专利名称：微量白蛋白免疫层析检测试剂盒的制作方法
技术领域：
微量白蛋白免疫层析检测试剂盒技术领域[0001]本实用新型涉及临床医学检验领域，具体涉及一种基于上转发光技术免疫层析快速、定量检测微量白蛋白试剂盒。
背景技术：
[0002]上转发光颗粒(Up-Converting Phosphor, UCP)是一种可对能量进行上转的稀土金属合成物，即UCP可吸收低能量的(长波长)红外光，但却发出高能量的(短波长)可见光。UCP是由几种稀土金属元素参杂于某些晶体的晶格中构成的。在这种材料中有三种主要的成分主基质、吸收子和发射子。作为主基质的晶体材料有氧硫化物(如Y202S、Gd02S、 La2O2S等)、氟化物(如YF3、GdF3、LaF3等)、镓酸盐(如YGaO3'Y3Ga5O12等)以及硅酸盐(YSi205、 YSi3O7等)等；常用作吸收子的稀土金属离子有镱离子(Yb3+)、铒离子(Er3+)、钐离子(Sm3+) 等；常用作发射子的稀土金属离子有铒离子(Er3+)、钦离子(Ho3+)、铥离子(Tm3+)、铽离子 (Tb3+)等。吸收子和发射子这一离子对在主基质晶格内适宜的空间取向和距离，是产生上转发光的基础。[0003]上转发光颗粒UCP所具有的这种独特光学特性，使其在床边快速诊断领域发挥巨大的潜能[0004](I)高度的灵敏性独有的上转发光现象确保了 UCP在检测过程中不存在来自外界的背景干扰；[0005](2)高度的稳定性UCP的发光现象是产生于结构内部的纯粹物理过程，因而完全避免了来自检测样品腐蚀及自身衰变导致的发光淬灭；[0006](3)高度灵活性UCP具有的可自由组合的多样化特征光谱，使其适用于多重分析；[0007](4)高度的安全性无机惰性、红外光激发、可见光发射使得基于UCP检测对于检测者、被检测样品、环境均无危害。[0008]微量白蛋白(又名微量尿白蛋白，Micoralbuminuria, MAU)是指尿中出现的微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白，在正常生理条件下尿液中也会出现极少微量白蛋白，排泄量一般在30mg/天(或20mg/L)之内。人尿液中的白蛋白达到在30_300mg/天或 20-200mg/L浓度称为微量白蛋白，白蛋白浓度大于300mg/天或200mg/L时称大量白蛋白。[0009]微量白蛋白(MAU)的非正常出现，通常被认为是肾功能衰竭、糖尿病和心血管疾病并发症等重要临床标志之一。因此，尿液中白蛋白存在水平的检测对肾病、糖尿病和心血管病的早期诊断、早期治疗和减小风险由重要的参考价值和临床意义。[0010]目前，临床检测微量白蛋白诊断早期肾损害的方法有放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附实验法(ELISA)等，这些检查较为繁琐、历时较长、费用较高，不利于临床医生的及时诊断和疗效观察。[0011]中国专利申请号200810305085. 9公开了一种半定量检测尿微量白蛋白胶体硒试纸，该试纸条能够检测含量不低于20μ g/ml尿液中白蛋白。此法虽然简单，但是准确度不高、且不能定量检测。中国专利申请号201110458548. 6公开了微量尿白蛋白胶体金检测试剂盒及其制备工艺，具体描述了该试剂盒的制备，还说明了试剂盒检测灵敏度15 μ g/ml。但是胶体金免疫层析存在以下缺陷[0012]⑴胶体金标记过程是静电吸附过程，是一种物理过程，故在液相中稳定性较差， 往往造成已标记上的蛋白分子又再次脱落；[0013](2)只有当金颗粒集聚到一定量时，人肉眼才能观察到紫红色的条带，且该颜色与背景对比度不大，从而限制了检测灵敏度。[0014]因此，应用上转发光免疫分析技术开发微量白蛋白快速检测试剂应用于床边快速诊断具有重要的临床应用价值。发明内容[0015]为了克服上述现有技术中的不足，本实用新型提供一种基于上转发光法的测定微量白蛋白免疫层析试剂盒，具有准确、快速、定量检测等特点。[0016]本实用新型的试纸条检测原理是通过一系列表面修饰与活化，上转发光颗粒UCP 可与生物活性分子相结合，利用UPT生物传感器，对在层析过程中通过特异免疫反应结合于检测区与质控区上的UCP颗粒进行扫描分析，从而利用由UPT快速定量检验系统实现精确定量或定性。[0017]本实用新型的提供的技术方案是[0018]一种微量白蛋白免疫层析检测试剂盒，包括在底衬上依次粘贴的样品垫、结合垫、 分析膜和吸水纸，所述结合垫上包被有上转发光UCP颗粒标记的微量白蛋白抗体I，所述分析膜上设有平行的检测区和质控区，所述检测区包被有微量白蛋白抗体II或微量白蛋白抗原，所述质控区包被有羊抗鼠IgG。[0019]所述上转发光UCP颗粒的直径为50_350nm。[0020]所述微量白蛋白抗体I和微量白蛋白抗体II为配对单抗或单抗-多抗配对。[0021]所述微量白蛋白抗原为人微量白蛋白。[0022]本实用新型微量白蛋白免疫层析检测试剂盒的制备方法为[0023](I)结合垫制备将UCP-微量白蛋白抗体I用ρΗ7· 2的O. 03Μ PBS缓冲液(含有 2%BSA和2%海藻糖)稀释至终浓度为2mg/ml，充分混匀后喷于结合垫上，37°C烘干备用；[0024](2)分析膜制备用点样仪在分析膜上不同位置分别喷点微量白蛋白抗体II (或微量白蛋白抗原)和羊抗鼠IgG抗体，作为检测区和质控区，37°C烘干备用；[0025](3)样品垫制备将纤维素膜放入pH 7. 2的O. 03M PBS缓冲液(含5mg/mlBSA和 O. l%TritonX-100)中浸泡30min，然后37°C烘干备用；[0026]⑷试剂盒组装将样品垫、结合垫、分析膜和吸水纸依次粘贴在底衬上，切割成指定宽度试纸条即可。[0027]与现有技术相比，本实用新型具有以下有益技术效果[0028]本实用新型检测试剂盒基于转发光技术与免疫层析技术结合在定量检测微量白蛋白的应用，使得微量白蛋白检测无本底干扰、检测结果更加灵敏；与现有技术相比，该试剂盒稳定性更高。
[0029]图I微量白蛋白免疫层析检测试剂盒结构示意图。[0030]其中，I、底衬；2、样品垫；3、结合垫；4、分析膜；5、吸水垫；6、检测区；7、质控区。
具体实施方式
[0031]
以下结合附图对本实用新型进一步详细描述，所述是对本实用新型的解释而不是限定。[0032]如图I所示，一种微量白蛋白免疫层析检测试剂盒，包括在底衬I上依次粘贴的样品垫2、结合垫3、分析膜4和吸水纸5，所述结合垫3上包被有上转发光UCP颗粒标记的微量白蛋白抗体I，所述分析膜4上设有平行的检测区6和质控区7，所述检测区6包被有微量白蛋白抗体II或微量白蛋白抗原，所述质控区7包被有羊抗鼠IgG。[0033]所述上转发光UCP颗粒的直径为50_350nm。[0034]所述微量白蛋白抗体I和微量白蛋白抗体II为配对单抗或单抗-多抗配对。[0035]所述微量白蛋白抗原为人微量白蛋白。[0036]实施例I本实用新型微量白蛋白免疫层析检测试剂盒的制备[0037]方法I :[0038]⑴结合垫3制备将50nmUCP颗粒与微量白蛋白单克隆抗体I共价偶联得到 UCP-微量白蛋白单克隆抗体I，然后用PH7. 2的O. 03M PBS缓冲液(含有2%BSA和2%海藻糖)稀释至终浓度为2mg/ml，充分混匀后喷于结合垫上，37°C烘干备用；[0039](2)分析膜4制备以pH 7. 8的PBS缓冲液将微量白蛋白单克隆抗体II或微量白蛋白多克隆抗体和兔抗鼠IgG抗体分别配置成O. 2mg/ml和O. 3mg/ml的溶液,再用喷膜仪在硝酸纤维素膜上以I μ 1/cm的量分别划线作为检测区6和质控区7，37°C烘干备用；[0040](3)样品垫2制备将纤维素膜放入pH 7. 2的O. 03M PBS缓冲液(含5mg/mlBSA和 O. l%TritonX-100)中浸泡30min，然后37°C烘干备用；[0041]⑷试剂盒组装将样品垫2、结合垫3、分析膜4和吸水纸5依次粘贴在底衬I上， 切割成指定宽度试纸条即可。[0042]方法2:[0043](I)结合垫3制备将350nmUCP颗粒与微量白蛋白单克隆抗体I共价偶联得到 UCP-微量白蛋白单克隆抗体I，然后用PH7. 2的O. 03M PBS缓冲液(含有2%BSA和2%海藻糖)稀释至终浓度为2mg/ml，充分混匀后喷于结合垫上，37°C烘干备用；[0044]⑵分析膜4制备以pH 7. 8的PBS缓冲液将人微量白蛋白和兔抗鼠IgG抗体分别配置成O. 2mg/ml和O. 3mg/ml的溶液，再用喷膜仪在硝酸纤维素膜上以I μ 1/cm的量分别划线作为检测区6和质控区7，37°C烘干备用；[0045](3)样品垫2制备将纤维素膜放入pH 7. 2的O. 03M PBS缓冲液(含5mg/mlBSA和 O. l%TritonX-100)中浸泡30min，然后37°C烘干备用；[0046](4)试剂盒组装将样品垫2、结合垫3、分析膜4和吸水纸5依次粘贴在底衬I上， 切割成指定宽度试纸条即可。[0047]实施例2样品检测[0048]将被检测尿液滴加100-120 μ I于样品垫2上，溶液将溶解结合垫3上标记好的UCP颗粒，并在硝酸纤维素膜4上发生层析，然后在5-10min内用上UPT生物传感器对试纸条进行扫描，根据信号得出待测样品中的微量白蛋白的含量进行定量或定性检测。
权利要求1.一种微量白蛋白免疫层析检测试剂盒，包括在底衬(I)上依次粘贴的样品垫(2)、结合垫(3 )、分析膜(4 )和吸水纸(5 )，其特征在于所述结合垫(3 )上包被有上转发光UCP颗粒标记的微量白蛋白抗体I，所述分析膜(4)上设有平行的检测区(6)和质控区(7)，所述检测区(6)包被有微量白蛋白抗体II或微量白蛋白抗原，所述质控区(7)包被有羊抗鼠IgG。
2.根据权利要求I所述微量白蛋白免疫层析检测试剂盒，其特征在于所述上转发光UCP颗粒的直径为50-350nm。
专利摘要本实用新型公开了一种微量白蛋白免疫层析检测试剂盒，属于临床医学检测领域。该试剂盒包括在底衬(1)上依次粘贴的样品垫(2)、结合垫(3)、分析膜(4)和吸水纸(5)，所述结合垫(3)上包被有上转发光UCP颗粒标记的微量白蛋白抗体I，所述分析膜(4)上设有平行的检测区(6)和质控区(7)，所述检测区(6)包被有微量白蛋白抗体II或微量白蛋白抗原，所述质控区(7)包被有羊抗鼠IgG。本试剂盒采用上转发光技术与免疫技术结合，具有准确、快速、定量检测等特点。
文档编号G01N33/68GK202814992SQ201220495168
公开日2013年3月20日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者苏恩本, 颜彬, 周超, 王勇 申请人:南京基蛋生物科技有限公司