专利名称：一种复方a 酮酸片中赖氨酸的含量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种赖氨酸的含量检测方法，特别涉及一种复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法。
背景技术：
目前对于氨基酸类的分析较为常用的是氨基酸分析仪及反相高效液相色谱与各种柱前或柱后衍生物相结合的氨基酸分析技术。近年来，柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸的技术取得了很大的进展。与氨基酸分析仪相比，柱前衍生法具有快速、灵敏度高、不需专用仪器等优点。常用的柱前衍生试剂有邻苯ニ甲醛(0PA)、9-芴基甲氧基羰酰氯(FM0C-C1)、异硫氰酸苯酯(PITC)和丹酰氯(Dansyl-Cl)等。其中以OPA的应用最广，因为OPA衍生步骤简単，反应速度快，剰余试剂不干扰測定，衍生物可用紫外、荧光或电化学检测器检测。赖氨酸学名为2，6_ニ氨基己酸。其为蛋白质中唯一带有侧链伯氨基的氨基酸。结
构式如下
权利要求
1.一种复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)硼酸缓冲溶液的配制 0.4mol / L硼酸缓冲溶液的配制取硼酸和氢氧化钠，加水使溶解并稀释制，然后用碱溶液调pH至10. 10 10. 30 ； (2)邻苯二甲醛反应液的配制 称取邻苯二甲醛适量，加甲醇或乙醇溶解定容，配制成100mg/ml的邻苯二甲醛储备液；吸取邻苯二甲醛储备液适量，加入29T3% (v/v)的3-巯基丙酸混合均匀后用硼酸缓冲液稀释，配制成邻苯二甲醛浓度为10mg/ml的反应液； (3)样品溶液的测定 在可使用自动柱前衍生的高效液相色谱仪下，按如下进样程序对赖氨酸样品进行柱前衍生，并在338nm处对衍生物进行测定 a 200 u L/min的速度吸取硼酸缓冲液2. 5 y L ; b :200 u L/min速度吸取赖氨酸样品液IyL; c :在空气中以最大速度将硼酸缓冲液和赖氨酸样品液进行混合得第一混合液； d :等待 0. 2min ； e :90 u L/min的速度吸取纯化水进行洗针； f :最大速度吸取OPA反应液0. 5^2 u L ； g :在空气中以最大速度将第一混合液和OPA反应液混合； h:进样。
2.如权利要求1所述的复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法，其特征在于，步骤(I)中的硼酸缓冲液PH值为10. 20。
3.如权利要求1所述的复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法，其特征在于，步骤(2)中的3-巯基丙酸的体积浓度为2% (v/v)。
4.如权利要求1所述的复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法，其特征在于，步骤(3)的步骤(b)中的赖氨酸样品液浓度为0. 6^0. Olmg/mlo
5.如权利要求1所述的复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法，其特征在于，步骤(3)中OPA的吸取量为I y L，即与赖氨酸样品液的体积比为1:1。
全文摘要
本发明涉及一种复方a酮酸片中赖氨酸的含量检测方法，首先，配制浓度为10mg/ml的邻苯二甲醛反应液(OPA试剂)，其中含2%~3%(v/v)的3-巯基丙酸；然后，以自动柱前衍生的方法，在pH为10.2±0.1的硼酸缓冲液系统中将赖氨酸与反应液以约1:1(v/v)的比例混合，室温反应；最后，采用高效液相色谱法在338nm处测定赖氨酸的含量。利用本发明的方法检测赖氨酸的含量，有效的解决了在已有OPA柱前衍生方法中赖氨酸出现的双峰问题，提高了赖氨酸在自动柱前衍生测定中的进样精密度，并且大大缩短了检测时间，特别适合实验室测定氨基酸样品中赖氨酸的含量。
文档编号G01N30/02GK103048407SQ20121056376
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者叶湘武, 付爱玲, 邱永锋 申请人:上海景峰制药股份有限公司