专利名称：棘豆药材及其制剂的检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种药材及其制剂的检测方法。
背景技术：
六省区《藏药标准》78版记载棘豆为豆科轮叶棘豆Oxytropis chiliophyllaRoyle或镰形棘豆Oxytropis falcata Bunge的干燥全草。其来源与《中国药典》2010版附录的来源相同，性寒，味苦，有毒，功能主治项下记载清热解毒，生肌愈疮，涩脉止血，通便。用于治疗疫疠，中毒病，黄水病，便秘，炭疽；外敷治疗疮疖肿痛。而《青海省藏药标准》镰形棘豆(莪达夏)项下，来源规定为“本品为豆科植物镰形棘豆Oxytropis falcata Bunge的干燥全草”，与《藏药部颁标准》95版棘豆(莪达夏)相比，其性、味同，功能主治项下增加了“去骨瘤”。棘豆药材及其制剂在藏药中广泛应用，但是原标准中对其检测方法只有来源，性状，显微定性等，检测方法比较简单，缺乏量化等指标控制。现在技术中尚没有关于棘豆药材及其制剂的薄层鉴别和含量检测方法的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种棘豆的检测方法，所述方法适用于检测棘豆药材以及含棘豆药材的制剂，具有重现性好、专属性强，能够有效地检测棘豆药材及含棘豆药材制剂的质量等优点，从而使棘豆药材及含棘豆药材的制剂质量稳定、安全、可控。为了实现上述目的，本发明的技术方案为一种棘豆的检测方法，所述方法适用于检测棘豆药材以及含棘豆药材的制剂，包括下述鉴别和/或测定方法通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别；通过高效液相色谱法对棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量进行测定。具体地，上述的检测方法中，棘豆的定性鉴别包括Ia)制备棘豆供试品溶液1、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液1、不含棘豆的阴性样品溶液I ;2a)照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ia)所获得的棘豆供试品溶液1、2' Af -二羟基查尔酮对照品溶液1、阴性样品溶液I，并点样于同一娃胶G薄层板上；3a)以石油醚(60 90°C)_正己烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，风吹至斑点显色清晰；置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与2'，4' - 二羟基查尔酮对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光的斑点；棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量测定包括lb)制备棘豆供试品溶液I1、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I1、不含棘豆的阴性样品溶液II ；2b)照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录NI D试验，分别吸取步骤Ib)所获得的棘豆供试品溶液Π、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I1、阴性样品溶液II，注入液相色谱仪，测定；3b)以每I重量份的棘豆药材干品或制剂中每含I重量份的棘豆药材含棘豆以
2,，4, -二羟基查尔酮计，不得少于0.0004重量份。更具体地，检测方法中所述棘豆供试品溶液1、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液1、阴性样品溶液I的制备方法包括:取棘豆药材或含棘豆药材的制剂，加甲醇或无水乙醇，超声处理，取出，放冷，滤过，滤液浓缩，作为棘豆供试品溶液I ;另取2'，4' - 二羟基查尔酮，加甲醇或无水乙醇制成2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I ;按处方比例及制备工艺，配制不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含棘豆的阴性样品溶液I ;所述棘豆供试品溶液11、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I1、阴性样品溶液II的制备方法包括:取所述棘豆药材或含棘豆药材的制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇，密塞，称定重量，超声处理，取出，放冷，再称定量，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为棘豆供试品溶液II ;另取2'，4' - 二羟基查尔酮对照品，称定，加70%乙醇制成2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液II ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含棘豆的阴性样品溶液II。本发明所述的检测方法，包括下述鉴别和/或测定方法:通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别:取棘豆药材0.1-10重量份或相当于含0.1-10重量份棘豆药材的制剂，加甲醇或无水乙醇10-60体积份，超声处理1-40分钟，取出，放冷，滤过，滤液浓缩至约0.1-10体积份，作为棘豆供试品溶液I ;另取2'，4' -二基查尔酮对照品0.1-10重量份，加甲醇或无水乙醇1-10体积份，制成2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含棘豆的阴性样品溶液I ;照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各
0.001-0.03体积份，分别点于同一娃胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )-正己烧-乙酸乙酯，体积比I 15: 0.5 10: 0.5 10为展开剂,薄层板置展开缸中饱和0-40分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5-6%三氯化铝乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与2'，4' - 二羟基查尔酮对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光的斑点；通过高效液相色谱法对棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量进行测定:取棘豆药材0.1-10重量份或相当于含0.1-10重量份棘豆药材的制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30% -乙醇，密塞，称定重量，超声处理1-60分钟，取出，放冷，再称定重量，用30% -无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为棘豆供试品溶液II;取2'，4' -二羟基查尔酮对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每I体积份含2'，4/ - 二羟基查尔酮对照品0.0001-0.01重量份的溶液，作为2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液II ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成棘豆阴性样品溶液II ;照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VI D试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以积比为20 80 80 20的乙腈-O.1 %甲酸溶液为流动相；检测波长为365±10nm;理论板数按2'，4' - 二羟基查尔酮峰计算应不低于1000;分别精密吸取棘豆供试品溶液、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液、阴性样品溶液各O. 005 O. 02体积份，注入液相色谱仪，测定，以棘豆药材干品每I重量份或制剂中每含棘豆药材I重量份含棘豆以2'，4' -二羟基查尔酮计，不得少于O. 0004重量份。进一步地，上述检测方法，包括下述鉴别和/或测定方法通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别取棘豆药材I重量份或相当于含I重量份棘豆药材的制剂，加甲醇或无水乙醇20体积份，超声处理15分钟，取出，放冷，滤过，滤液浓缩至约2体积份，作为棘豆供试品溶液I;另取2'，4' - 二羟基查尔酮对照品，加甲醇或无水乙醇制成每Iml含2'，4' -二羟基查尔酮对照品Img的溶液，作为2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成棘豆阴性样品溶液I ;照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各O. 01体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )-正己烷-乙酸乙酯，体积比7 : 4 : 3为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与2'，4' -二羟基查尔酮对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光的斑点；通过高效液相色谱法对棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量进行测定取棘豆药材I重量份或相当于含I重量份棘豆药材的制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50体积份，密塞，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为棘豆供试品溶液II ;取2'，4' -二羟基查尔酮对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每I体积份含2'，4' -二羟基查尔酮对照品O. 02重量份的溶液，作为2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液II ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成棘豆阴性样品溶液II ;照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VI D试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以积比为60 40的乙腈-O. 1%甲酸溶液为流动相；检测波长为365nm ；理论板数按2'，4' -二羟基查尔酮峰计算应不低于1000;分别精密吸取棘豆供试品溶液和、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液、阴性样品溶液各O. 01体积份，注入液相色谱仪，测定，以棘豆药材干品每I重量份或制剂中每含棘豆药材I重量份含棘豆以2'，4' -二羟基查尔酮计，不得少于O. 0004重量份。本发明所述棘豆材药或含棘豆药材的制剂具有治疗清热解毒，生肌愈疮，涩脉止血、通便的作用。用于治疗疫疠，中毒病，黄水病，便秘，炭疽；外敷治疮疖肿痛药物的用途。本发明的检测方法建立了棘豆药材或含棘豆药材制剂的薄层鉴别方法，专属性强，重现性较好；另外还增加了棘豆药材含棘豆药材的制剂中棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量测定方法，该检测方法专属性强，且阴性无干扰。所述检测方法经多人多次反复操作，结果准确、重现性好、专属性强，符合准确、简便、灵敏、快速的原则，可以有效的检测药材及其制剂的质量。
图1为本发明所述棘豆的薄层色谱图；其中，从左到右1-3道为棘豆供试品、4道为2'，4' -二羟基查尔酮对照品、5道为阴性样品。图2为本发明所述棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮色谱图；其中，A为2'，4' -二羟基查尔酮对照品、B为棘豆供试品、C为阴性样品、D为棘豆药材。图3为2'，4' -二羟基查尔酮的峰面积与对照品浓度的线性关系图。
具体实施例方式下述实验例和实施例进一步说明、但不限制本发明。以下使用的试剂及仪器，除特别说明以外，均为普通市售。棘豆药材采自青海黑马河，经鉴定为豆科植物镰形棘豆Oxytropis falcataBunge02'，4' - 二羟基查尔酮对照品纯度98%，购自美国Alfa公司。阴性样品按处方比例及制备工艺，配制不含棘豆的阴性样品。实验例1:棘豆的薄层鉴别(I)仪器电子秤、具塞锥形瓶、移液管、超声波提取仪、滤纸、点样器、硅胶G板、层析缸、紫外灯、喷雾瓶。(2)对照品2' A' - 二羟基查尔酮，纯度98%，购自美国Alfa公司。(3)试剂甲醇、乙醇、甲酸、乙酸乙酯、石油醚、正己烷。(4)检验方法提取溶剂乙醇、甲醇、80%甲醇、乙酸乙酯。提取方法振摇和超声。展开剂石油醚(60 90°C )_正己烷-乙酸乙酯(7 4 3)、乙酸乙酯-三氯甲烷-石油醚(60 90°C ) (7 : 2 : 3)。分别选择以上提取溶剂、提取方法和展开剂进行试验，结果如下
权利要求
1.一种棘豆的检测方法，所述方法适用于检测棘豆药材以及含棘豆药材的制剂，包括下述鉴别和/或测定方法: 通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别； 通过高效液相色谱法对棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量进行测定。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于: 通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别包括: Ia)制备棘豆供试品溶液1、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液1、不含棘豆的阴性样品溶液I ; 2a)照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ia)所获得的棘豆供试品溶液1、2' Af -二羟基查尔酮对照品溶液1、阴性样品溶液I，并点样于同一娃胶G薄层板上； 3a)以石油醚(60 90°C)_正己烷-乙酸乙酯为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以三氯化铝乙醇溶液，风吹至斑点显色清晰；置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与2'，4' - 二羟基查尔酮对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光的斑点； 通过高效液相色谱法对棘豆所含2'，4' - 二羟基查尔酮的含量进行测定包括: Ib)制备棘豆供试品溶液11、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I1、不含棘豆的阴性样品溶液II ; 2b)照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VI D试验，分别吸取步骤Ib)所获得的棘豆供试品溶液11、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I1、阴性样品溶液II，注入液相色谱仪，测定； 3b)以每I重量份的棘豆药材干品或制剂中每含I重量份的棘豆药材含棘豆以2'，4/ -二羟基查尔酮计，不得少于0.0004重量份。
3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述棘豆供试品溶液1、2'，4'-二羟基查尔酮对照品溶液1、阴性样品溶液I的制备方法包括: 取棘豆药材或含棘豆药材的制剂，加甲醇或无水乙醇，超声处理，取出，放冷，滤过，滤液浓缩，作为棘豆供试品溶液I ;另取2'，4' - 二羟基查尔酮，加甲醇或无水乙醇制成2，Λ' -二羟基查尔酮对照品溶液I ;按处方比例及制备工艺，配制不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含棘豆的阴性样品溶液I ; 所述棘豆供试品溶液I1、2'，4' - 二羟基查尔酮对照品溶液I1、阴性样品溶液11的制备方法包括: 取所述棘豆药材或含棘豆药材的制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇，密塞，称定重量，超声处理，取出，放冷，再称定量，用70 %乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为棘豆供试品溶液II ;另取2' Λ' - 二羟基查尔酮对照品，称定，加70%乙醇制成2' Λ' -二羟基查尔酮对照品溶液II ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含棘豆的阴性样品溶液II。
4.如权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，包括下述鉴别和/或测定方法: 通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别:取棘豆药材0.1-10重量份或相当于含0.1-10重量份棘豆药材的制剂，加甲醇或无水乙醇10-60体积份，超声处理1-40分钟，取出，放冷，滤过，滤液浓缩至约0.1-10体积份，作为棘豆供试品溶液I ;另取2'，4' -二基查尔酮对照品0.1-10重量份，加甲醇或无水乙醇1-10体积份，制成2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液I ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含棘豆的阴性样品溶液I ;照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.03体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )-正己烷-乙酸乙酯，体积比I 15: 0.5 10: 0.5 10为展开剂，薄层板置展开缸中饱和0-40分钟，展开，取出，晾干，喷以0.5-6%三氯化铝乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与2'，4' -二羟基查尔酮对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光的斑点； 通过高效液相色谱法对棘豆所含2'，4' -二羟基查尔酮的含量进行测定: 取棘豆药材0.1-10重量份或相当于含0.1-10重量份棘豆药材的制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30 % -无水乙醇，密塞，称定重量，超声处理1-60分钟，取出，放冷，再称定重量，用30% -100% -乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为棘豆供试品溶液II;取2'，4' -二羟基查尔酮对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每I体积份含2' Λ' - 二羟基查尔酮对照品0.0001-0.01重量份的溶液，作为2' Λ' - 二羟基查尔酮对照品溶液II ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成棘豆阴性样品溶液II ;照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VID试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以积比为20 80: 80 20的乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相；检测波长为365±10nm;理论板数按2' A1 -二羟基查尔酮峰计算应不低于1000;分别精密吸取棘豆供试品溶液、2' Λ' -二羟基查尔酮对照品溶液、阴性样品溶液各0.005 0.02体积份，注入液相色谱仪，测定，以棘豆药材干品每I重量份或制剂中每含棘豆药材I重量份含棘豆以2' Λ' -二羟基查尔酮计，不得少于0.0004重量份。
5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，包括下述鉴别和/或测定方法: 通过薄层色谱法对棘豆进行定性鉴别: 取棘豆药材I重量份或相当于含I重量份棘豆药材的制剂，加甲醇或无水乙醇20体积份，超声处理15分钟，取出，放冷，滤过，滤液浓缩至约2体积份，作为棘豆供试品溶液I ;另取2' Λ' - 二羟基查尔酮对照品，加甲醇或无水乙醇制成每Iml含2' Λ' -二羟基查尔酮对照品Img的溶液，作为2' A1 -二羟基查尔酮对照品溶液I ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成棘豆阴性样品溶液I ;照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各0.01体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_正己烷-乙酸乙酯，体积比7: 4: 3为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与2' Λ' _ 二羟基查尔酮对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光的斑点； 通过高效液相色谱法对棘豆所含2' Λ' -二羟基查尔酮的含量进行测定: 取棘豆药材I重量份或相当于含I重量份棘豆药材的制剂，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %乙醇50 体积份，密塞，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为棘豆供试品溶液II ;取2'，4' -二羟基查尔酮对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每I体积份含2'，4' -二羟基查尔酮对照品0.02重量份的溶液，作为2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液II ;按处方比例及制备工艺，配置不含棘豆的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成棘豆阴性样品溶液II ;照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VI D试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以积比为60: 40的乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相；检测波长为365nm ；理论板数按2'，4' -二羟基查尔酮峰计算应不低于1000;分别精密吸取棘豆供试品溶液和、2'，4' -二羟基查尔酮对照品溶液、阴性样品溶液各0.01体积份，注入液相色谱仪，测定，以棘豆药材干品每I重量份或制剂中每含棘豆药材I重量份含棘豆以2'，4' -二羟基查尔酮计，不得少于0.0004重量份。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述棘豆药材或含棘豆药材的制剂具有用于制备治疗疫疠，中 毒病，黄水病，便秘，炭疽；外敷治疮疖肿痛的药物的用途。
全文摘要
本发明涉及一种棘豆药材及其制剂的检测方法，包括下述鉴别和/或检测方法的一种或几种通过薄层色谱法对棘豆药材含有棘豆药材的制剂中的棘豆进行定性鉴别；通过高效液相色谱法对棘豆药材或含有棘豆药材的制剂中棘豆所含2′，4′-二羟基查尔酮的含量进行测定。通过上述检测方法，可以对棘豆药材或含有棘豆药材的制剂进行有效的检测。
文档编号G01N30/02GK103076424SQ20121057404
公开日2013年5月1日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者李波, 魏学明, 张国霞, 王维波, 刘鸿雁, 陈丽娟 申请人:甘肃奇正藏药有限公司