寒湿三期杂合称为痹。
[0003]藏医对于风湿研究比较早。藏医认为，隆、赤巴、血、培根所致的痛风症，脉象短而实紧像血热症一样脉象缓慢，尿象不定，呈热证，确诊无误的症状是尿有焦角味，发病时关节干痛。湿痹是关节腔内热邪与黄水积聚，渗入关节腔内或遍及肉、骨、脉、筋等处，关节如粉碎样疼痛的一种疾病。藏医学上用放血、泻下、服药三种方法来进行治疗。藏民们长期生活在高原的寒冷环境中患风湿类疾病在所难免，藏民们在长期与疾病作斗争的过程中发现了塞隆骨对于风湿类疾病有良效。藏医们用塞隆骨加上其他药材，在藏医“干黄水，调节培根、隆等紊乱”的理论指导下，配制成了风湿塞隆胶囊。
[0004]风湿塞隆胶囊收载于国家药品标准，标准编号:WS-10788 (ZD-0788)-20020风湿塞隆胶囊对风湿、类风湿引起的关节炎、颈肩痛、腰背痛、足跟痛关节肿胀手指关节、腕关节肿痛、肢带肌疼痛，强直性脊柱炎均有确切疗效，是一级新药组方、风湿骨病良药。
[0005]然而，现有风湿塞隆胶囊的质量检测标准仅采用TLC薄层鉴别两味药材紫草茸与木香、HPLC测定一个药效成分没食子酸的含量，而且所选的鉴定项目量太少没有代表性，且不能有效的控制其他主要成分的质量。因此现有质量检测方法不能全面、准确的控制本品质量，质量标准有待提高。
【发明内容】
[0006]针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种藏药组合物风湿塞隆制剂的质量检测方法。
[0007]发明概述
[0008]本发明对现有的风湿塞隆制剂的质量标准进行了相应的提高，对原标准中紫草茸、木香的鉴别方法进行了优化，并在原标准的基础上增加了刺柏、丁香、绿绒蒿、藏茜草、豆蘧的鉴别，增加了总黄酮、印度獐牙菜的含量测定方法，马兜铃酸A的检查方法，进一步确保了产品质量安全、有效、均一、稳定、质量可控。
[0009]术语说明:
[0010]风湿塞隆胶囊是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药品名称。
[0011]风湿塞隆制剂包括风湿塞隆胶囊及用风湿塞隆胶囊原料药配方制备的其他制剂。
[0012]本发明的技术方案如下:[0013]一种原料药组成为塞隆骨3.2重量份、诃子36.3重量份、红花21.1重量份、豆蘧28.5重量份、岩精膏10.6重量份、印度猜牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆叶10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黄10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、绿绒蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香马兜铃5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厣6.1重量份、石斛
6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛诃子5.3重量份、余甘子6.3重量份的风湿塞隆制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种:
[0014]鉴别:
[0015](I)紫草茸的鉴别
[0016]取风湿塞隆固体制剂5?15g,加醋酸乙酯10?20mL,超声处理20?40分钟,滤过，滤液浓缩至I?2mL，作为供试品溶液；另取紫草茸对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5?10 μ L,分别点于同一娃胶G薄层板上，以体积比4?6:4?6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，分别置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点；
[0017](2)木香的鉴别
[0018]取风湿塞隆固体制剂2?5g，加二氯甲烷10?20mL，超声处理20?40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；取木香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5?10 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5?8:1?2的二氯甲烷-环己烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0019](3)刺柏的鉴别
[0020]取风湿塞隆固体制剂5?15g,加水50?150mL,按水蒸气蒸懼法提取挥发油,挥发油作为供试品；取刺柏对照药材0.5?lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各2?5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比7?9:3?I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为I %硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0021](4)藏茜草的鉴别
[0022]取风湿塞隆固体制剂5?IOg,加甲醇10?20mL,超声处理20?40分钟,滤过,滤液浓缩至约I?2mL，作为供试品溶液；另取藏茜草药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各2?5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比2?6:1?2的沸程为60?90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0023](5)绿绒蒿的鉴别[0024]取风湿塞隆固体制剂5?10g，加体积比1%盐酸溶液20?30mL，超声处理30?40分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至pH为10，再用二氯甲烷等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解约2mL，作为供试品溶液；另取绿绒蒿药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验，吸取上两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比10?8:4?5:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加两滴氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0025](6) 丁香的鉴别
[0026]取风湿塞隆固体制剂5?10g，加沸程为60_90°C石油醚50?80mL超声，超声处理30?40分钟，滤过，滤液浓缩至I?2mL作为供试品溶液；另取丁香药材Ig,同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8?9:2?I的石油醚(60?90°C )-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为I %硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0027](7)豆蘧的鉴别
[0028]取风湿塞隆固体制剂10?20g,加水80?IOOmL,按水蒸气蒸懼法提取挥发油,挥发油作为供试品；取豆蘧对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各2?3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8?9:2?I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0029]含量测定
[0030](I)总黄酮的含量测定
[0031]对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得；
[0032]标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0mLU.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分别置25mL量瓶中，编号为I至6号；各加水至5.0mL,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液ImL,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比8-10%硝酸招溶液ImL,摇匀,放置6分钟，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15-20分钟，以I号为空白；照《中国药典》2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法进行试验，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0033]测定法:取藏药组合物风湿塞隆制剂细粉lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液4.0mL，置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μ g/mL)，计算，即得；
[0034]本发明藏药组合物风湿塞隆制剂中总黄酮的含量按芦丁(C27H3tlO16)计，不得少于25mg/g ；
[0035](2)印度獐牙菜的含量测定
[0036]照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定；
[0037]色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:70-75的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长243nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ；
[0038]对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得；
[0039]供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆制剂细粉约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，回流提取I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，减压浓缩至干，残渣加水约20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，减压浓缩至干，残渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0040]测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得;
[0041]本发明藏药组合物风湿塞隆制剂中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于0.35mg/g ；
[0042](3)马兜铃酸A的检查
[0043]照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定；
[0044]色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40-45:55-60的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm ;理论板数按木香马兜铃酸峰计算应不低于3000 ；
[0045]对照品溶液的制备:取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得；
[0046]供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆制剂细粉约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，低温浓缩至干，残渣加质量体积份数比0.5%氢氧化钠溶液20mL使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后碱液使用体积份数比5%盐酸调节pH2?3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，挥干，用甲醇溶解并转移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0047]测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得;
[0048]本发明藏药组合物风湿塞隆制剂中马兜铃酸A (C17H11NO7)的含量不得高于10 μ g/g°
[0049]优选的，一种原料药组成为塞隆骨3.2重量份、诃子36.3重量份、红花21.1重量份、豆蘧28.5重量份、岩精膏10.6重量份、印度獐牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆叶10.6重量份、藏菌草10.6重量份、紫草鸾10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黄10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、绿绒蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱疗9.5重量份、木香马5?铃5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺庵6.1重量份、石斛6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛诃子5.3重量份、余甘子6.3重量份的风湿塞隆胶囊的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种:
[0050]鉴别:
[0051](1)紫草茸的鉴别
[0052]取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取紫草茸对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，分别置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点；
[0053](2)木香的鉴别
[0054]取风湿塞隆胶囊内容物3g，加二氯甲烷15mL，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；取木香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8: I的二氯甲烷环己烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I %香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0055](3)刺柏的鉴别
[0056]取风湿塞隆胶囊内容物10g，加水IOOmL,按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取刺柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0057](4)藏茜草的鉴别
[0058]取风湿塞隆胶囊内容物5g，加甲醇10mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约ImL,作为供试品溶液；另取藏茜草药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的沸程为60~90°C石油醚丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0059](5)绿绒蒿的鉴别
[0060]取风湿塞隆胶囊内容物10g，加体积比1%盐酸溶液30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至PH为10，再用二氯甲烷等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解至2mL，作为供试品溶液；另取绿绒蒿药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加两滴氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0061](6) 丁香的鉴别
[0062]取风湿塞隆胶囊内容物10g，加沸程为60_90°C的石油醚50mL超声，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至ImL作为供试品溶液；另取丁香药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8:2的沸程60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0063](7)豆蘧的鉴别
[0064]取风湿塞隆胶囊内容物10g，加水IOOmL,按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取豆蘧对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0065]含量测定
[0066](I)总黄酮的含量测定
[0067]对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得；
[0068]标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0mLU.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL,分别置25mL量瓶中，编号为I至6号；各加水至5.0mL,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液ImL,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸招溶液ImL,摇勻,放置6分钟,加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以I号为空白；照《中国药典》2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法进行试验，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0069]测定法:取藏药组合物风湿塞隆胶囊内容物lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液4.0mL,置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μ g/mL)，计算，即得；
[0070]本发明藏药组合物风湿塞隆胶囊中总黄酮的含量按芦丁(C27H3tlO16)计，不得少于25mg/g。
[0071](2)印度獐牙菜的含量测定
[0072]照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定；
[0073]色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长243nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ；[0074]对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得；
[0075]供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆胶囊内容物约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，回流提取I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，减压浓缩至干，残渣加水约20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，减压浓缩至干，残渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0076]测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得;
[0077]本发明藏药组合物风湿塞隆胶囊中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于0.35mg/g。
[0078](3)马兜铃酸A的检查
[0079]照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定；
[0080]色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40:60的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm ;理论板数按木香马兜铃酸峰计算应不低于3000 ；
[0081]对照品溶液的制备:取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得；
[0082]供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆胶囊内容物约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，低温浓缩至干，残渣加质量体积份数比0.5%氢氧化钠溶液20mL使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后碱液使用体积份数比5%盐酸调节pH2?3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，挥干，用甲醇溶解并转移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0083]测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得;
[0084]本发明藏药组合物风湿塞隆胶囊中马兜铃酸A (C17H11NO7)的含量不得高于10 μ g/g°
[0085]本发明重量份和体积份的关系为g/mL或kg/L的关系。
[0086]本发明的有益效果:
[0087]风湿塞隆胶囊原质量标准项下只有紫草茸、木香的薄层鉴别项及没食子酸的含量测定项，不能有效的控制其他主要成分的质量。本发明对原标准进行了相应的提高，对原标准中紫草茸、木香的鉴别方法进行了优化，并在原标准的基础上增加了刺柏、丁香、绿绒蒿、藏茜草、豆蘧的鉴别，增加了总黄酮、印度獐牙菜的含量测定方法，马兜铃酸A的检查方法，进一步确保了产品的安全性、均一性、稳定性，使产品质量更有保证，进而确保产品的临床疗效和广大患者的身体健康。同时本法还可用于风湿塞隆的其他制剂，如风湿塞隆颗粒、风湿塞隆丸、风湿塞隆片等。
[0088]下面的实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。[0089]所检测的风湿塞隆胶囊为青海金诃藏药药业股份有限公司生产。
[0090]实验例1:鉴别实验
[0091]1、紫草茸的鉴别
[0092]( I)供试品溶液制备方法研究:
[0093]甲醇超声提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0094]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0095]石油醚提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加沸程30_60°C的石油醚30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0096](2)薄层条件的研究:
[0097]采用硅胶G板，展开剂用甲苯-氯仿-丙酮-甲酸系统，比较了不同体积比例(4:4:0.6:0.1),(5:5:0.5:0.1)、(6:6:0.4:0.1)的展开效果，检视方法为日光下检视。
[0098]采用硅胶G板，展开剂用二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸系统，比较了不同比例(4:4:0.6:0.1),(5:5:0.5:0.1)、(6:6:0.4:0.1)的展开效果，检视方法为日光下检视。
[0099]采用硅胶G板，展开剂用环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸系统，比较了不同比例(4:1:1)、(4:2:1)、(4:0.5:1)的展开效果,检视方法为置紫外光灯(365nm)下检视。
[0100]采用硅胶G板，展开剂用甲苯-二氯甲烷-丙酮系统，比较了不同比例(4:5:0.5)、(5:5:0.5) (6:5:1)的展开效果，显色剂选用体积分数为10%硫酸乙醇溶液,检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0101]本实验还选用了体积比6:5:0.5的二甲苯-二氯甲烷-甲酸、体积比1:1沸程为60-90°C的石油醚-乙酸乙酯、体积比1:1的二甲苯-丙酮等展开系统；质量体积比为1%的香草醛硫酸乙醇溶液、质量体积比为5%硫酸乙醇溶液等显色剂。
[0102]通过上述系统实验，选出试验条件为:
[0103]供试品溶液制备方法:乙酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯20mL,超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。
[0104]展开系统:体积比为5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸
[0105]检视方法:日光下检视。
[0106]具体试验方法为:
[0107]取风湿塞隆胶囊内容物5?15g，加醋酸乙酯10?20mL，超声处理20?40分钟，滤过，滤液浓缩至I?2mL，作为供试品溶液。另取紫草茸对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5?10 μ L,分别点于同一娃胶G薄层板上，以体积比4?6:4?6:0.5:1的二甲苯_ 二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，分别置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点，阴性无干扰。
[0108]结果分析:紫草茸TLC结果显示，展开剂以体积比为4?6:4?6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸条件下有较好的展开效果，体积分数比5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸条件下展开效果最好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图1。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中紫草茸的鉴别方法。
[0109]2、木香的鉴别
[0110](I)供试品溶液制备方法研究:
[0111]甲醇超声提取:取风湿塞隆胶囊内容物3g，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0112]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物3g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0113]石油醚提取:取风湿塞隆胶囊内容物3g，加沸程30_60°C的石油醚30mL，超声处理30min,滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0114]二氯甲烷提取:取风湿塞隆胶囊内容物3g，加二氯甲烷30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷2mL溶解，作为供试品溶液。
[0115]提取挥发油:取风湿塞隆胶囊内容物3g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；
[0116](2)薄层条件的研究:
[0117]采用硅胶G板，展开剂用正己烷-醋酸乙酯系统，比较了不同体积比例(5:1)、(5:2),(5:3)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%香草醛硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0118]采用硅胶G板，展开剂用石油醚-醋酸乙酯系统，比较了不同体积比例(6:2)、(6:1)、(6:3)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%香草醛硫酸溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0119]采用硅胶G板，展开剂用乙酸乙酯-环己烷系统，比较不同体积比例(5:1 )、(6:1 )、(4:1)下层的展开效果，显色剂选用质量体积比1%香草醛硫酸溶液，检视方法为日光下检视。
[0120]采用硅胶G板，展开剂用二氯甲烷-环己烷系统，比较了不同体积比例(8:1)、(5:1),(4:1)的展开效果，显色剂选用体积分数为10%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0121]本实验还选用了体积比5:1的氯仿-正己烷、体积比5:1的环己烷-醋酸乙酯、体积比5:2的二甲苯-环己烷等展开系统；质量体积比为1%硫酸乙醇溶液、质量体积比为1%的硫酸溶液、质量体积比为1%香草醛硫酸溶液等显色剂。
[0122]通过上述系统实验，选出实验条件为:
[0123]供试品溶液制备方法:二氯甲烷超声提取:取风湿塞隆胶囊内容物5g，加二氯甲烷15mL，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
[0124]展开系统:二氯甲烷-环己烷。
[0125]显色剂:质量体积比为1%香草醛硫酸乙醇溶液。
[0126]检视方法:105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0127]具体试验方案为:
[0128]取风湿塞隆胶囊内容物2?5g，加二氯甲烷10?50mL，超声处理20?40分钟，滤过，滤液浓缩至I?5mL,作为供试品溶液；另取木香对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液；另取按处方比例配制的缺木香的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取木香对照药材溶液I?5 μ L，供试品溶液3?8 μ L，阴性对照溶液3?8 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5?8:1?3的二氯甲烷-环己烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量体积比为1%香草醛硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0129]结果分析:檀香TLC结果显示，展开剂以体积比为5?8:1?3的二氯甲烷-环己烷条件下有较好的展开效果，在体积比为8:1的二氯甲烷-环己烷条件下展开效果最好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图2。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中木香药材的鉴别方法。
[0130]3、藏茜草的鉴别
[0131](I)供试品溶液制备方法研究:
[0132]甲醇超声提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0133]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0134]正丁醇提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加正丁醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0135]甲醇超声，调pH值，二氯甲烷提取:取本品内容物10g，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加体积比为1%盐酸20mL使溶解，滤过，滤液加氨水调至碱性，用二氯甲烷振摇提取2次，每次20mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。
[0136]石油醚(60_90°C)回流提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加石油醚(60_90°C)30mL,回流提取30min，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。
[0137](2)薄层条件的研究:
[0138]采用硅胶G板，展开剂用石油醚(60-90°C)-甲酸乙酯-甲酸系统，比较了不同比例(15:5:1)、( 4:1:1)、( 15:10:1)的展开效果，显色剂选用质量体积比为5%香草醛硫酸溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0139]采用硅胶G板，展开剂用石油醚(60-90 °C )-丙酮系统，比较了不同体积比例(4:1)、(5:1)、(5:2)的展开效果,检视方法为紫外光灯(365nm)下检视。
[0140]采用硅胶GF254板，展开剂用二甲苯-丙酮系统，比较了不同比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展开效果，检视方法为紫外光灯(254nm)下检视，然后再喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0141]本实验还选用了体积比4:1的二甲苯-醋酸乙酯、体积比4:1的环己烷醋酸乙酯、体积比9:1的二甲苯-甲醇等展开系统。
[0142]通过上述系统实验，选出实验条件为:
[0143]供试品溶液制备方法:取风湿塞隆胶囊内容物5g，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约lmL，作为供试品溶液。
[0144]展开系统:体积比4:1的石油醚(60?90°C)_丙酮[0145]检视方法:置365nm紫外光灯下检视。
[0146]具体试验方案为:
[0147]取风湿塞隆胶囊内容物5?15g，加甲醇10?50mL，超声处理20?40分钟，滤过，滤液浓缩至约lmL，作为供试品溶液。取藏茜草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取按处方比例配制的缺藏茜草的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取对照药材溶液2?8 μ L,供试品及阴性对照溶液各5?15 μ L,分别点于同一娃胶G薄层板上，以体积比2?6:1?2的石油醚(60?90°C)-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0148]结果分析:藏茜草TLC结果显示，展开剂以体积比2?6:1?2的二甲苯-乙醇条件下有较好的展开效果，在体积比为4:1的石油醚(60?90°C)_丙酮条件下展开效果最好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图3。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中藏茜草药材的鉴别方法。
[0149]4、刺柏的鉴别
[0150](I)供试品溶液制备方法研究:
[0151]体积分数95%乙醇提取:取风湿塞隆胶囊内容物5g，加体积分数95%乙醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加体积分数为95%醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0152]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物5g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0153]石油醚(60?90°C)提取:取风湿塞隆胶囊内容物5g，加石油醚(60?90°C)30mL，超声处理30min,滤过,滤液浓缩至ImL,作为供试品溶液。
[0154]提取挥发油:取风湿塞隆胶囊内容物5g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；
[0155](2)薄层条件的研究:
[0156]采用硅胶G板，展开剂用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸系统，比较了不同体积比例(6:4:1),(6:6:1),(6:8:1)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%三氯化铁乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0157]采用硅胶G板，展开剂用二甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上层溶液系统，比较了不同体积比例(7:10:3:4)、(10:10:3:4)、(4:10:3:4)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%三氯化铁乙醇溶液，日光下检视。
[0158]采用硅胶GF254板，展开剂用二甲苯-丙酮系统，比较了不同体积比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展开效果，检视方法为紫外光灯(254nm)下检视，然后再喷以质量体积比5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0159]采用硅胶G板，展开剂用石油醚-醋酸乙酯系统，比较了不同体积比例(8:2)、(9:1),(8.5:1.5)的展开效果，显色剂选用体积分数为10%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0160]本实验还选用了体积比7:3:1的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸、4:1环己烷-醋酸乙酯、1:1 二甲苯-醋酸乙酯等展开系统；质量体积比为1%三氯化铝乙醇溶液、质量体积比为5%磷钥酸乙醇溶液等显色剂。
[0161]通过上述系统实验，选出试验条件为:
[0162]供试品溶液制备方法:取风湿塞隆胶囊内容物5g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酷)，?Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作为供试品溶液；
[0163]展开剂:石油醚-乙酸乙酯系统。
[0164]展开剂:体积比为8.5:1.5。
[0165]检视方法:喷以体积比I %硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0166]具体试验方案为:
[0167]取风湿塞隆胶囊内容物5~10g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取刺柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取按处方比例配制的刺柏的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8~9:2~I石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，105°C烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0168]结果分析:刺柏TLC结·果显示，以体积比为8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂条件下有较好的展开效果，在体积比为8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯条件下效果最好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图4。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中刺柏的鉴别方法。
[0169]5、绿绒蒿的鉴别
[0170](I)供试品溶液制备方法研究:
[0171]甲醇超声提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0172]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0173]石油醚提取:取风湿塞隆胶囊内容物IOg,加石油醚30mL,超声处理30min,滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0174]酸液煎煮，调pH，二氯甲烷提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加体积比1%盐酸溶液30mL,超声处理30min,滤过,滤液用1%氢氧化钠调碱至pHIO,再用二氯甲烧等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解约2mL，作为供试品溶液。
[0175](2)薄层条件的研究::
[0176]采用硅胶G板，展开剂用石油醚-乙酸乙酯系统，比较了不同体积体积比例(8:2)、(8:1),(8.5:1.5)的展开效果，显色剂选用体积比为10%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0177]采用硅胶GF254板，展开剂用醋酸乙酯-甲醇-水系统，比较了不同体积比例(5:1:0.5),(5:0.5:0.5),(5:1.5:0.5)的展开效果，检视方法为置254nm紫外光灯下检视。
[0178]采用硅胶G板，展开剂用正己烷-乙酸乙酯-甲醇再加两滴氨水溶液系统，比较了不同体积比例(10:4:0.1),(10:2:0.5),(10:8:1)的展开效果，显色剂选用稀碘化铋钾溶液，检视方法日光下检视。
[0179]本实验还选用了体积比10:1:0.5三氯甲烷-甲醇-水、体积比10:1.5:0.5的二甲苯-甲酸乙酯-二氯甲烷等展开系统；质量体积比为1%三氯化铝乙醇溶液、质量体积比为1%的香草醛硫酸乙醇溶液、质量体积比为％硫酸乙醇溶液等显色剂。
[0180]通过上述系统实验，选出试验条件为:
[0181]供试品溶液制备方法:取风湿塞隆胶囊内容物5g，加体积比1%盐酸溶液30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至pHIO，再用二氯甲烷等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解约2mL，作为供试品溶液。
[0182]展开系统:体积比10:4:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加两滴氨水系统。
[0183]显色剂:稀碘化铋钾溶液。
[0184]检视方法:日光下检视。
[0185]具体试验方案为:
[0186]取风湿塞隆胶囊内容物5?10g，加体积比1%盐酸溶液30?40mL，超声处理30分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至PH10，再用二氯甲烷等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解约2mL，作为供试品溶液。另取绿绒蒿药材lg，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8?10:4?6:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加两滴氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，日光下见识。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。
[0187]结果分析:绿绒蒿TLC结果显示，展开剂以体积比为8?10:4?6:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加两滴氨水条件下有较好的展开效果，在体积比为10:4:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再加两滴氨水条件下展开效果最好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图5。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中绿绒蒿药材的鉴别方法。
[0188]6、丁香的鉴别
[0189](I)供试品溶液制备方法研究:
[0190]甲醇超声提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0191]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。
[0192]石油醚提取:取风湿塞隆胶囊内容物5g,加石油醚30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0193]提取挥发油:取风湿塞隆胶囊内容物10g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；[0194](2)薄层条件的研究:
[0195]采用硅胶G板，展开剂用石油醚(60?90°C)-乙酸乙酯系统，比较了不同体积比例(7:1.5)、(8.5:1.5),(9:1)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0196]采用硅胶G板，展开剂用二氯甲烷-甲醇-甲酸系统，比较了不同体积比例(7:0.7:0.2),(8:1:0.2)、(8:0.5:0.2)的展开效果，显色剂选用体积比为10%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0197]采用硅胶G板，展开剂用醋酸乙酯-冰醋酸-甲醇系统，比较了不同体积比例(7:3:1),(8:2:1),(7:1:1)的展开效果，显色剂选用体积比分数10%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0198]本实验还选用了体积比5:5的二甲苯-甲酸乙酯、体积比9:1:1的醋酸乙酯-甲酸-水等展开系统；质量体积比为1%三氯化铝乙醇溶液、质量体积比为1%的香草醛硫酸溶液等显色剂。
[0199]通过上述系统实验，选出试验条件为:
[0200]供试品溶液制备方法:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加石油醚(60_90°C) 50mL超声，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至ImL作为供试品溶液。展开系统:三氯甲烷-甲醇-水-甲酸的下层溶液
[0201 ] 显色剂:体积分数10%硫酸乙醇溶液。
[0202]检视方法:105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0203]具体试验方案为:
[0204]取风湿塞隆胶囊内容物5?10g，加石油醚(60_90°C) 10?50mL，超声处理20?40分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取丁香对照药材lg，同法制成对照药材溶液。另取按处方比例配制的缺丁香的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述3种溶液各2?8 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9?1:1?2的沸程为60?90°C的石油醚-乙酸乙酯的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比10%硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0205]结果分析:丁香TLC结果显示，以体积比为9?1:1?2的石油醚(60?90°C )_乙酸乙酯的下层溶液为展开剂，有较好的展开效果，在体积比为8.5:1.5的石油醚(60?900C)-乙酸乙酯的下层溶液条件下展开效果最好。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图6。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中丁香药材的鉴别方法。
[0206]7、豆蘧的鉴别
[0207]( I)供试品溶液制备方法研究:
[0208]体积分数95%乙醇提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加体积分数95%乙醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加体积分数为95%醇2mL溶解，作为供试品溶液。
[0209]醋酸乙酯提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2mL溶解，作为供试品溶液。[0210]石油醚(60~90°C)提取:取风湿塞隆胶囊内容物10g，加石油醚(60~90°C )30mL,超声处理30min,滤过,滤液浓缩至ImL,作为供试品溶液。
[0211]提取挥发油:取风湿塞隆胶囊内容物10g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；
[0212](2)薄层条件的研究:
[0213]采用硅胶G板，展开剂用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸系统，比较了不同体积比例(6:4:1),(6:6:1),(6:8:1)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%三氯化铁乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0214]采用硅胶G板，展开剂用二甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水的上层溶液系统，比较了不同体积比例(7:10:3:4)、(10:10:3:4)、(4:10:3:4)的展开效果，显色剂选用质量体积比为1%三氯化铁乙醇溶液，日光下检视。
[0215]采用硅胶GF254板，展开剂用二甲苯-丙酮系统，比较了不同体积比例(4:1)、(6:1)、(2:1)的展开效果，检视方法为紫外光灯(25411111)下检视，然后再喷以5%香草醛硫酸溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0216]采用硅胶G板，展开剂用石油醚-醋酸乙酯系统，比较了不同体积比例(8:2)、(9:1),(8.5:1.5)的展开效果，显色剂选用体积分数为10%硫酸乙醇溶液，检视方法为105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0217]本实验还选用了体积比7:3:1的二甲苯-醋酸乙酯-甲酸、体积比4:1的环己烷-醋酸乙酯、体积比1:1的二甲苯-醋酸乙酯等展开系统；质量体积比为1%三氯化铝乙醇溶液、质量体积比为5%磷钥酸乙醇溶液等显色剂。
`[0218]通过上述系统实验，选出试验条件为:
[0219]供试品溶液制备方法:取风湿塞隆胶囊内容物5g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酷)，?Η煮完成后，收集醋Ife乙酷部分，作为供试品溶液；
[0220]展开剂:石油醚-乙酸乙酯系统。
[0221]展开剂:体积比为8.5:1.5。
[0222]检视方法:喷以体积比I %硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，日光下检视。
[0223]具体试验方案为:
[0224]取风湿塞隆胶囊内容物10~20g，置IOOmL圆底烧瓶中，加水50mL，煎煮lh，用挥发油测定器收集挥发油(挥发油测定器中开始加入少量水及ImL醋酸乙酯)，煎煮完成后，收集醋酸乙酯部分，作为供试品溶液；取豆蘧对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取按处方比例配制的豆蘧的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，105°C烘至斑点显色清晰。。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
[0225]结果分析:豆蘧TLC结果显示，以体积比为8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂条件下有较好的展开效果，在体积比为8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯条件下效果最好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图7。此方法可以作为风湿塞隆胶囊中豆蘧的鉴别方法。
[0226]实验例2:马兜铃酸A的检查实验
[0227]1.仪器、试药和供试样品
[0228]仪器:安捷伦1200型高效液相色谱仪；岛津AUW220D电子天平。
[0229]对照品:马兜铃酸A对照品(中国药品生物制品检定所)，批号:110746-200806。
[0230]样品:风湿塞隆胶囊，0.3g/粒(青海金诃藏药药业股份有限公司)，批号:20110601,20110602,20110603ο
[0231]2.检测波长的选择
[0232]取马兜铃酸A对照品溶液，于19(T400nm波长范围内进行扫描，马兜铃酸A在315nm波长处有最大吸收，故根据紫外吸收图谱选定315nm为检测波长。
[0233]3.流动相的选择
[0234]分别研究了甲醇-水体系、甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液体系流动相条件下，马兜铃酸A色谱峰的分离效果，结果发现以甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液体系为流动相，马兜铃酸A色谱峰的峰形较好，甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液在体积份数比为40:60时，马兜铃酸A能够达到较好的色谱分离效果。
[0235]4.对照品溶液的制备
[0236]取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得。
[0237]5.供试品溶液的制备
[0238]按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法，分别考察了不同提取方法、不同提取溶剂、不同提取时间条件下，马兜铃酸A的提取效果。以每克药品中马兜铃酸A的含量为指标确定提取方法、提取溶剂、提取时间。结果见表1、表2和表3。
[0239]表1提取方法考察试验结果
【权利要求】
1.一种原料药组成为塞隆骨3.2重量份、诃子36.3重量份、红花`21.1重量份、豆蘧`28.5重量份、岩精膏10.6重量份、印度猜牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山帆叶10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黄10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蘧6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、绿绒蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香马兜铃5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厣`6.1重量份、石斛`6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛诃子`5.3重量份、余甘子6.3重量份的风湿塞隆制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种: 鉴别: (1)紫草茸的鉴别 取风湿塞隆固体制剂5~15g,加醋酸乙酯10~20mL,超声处理20~40分钟,滤过，滤液浓缩至I~2mL，作为供试品溶液；另取紫草茸对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱 法进行试验，吸取上述两种溶液各5~`10 μ L,分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4~6:4~6:0.5:1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，分别置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点； (2)木香的鉴别 取风湿塞隆固体制剂2~5g，加二氯甲烷10~20mL，超声处理20~40分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；取木香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5~10 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5~8:1~2的二氯甲烷-环己烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点； (3)刺柏的鉴别 取风湿塞隆固体制剂5~15g,加水50~150mL,按水蒸气蒸懼法提取挥发油，挥发油作为供试品；取刺柏对照药材0.5~lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各2~5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比7~9:3~I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)藏茜草的鉴别 取风湿塞隆固体制剂5~IOg,加甲醇10~20mL,超声处理20~40分钟,滤过,滤液浓缩至约I~2mL，作为供试品溶液；另取藏茜草药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各2~5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比2~6:1~2的沸程为60~90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (5)绿绒蒿的鉴别取风湿塞隆固体制剂5~10g，加体积比1%盐酸溶液20~30mL，超声处理30~40分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至PH为10，再用二氯甲烷等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解约2mL，作为供试品溶液；另取绿绒蒿药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比10~8:4~5:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加两滴氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑占.(6)丁香的鉴别 取风湿塞隆固体制剂5~10g，加沸程为60-90°C石油醚50~80mL超声，超声处理30~40分钟，滤过，滤液浓缩至I~2mL作为供试品溶液；另取丁香药材Ig,同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8~9:2~I的石油醚(60~90°C)_乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (7)豆蘧的鉴别 取风湿塞隆固体制剂10~20g，加水80~IOOmL,按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取豆蘧对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各2~3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8~9:2~I的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 含量测定· (I)总黄酮的含量测定 对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分别置25mL量瓶中，编号为I至6号；各加水至5.0mL,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液ImL,混匀，放置6分钟，加重量体积份数比8-10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15-20分钟，以I号为空白；照《中国药典》2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法进行试验，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线； 测定法:取藏药组合物风湿塞隆制剂细粉lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液4.0mL,置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5.0mL"起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μ g/mL)，计算，即得； 本发明藏药组合物风湿塞隆制剂中总黄酮的含量按芦丁(C27H3tlO16)计，不得少于25mg/g; (2)印度獐牙菜的含量测定 照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定； 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:70-75的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长243nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ； 对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得; 供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆制剂细粉约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，回流提取I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，减压浓缩至干，残渣加水约20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，减压浓缩至干，残渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明藏药组合物风湿塞隆制剂中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于0.35mg/g ； (3)马兜铃酸A的检查 照《中国药典》201·0年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定； 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40-45:55-60的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm ;理论板数按木香马兜铃酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备:取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得； 供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆制剂细粉约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，低温浓缩至干，残渣加质量体积份数比0.5%氢氧化钠溶液20mL使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后碱液使用体积份数比5%盐酸调节pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，挥干，用甲醇溶解并转移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得； 本发明藏药组合物风湿塞隆制剂中马兜铃酸A (C17HnNO7)的含量不得高于10μ g/g。
2.如权利要求1所述的风湿塞隆制剂的质量检测方法，其中的制剂是指取上述权利要求I的原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型。
3.如权利要求1或2所述的风湿塞隆制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种: 鉴别: (I)紫草茸的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物10g，加醋酸乙酯20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取紫草茸对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5: 5: 0.5: 0.1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，分别置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点； (2)木香的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物3g，加二氯甲烷15mL，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；取木香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各1Oy L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8: 1的二氯甲烷-环己烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)刺柏的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物10g，加水100mL,按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取刺柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VIB薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比.8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I %硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)藏茜草的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物5g，加甲醇10mL，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约lmL，作为供试品溶液；另取藏茜草药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的沸程为60~90°C石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (5)绿绒蒿的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物10g，加体积比1%盐酸溶液30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至PH10，再用二氯甲烷等体积萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解至2mL，作为供试品溶液；另取绿绒蒿药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》.2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇，再滴加两滴氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (6)丁香的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物10g，加沸程为60-90°C的石油醚50mL超声，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至ImL作为供试品溶液；另取丁香药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8:2的沸程60-90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比I %硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (7)豆蘧的鉴别 取风湿塞隆胶囊内容物10g，加水IOOmL,按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取豆蘧对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比·8.5:1.5的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比I %硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑占.含量测定 (1)总黄酮的含量测定 对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0mLU.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分别置25mL量瓶中，编号为I至6号；各加水至5.0mL,加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液ImL,混匀，放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸招溶液ImL,摇匀，放置6分钟,加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以I号为空白；照《中国药典》2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法进行试验，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线； 测定法:取藏药组合物风湿塞隆胶囊内容物lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL置IOOmL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液4.0mL，·置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μ g/mL)，计算，即得；本发明藏药组合物风湿塞隆胶囊中总黄酮的含量按芦丁(C27H3tlO16)计，不得少于25mg/g ; (2)印度獐牙菜的含量测定 照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定； 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长243nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ； 对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量，加乙醇制成每ImL含45 μ g的溶液，即得; 供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆胶囊内容物约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，称定重量，回流提取I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，减压浓缩至干，残渣加水约20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，减压浓缩至干，残渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得； 本发明藏药组合物风湿塞隆胶囊中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于0.35mg/g ； (3)马兜铃酸A的检查 照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定； 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40:60的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm ;理论板数按木香马兜铃酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备:取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含500ng的溶液，即得； 供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆胶囊内容物约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，低温浓缩至干，残渣加质量体积份数比0.5%氢氧化钠溶液20mL使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20mL,萃取后碱液使用体积份数比5%盐酸调节pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，挥干，用甲醇溶解并转移至ImL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得； 本发明藏药组合物风湿塞隆胶囊中马兜铃酸A (C17H11N07)的含量不得高于10 μ g/g。
4.如权利要求1或2所述的风湿塞隆制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括如下鉴别和/或含量测 定方法中的一种或几种: 鉴别: (1)紫草茸的鉴别 取风湿塞隆颗粒10g，加醋酸乙酯20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取紫草茸对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5: 5: 0.5: 0.1 二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，分别置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点； (2)木香的鉴别 取风湿塞隆颗粒3g，加二氯甲烷15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；取木香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各IOy L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8: I 二氯甲烷-环己烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)刺柏的鉴别 取风湿塞隆颗粒10g，加水100ml，按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取刺柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8.5:1.5石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)藏茜草的鉴别 取风湿塞隆颗粒5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液；另取藏茜草药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以4:160~90°C石油醚-丙酮为展开剂,展开,取出，晾干,置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (5)绿绒蒿的鉴别 取风湿塞隆颗粒10g，加体积比1%盐酸溶液30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用1%氢氧化钠调碱至PH为10，再用二氯甲烷等体积萃取3次，合并二氯甲烷液，蒸干，加甲醇至2ml溶解，作为供试品溶液；另取绿绒蒿药材lg，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比10:4:1正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加两滴氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液，日光下见识；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (6)丁香的鉴别 取风湿塞隆颗粒10g，W 60-90°C石油醚50ml超声，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至Iml作为供试品溶液；另取丁香药材lg，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8:2的60~90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比1%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点； (7)豆蘧的鉴别 取风湿塞隆颗粒10g，加水100ml，按水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油作为供试品；取豆蘧对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取上述两种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8.5:1.5石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比I %硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 含量测定: (I)总黄酮的含量测定 对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备:精密量取上述对照品液0.0ml、1.0ml,2.0ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml,分别置25ml量瓶中，编号为I至6号；各加水至5.0ml，加重量体积份数比5%亚硝酸钠试液Iml,混匀,放置6分钟,加重量体积份数比10%硝酸招溶液Iml,摇匀，放置6分钟,加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以I号为空白；照《中国药典》2010年版一部附录V A紫外-可见分光光度法进行试验，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法:取藏药组合物风湿塞隆颗粒lg，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液4.0ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量(μ g/ml)，计算，即得； 本发明藏药组合物风湿塞隆颗粒中总黄酮的含量按芦丁(C27H3tlO16)计，不得少于25mg/g ; (2)印度獐牙菜的含量测定 照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定； 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长243nm ;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500 ； 对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量，加乙醇制成每Iml含45μ g的溶液，即得; 供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆颗粒lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，回流提取I小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，减压浓缩至干，残渣加水约20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，减压浓缩至干，残渣加乙醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明藏药组合物风湿塞隆颗粒中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)计，不得少于0.35mg/g ； (3)马兜铃酸A的检查 照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定； 色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比40:60的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为315nm ;理论板数按木香马兜铃酸峰计算应不低于3000 ； 对照品溶液的制备:取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含500ng的溶液，即得； 供试品溶液的制备:取藏药组合物风湿塞隆颗粒10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，低温浓缩至干，残渣加质量体积份数比0.5%氢氧化钠溶液20ml使其完全溶解并转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次,每次20ml,萃取后碱液使用体积份数比5%盐酸调节pH 2~3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯萃取液，挥干，用甲醇溶解并转移至Iml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得； 本发明藏药组合物风湿塞隆颗粒中马兜铃酸A (C17HnNO7)的含量不得高于10 μ g/g。
【文档编号】G01N30/02GK103852555SQ201210523974
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月7日 优先权日:2012年12月7日
【发明者】郑亭亭, 江玉娟, 任松鹏, 宋洋, 单玉刚 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司