专利名称：一种电镜超薄切片一次性染色套装的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种电镜超薄切片一次性染色套装，属于生物电子显微科学领域。
技术背景在生物电子显微科学领域中，超薄切片是一种经典方法，电子染色是其中的关键技术之一。传统的超薄切片电子染色，其染液采用醋酸双氧铀和柠檬酸铅，染色方法是在蜡板上滴一滴铀染液，使超薄切片载网的样品面向下悬浮在染液滴上，20分钟后用镊子夹持载网，在盛满双蒸水的烧杯中上下反复冲洗30次(或流水冲洗2-3分钟)，将载网放置在干净滤纸上，稍干燥后再进行铅染，其操作方法同铀染。醋酸双氧铀具有放射性和化学毒性，柠檬酸铅不仅有化学毒性，而且极易与空气中的二氧化碳结合产生碳酸铅沉淀污染超 薄切片。这种常规染色方法效率低，滴染过程暴露在空气中容易污染切片，水冲洗过程容易使切片脱落，染色工作完成后清洗器皿的过程，容易造成环境污染，初学者不好掌握。针对常规染色技术容易出现的问题，国内外很多实验室和专业厂商不断推出各种创新或改良方法。最有代表性的是德国Leica徕卡公司的EM AC20型全自动载网染色机，在整个染色过程中，载网样品处于充满染色剂的密封无空气的染色室中，废液自动分类收集，同时染20个载网样品，但由于售价很高(几十万元)，国内少有实验室购置使用。近几年美国和日本等国家生产出了几种小型染色套装2010-2012年度，北京中镜科仪产品目录P42，它们在减少载网样品污染、经济实用等方面有一定改进，但仍存在一些问题。如①硅胶狭缝固着载网染色套装系列，不能全封闭；②染色模具套装系列，用染液剂量较大；③金属薄片载网架套装系列，既可以全密闭染色又能节省试剂，但固着载网的方式欠可靠；④各类市售小型染色套装均为进口，价格仍较高(数百元至上千元)使用这些进口染色套装染色完毕，仍要清洗器皿以备再用，环境污染则不可避免。
发明内容针对上述现有技术，本实用新型提供了一种电镜超薄切片一次性染色套装，用于超薄切片染色。本实用新型吸纳了同类产品的优点，弥补了不足，使染色过程更方便、安全、可靠，节省染色剂，价格比同类进口小型染色套装降低几十倍，实现了染色套装国产化。本实用新型是通过以下技术方案实现的—种电镜超薄切片一次性染色套装，包括载网架和染色盒，其中，载网架由载网架主体和载网架盖构成，载网架主体连接在载网架盖一侧，载网架盖另一侧设有至少两个注液孔，载网架主体上设有两排载网孔，载网孔内周边设有载网孔凹槽，两排载网孔之间设有中央凹槽，每个载网孔外侧设有移网凹槽；载网架主体伸入染色盒内，染色盒底端设有液体排出口，使用时，液体排出口与市售输液器紧密连接，输液器出口插入废液瓶。优选的，所述载网架盖一侧设有三个注液孔，注液孔的孔径尺寸适于普通医用注射器I号针头。在注入柠檬酸铅染液后，随即用空针管抽气后用封口膜封闭，尽可能减少空气与染液接触，避免切片上高电子密度沉积物。优选的，所述载网架主体上设有两排载网孔，每排10个，载网孔内周边设有载网孔凹槽，载网孔凹槽深度为O. 2mm，与载网厚度一致，载网孔外径3. 1mm，便于置入载网和粘胶，内径2. 5mm,与载网有效内径一致，内外孔半径之差为O. 3mm。优选的，所述移网凹槽的深度为O. 2mm。优选的，所述中央凹槽的宽度为5mm，深度为O. 2mm，与载网孔凹槽和移网凹槽一致，以使置入后的载网与粘网胶在一个平面上。载网与粘胶接触宽度为O. 3mm，从设计上不仅能控制每个载网粘胶量一致，而且极微量，使粘胶带来的污染可以忽略。考虑到国内有报道在中低倍率下可采用双面胶带固着载网贺子义，胡冰，史永红.提高电镜超薄切片染色效率的自制装置〔J〕.电子显微学报，2011，30 (I) :72-74，据此设计中央凹槽的宽度为5mm，与国内市售双面胶带最小宽度相同，便于贴胶带，同时使胶带与载网接触宽度均为
O.3mm η 所述染色盒由透明医用塑料制作，在插入载网架后可以看到载网孔和载网，注入液体后液面可视。使用时，注入O. 5ml液体液面覆盖第二列载网，注入Iml液体液面覆盖第五列载网，注入I. 5ml液体液面覆盖第八列载网，注入2ml液体液面覆盖第十列载网。根据末位载网对应的ml数值，估算并抽取适量液体。所述染色盒底端的液体排出口口径采用与普通输液器相同的结构尺寸，便于接入输液器(带有液体流量调节器)。本实用新型的电镜超薄切片一次性染色套装，还可以包括以下组件接在染色盒的液体排出口上的输液器，接在输液器下端的废液收集瓶(可采用废弃的500ml的蒸馏水瓶等)，以及用于将载网固定在载网架上的粘网胶或双面胶带(5mm宽)。本实用新型一次最多染20个载网，如进行大宗样品染色，可同时用多个本实用新型，省时、省力、价廉。中央凹槽、载网孔凹槽和移网凹槽的精确参数，不仅便于操作，还规范了载网与粘胶的接触面积，使得载网样品多次在液体中浸泡、冲洗不出现位移或脱落，从设计上将载网边缘粘胶面减到最小。载网架和染色盒结合紧密，使整个染色过程全封闭进行，外环境对切片的污染降到最低，获得优质超薄切片的几率提高。低廉的价格，可一次性使用，不需要反复清洗，简化了操作，避免操作人员在清洗染色器皿过程中接触毒性物质和操作性污染，有利于实验室环境安全。
图I为本实用新型的结构示意图。图2为载网架的结构示意图。图3为染色盒的结构示意图。图4为图2的左视图。图5为图2A方框内载网架局部放大示意图。其中，1、1号针孔；2、2号针孔；3、3号针孔；4、载网架；5、染色盒；6、载网架主体；
7、载网架盖；8、载网孔；9、载网孔凹槽；10、中央凹槽；11、移网凹槽；12、液体排出口。
具体实施方式
[0022]
以下结合附图和实施例对本实用新型作进一步的说明。一种电镜超薄切片一次性染色套装，包括载网架4和染色盒5，如图1、2、3、4、5所示，其中，载网架4由载网架主体6和载网架盖7构成，如图2所示，载网架主体6连接在载网架盖7 —侧，载网架盖7另一侧设有三个注液孔1号针孔1、2号针孔2、3号针孔3，如图4所示，载网架主体6上设有两排载网孔8，载网孔8内周边设有载网孔凹槽9，两排载网孔8之间设有中央凹槽10，每个载网孔8外侧设有移网凹槽11，便于用镊子取放载网；载网架主体6伸入染色盒5内，染色盒5底端设有液体排出口 12 ;使用时，载网架盖7与染色盒5紧密扣合，染色盒5的液体排出口 12与输液器紧密连接，输液器出口插入废液瓶。所述注液孔的孔径尺寸适于普通医用注射器针头插入(启用前由封口膜封闭)。在注入柠檬酸铅染液后，随即用空针管抽气后再用封口膜封闭，尽可能减少空气与染液接触，避免切片上高电子密度沉积物。所述载网架主体6上设有两排载网孔8，每排10个，载网孔8内周边设有载网孔凹 槽9，载网孔凹槽9深度为O. 2mm,与载网厚度一致，载网孔8外径3. Imm,便于置入载网和粘胶，内径2. 5mm，与载网有效内径一致，内外孔半径之差为O. 3mm，如图5所示。所述移网凹槽11的深度为O. 2mm,宽度为I. 5_。所述中央凹槽10的宽度为5mm，深度为O. 2mm,与载网孔凹槽9和移网凹槽11 一致，以使置入后的载网与粘网胶在一个平面上。所述染色盒5由透明医用塑料制作，在插入载网架4后可以看到载网孔8和载网，注入液体后液面可视。使用时，注入O. 5ml液体液面覆盖第二列载网，注入Iml液体液面覆盖第五列载网，注入I. 5ml液体液面覆盖第八列载网，注入2ml液体液面覆盖第十列载网。根据末位载网对应的ml数值，估算并抽取适量液体。所述染色盒5底端的液体排出口 12 口径采用与普通输液器相同的结构尺寸，便于接入市售输液器(带有液体流量调节器)。本实用新型的电镜超薄切片一次性染色套装，在使用时，还需要有以下配套的组件接在染色盒的液体排出口上的输液器，接在输液器下端的废液收集瓶(可采用废弃的500ml的蒸馏水瓶等)，以及用于将载网固定在载网架上的粘网胶或双面胶带(5mm宽)。本实用新型用于超薄切片染色，使用时，步骤如下(I)用牙签沾取微量粘网胶(低倍率拍照可使用5_宽普通双面胶带)，滴涂在载网孔凹槽一侧；(2)用专用镊子把载网置入载网孔凹槽内(切片面朝上)，按标示L-R和1-10排列顺序逐一置入，然后把载网架插入染色盒；(3)根据末位载网对应的染液ml数，用I号注射器吸取铀染液O. 5ml 2ml，从I号针孔注入染色盒，使液面稍没过末位载网，染色20分钟；(4)排出废染液放开输液器上的液体流量调节器，把铀染液排入废液收集瓶；(5)闭合液体调节器，用2号注射器吸取双蒸水2ml，从2号针孔注入，再放开调节器；循环往复浸洗干净；(6)用3号注射器吸取铅染液(量同铀染液)，从染色器3号针孔注入染色器，之后与上述铀染液操作方法相同。为减少染液接触空气，注入铅染液后，随即用空针管抽气后封闭针孔。[0038] (7)放开液体流量调节器，浙净水，取出载网架，待自然干燥后TEM观察。`
权利要求1.一种电镜超薄切片一次性染色套装，其特征在于包括载网架和染色盒，其中，载网架由载网架主体和载网架盖构成，载网架主体连接在载网架盖一侧，载网架盖另一侧设有至少两个注液孔，载网架主体上设有两排载网孔，载网孔内周边设有载网孔凹槽，两排载网孔之间设有中央凹槽，每个载网孔外侧设有移网凹槽；载网架主体伸入染色盒内，染色盒底端设有液体排出口。
2.根据权利要求I所述的一种电镜超薄切片一次性染色套装，其特征在于所述载网架盖一侧设有三个注液孔。
3.根据权利要求I所述的一种电镜超薄切片一次性染色套装，其特征在于所述载网架主体上设有两排载网孔，每排10个，载网孔内周边设有载网孔凹槽，载网孔凹槽深度为.O.2mm,载网孔外径3. Imm,内径2. 5mm,内外半径之差O. 3mm。
4.根据权利要求I所述的一种电镜超薄切片一次性染色套装，其特征在于所述移网凹槽的深度为O. 2mm,宽度为I. 5mm。
5.根据权利要求I所述的一种电镜超薄切片一次性染色套装，其特征在于所述中央凹槽的宽度为5mm，深度为O. 2mm。
6.根据权利要求I 5中任一项所述的一种电镜超薄切片一次性染色套装，其特征在于还包括以下组件接在染色盒的液体排出口上的输液器，接在输液器下端的废液收集瓶，以及用于将载网固定在载网架上的粘网胶或双面胶带。
专利摘要本实用新型公开了一种电镜超薄切片一次性染色套装，用于超薄切片染色。其吸纳了同类产品的优点，弥补了不足，使染色过程更方便、安全、可靠，节省染色剂，价格比同类进口小型染色套装降低几十倍，实现了染色套装国产化，结果为包括载网架和染色盒，其中，载网架由载网架主体和载网架盖构成，载网架主体连接在载网架盖一侧，载网架盖另一侧设有至少两个注液孔，载网架主体上设有两排载网孔，载网孔内周边设有载网孔凹槽，两排载网孔之间设有中央凹槽，每个载网孔外侧设有移网凹槽；载网架主体伸入染色盒内，染色盒底端设有液体排出口。本实用新型一次最多染20个载网，如进行大宗样品染色，可同时用多个本实用新型的套装，省时、省力、价廉。
文档编号G01N1/31GK202735148SQ20122040208
公开日2013年2月13日 申请日期2012年8月14日 优先权日2012年8月14日
发明者李峥, 郭新勇, 李虹, 李伯勤 申请人:李峥, 郭新勇, 李虹, 李伯勤