专利名称：铁蛋白体外诊断试纸条的制作方法
技术领域：
铁蛋白体外诊断试纸条技术领域[0001]本实用新型属于医学免疫体外诊断领域，具体涉及一种铁蛋白体外诊断试纸条。
技术背景[0002]铁蛋白是一种水溶性铁贮存蛋白，由蛋白质外壳即去铁蛋白和铁核心形成的复合物。正常人血清中含有少量铁蛋白，一般正常均值男性约80 — 130 μ g/L (80 -130ng/ml) 女性约35 - 55 μ g/L (35-55ng/ml)。当人机体出现疾病时，血清中的铁蛋白将会异常改变。研究表明血清铁蛋白升高的原因是铁蛋白的来源增加或存在清除障碍。它可以作为肝癌、肺癌、胰癌、白血病等疾病诊断的标志物。[0003]20世纪70年代已经开始对铁蛋白进行检测。目前，铁蛋白作为标志物已经用于疾病诊断，主要的诊断方法有胶体金法、酶联免疫ELISA、化学发光法。中国专利 CN201348633Y采用免疫层析胶体金技术，通过肉眼观察检测线的有无来对铁蛋白浓度进行半定量检测，达不到定量检测要求。中国专利CN201302571Y结合了 ELISA进行检测，利用磁力检测仪15_25min测定数据，然后根据预先测定并设定的公式计算出样品中铁蛋白的含量，可实现铁蛋白的定量检测，但是该试剂盒检测时间长，不利于临床推广。发明内容[0004]本实用新型的目的是提供一种操作简便、灵敏度高、检测时间短且能定量检测铁蛋白体外诊断试纸条。[0005]本实用新型的技术方案为一种铁蛋白体外诊断试纸条由底衬上的包被相互平行的检测线和质控线的硝酸纤维膜、包被荧光标记的铁蛋白抗体偶联物的结合垫、样品垫、吸水纸组成，检测线上包被铁蛋白抗体，质控线上包被兔抗鼠IgG抗体。[0006]所述的荧光标记的铁蛋白抗体偶联物由铁蛋白、生物素、荧光、链霉亲和素、胶乳微球组成。[0007]所述的胶乳微球粒径为100nm-200nm,优选192nm。[0008]所述的荧光为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、荧光素 Cy5、藻红蛋白中的一种。[0009]所述的铁蛋白体外诊断试纸条标记和包被用的抗体均为抗人血清铁蛋白抗体，为配对的单克隆抗体或单抗-多抗。[0010]一种铁蛋白体外诊断试纸条的制备方法包括如下步骤[0011]I)包被荧光胶乳微球标记铁蛋白抗体结合垫的制备[0012]a.将荧光素与链霉亲和素混合得到荧光素标记链霉亲和素，再与胶乳微球结合得到链霉亲和素荧光胶乳微球；[0013]b.将生物素与铁蛋白抗体结合，制备得到生物素化铁蛋白抗体；[0014]c.将步骤a所得的链霉亲和素荧光胶乳微球和步骤b所得的生物素化铁蛋白抗体混合，即得荧光标记的铁蛋白抗体偶联物；[0015]d.将步骤c所得的荧光标记的铁蛋白抗体偶联物喷涂在结合垫上。[0016]2)硝酸纤维素膜的制备[0017]用包被缓冲液分别稀释铁蛋白抗体和兔抗鼠IgG抗体，并将稀释后的两种抗体分别喷于硝酸纤维素膜上，两种抗体渗入硝酸纤维素膜后分别形成包被铁蛋白抗体的检测线和包被兔抗鼠IgG抗体的质控线。[0018]3)在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸得到试纸板，按照要求切割成适当宽度的试纸条。[0019]本实用新型与现有技术相比，具有如下优点[0020]I)本实用新型通过对试纸条上荧光信号的强弱分析，并结合荧光免疫分析仪的处理分析，可以实现样品中铁蛋白的定量检测；[0021]2)本实用新型可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速检测，检测时间只需 5-8min,易于保存和在基层医院的推广使用。
[0022]图I为本实用新型所述的铁蛋白体外诊断试纸条结构示意图；[0023]其中，图I :1、底衬；2、硝酸纤维素膜；3、结合垫；4、样品垫；5、吸水纸；6、检测线； 7、质控线。
具体实施方式
[0024]
以下结合附图和具体实施例来详细说明本实用新型。[0025]一种铁蛋白体外诊断试纸条由底衬I上的包被相互平行的检测线6和质控线7的硝酸纤维膜2、包被荧光标记的铁蛋白抗体偶联物的结合垫3、样品垫4、吸水纸5组成，检测线6上包被铁蛋白抗体，质控线7上包被兔抗鼠IgG抗体。[0026]所述的荧光标记的铁蛋白抗体偶联物由铁蛋白、生物素、荧光、链霉亲和素、胶乳微球组成。[0027]所述的胶乳微球粒径为100nm-200nm,优选192nm。[0028]所述的荧光标记为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、荧光素Cy5、藻红蛋白中的一种。[0029]所述的铁蛋白体外诊断试纸条标记和包被用的抗体均为抗人血清铁蛋白抗体，为配对的单克隆抗体或单抗-多抗。[0030]一种铁蛋白体外诊断试纸条的制备方法包括如下步骤[0031]包被荧光标记的铁蛋白抗体偶联物的结合垫3的制备方法如下[0032]I)将荧光素与链霉亲和素按照4:1 3:1的比例混合得到荧光素标记链霉亲和素，再将其与20 mg/ml的胶乳微球按照4:1 3:1的比例混合得到特殊的荧光胶乳微球；[0033]2)将铁蛋白抗体用O. I mol/L、pH6. 4磷酸钠缓冲液稀释至I mg/ml,交互用O. I mol/L、pH6. 4磷酸钠缓冲液对铁蛋白抗体充分透析；用Iml DMSO溶解Img的NHSB，得到 NHSB溶液；向上述Iml铁蛋白抗体溶液加入20 μ L NHSB溶液，室温搅拌2_4 h，继续室温搅拌10 min，然后用20 mmol/L、pH7. 2 PBS缓冲液透析，即得生物素化铁蛋白抗体；[0034]3)将荧光胶乳微球和生物素化铁蛋白抗体混合反应30 min后离心，沉淀用pH7. 2体积，得到所述的荧光标记的铁蛋白抗体偶联物；[0035]4)将所述的荧光标记的铁蛋白抗体偶联物按2. O μ L/cm3的用量喷在玻璃纤维素膜上得到结合垫3。[0036]硝酸纤维素膜2的制备[0037]I)铁蛋白抗体检测线6的制备将铁蛋白抗体按2 mg/ml的浓度，蠕动泵授液量O.4 ml/min,划线速度50 m/20min,在干燥箱内20。(!'鼓风干燥12 h ；[0038]2)质控线7的制备将兔抗鼠IgG抗体按8 mg/ml的浓度，蠕动泵授液量O. 4 ml/ min,划线速度50 m/20min,在硝酸纤维素膜2上划线，该线与检测线平行，放入干燥箱内20 °〇鼓风干燥12 h ；[0039]3)用将含1%BSA、1%蔗糖、O. 025 mol/L、pH7. 5的PBS封闭液将含有检测线6和质控线7的硝酸纤维素膜2于37 °C封闭60 min，取出后置37 °C下烘干处理2 h，封袋备用。[0040]试纸条组装在底衬I上顺次相互搭接地粘贴样品垫4、结合垫3、硝酸纤维素膜2、吸水纸5，按照要求切割成适当宽度的试纸条。[0041]检测方法为将被检测血清、全血滴加80-100 μ L于样品垫4上，进行免疫反应， 时间5-8 min ;反应结束后，将试纸条放于专门的荧光信号读取仪器(荧光免疫分析仪)中， 读取荧光信号的大小，进行定量测定，读出血清铁蛋白的含量。
权利要求1.一种铁蛋白体外诊断试纸条，其特征在于由底衬(I)上包被相互平行的检测线(6)和质控线(7)的硝酸纤维膜(2)、包被荧光标记的铁蛋白抗体偶联物的结合垫(3)、样品垫(4 )、吸水纸(5 )组成，检测线(6 )上包被铁蛋白抗体，质控线(7 )上包被兔抗鼠I gG抗体。
2.根据权利要求I所述铁蛋白体外诊断试纸条，其特征在于所述的包被荧光标记的铁蛋白抗体偶联物的结合垫(3)的荧光为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、荧光素Cy5、藻红蛋白中的一种。
专利摘要本实用新型公开了一种铁蛋白体外诊断试纸条，属于医学免疫体外诊断领域。该诊断试纸条由底衬上包被相互平行的检测线和质控线的硝酸纤维膜、包被荧光标记的铁蛋白抗体偶联物的结合垫、样品垫、吸水纸组成，检测线上包被铁蛋白抗体，质控线上包被兔抗鼠IgG抗体。本实用新型实现了定量检测，同时操作方便、检测速度快。
文档编号G01N33/68GK202814987SQ20122042032
公开日2013年3月20日 申请日期2012年8月23日 优先权日2012年8月23日
发明者苏恩本, 颜彬, 黄力, 陈伟, 沈小娟 申请人:南京基蛋生物科技有限公司