一种液相层析的洗脱方法及其检验设备的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种液相层析检测糖化血红蛋白的洗脱方法及其检验设备，包括以下几个步骤：步骤(1)：配置三种离子浓度的洗脱液；步骤(2)：将所述三种离子浓度的洗脱液对吸附有待测样本的离子交换树脂进行洗脱；步骤(3)：对所述被洗脱后的液体进行色谱分析，确定被洗脱成份的含量；步骤(4)：确定糖化血红蛋白HbA1c的浓度。本发明不但解决了两种离子浓度的洗脱液检测时易交叉污染的问题，而且相对于四种离子浓度的洗脱液而言，简化了检验设备的结构和检测程序、提高了设备运行的可靠性、降低了设备成本，大大提高了检测的准确性和稳定性。
【专利说明】一种液相层析的洗脱方法及其检验设备
【技术领域】
[0001]本发明涉及液相层析检测领域，尤其涉及一种低压液相离子交换层析检测糖化血红蛋白的洗脱方法及其检验设备。
【背景技术】
[0002]人体血液中的糖化血红蛋白最主要的亚组分HbAlc的浓度直接反映糖尿病人三个月的平均血糖水平，该指标是临床作为糖尿病人的筛查、诊断、治疗的重要依据。
[0003]目前临床上采用国际公认的金标准液相层析法来检测糖化血红蛋白HbAlc，其中高效液相色谱分析法(HPLC)只采用两种离子浓度的洗脱方法，即使用一种高离子浓度洗脱液和一种低浓度洗脱液；通过机内设置一个机械式的六通旋转分配阀来分配生成不同离子浓度的洗脱液，以对样本中的不同糖化血红蛋白组分进行洗脱；由于采用机内配比不同浓度洗脱液，带来仪器的复杂程度增高，故障率增加，洗脱液的交叉污染严重，仪器的制造、维修、使用的成本也高。而低压液相色谱分析法有采用两种离子浓度的洗脱方法和四种离子浓度的洗脱方法；即分别采用两种和四种不同离子浓度的洗脱液；这两种洗脱方法均是通过一个电子隔离阀单独控制一种离子浓度的洗脱液的方式对样本不同糖化血红蛋白组分进行洗脱；两种洗脱液洗脱分离效果不彻底，直接影响检测结果的准确性；而四种洗脱液分离效果较两种洗脱液的好，但是仪器的复杂程度、故障率、仪器的制造、维修和使用的成本都会随之增加。
【发明内容】
[0004]为了解决以上技术问题，本发明提供了一种液相层析检测糖化血红蛋白的洗脱方法及其检验设备，可减少洗脱液交叉污染、简化检验设备的结构和检测程序、提高设备运行可靠性、降低设备成本。
[0005]本发明提供一种液相层析的洗脱方法，包括以下几个步骤:
[0006]步骤(I):配置三种离子浓度的洗脱液；
[0007]步骤(2):将所述三种离子浓度的洗脱液对吸附有待测样本的离子交换树脂进行洗脱；
[0008]步骤(3):对所述被洗脱后的液体进行色谱分析，确定被洗脱成份的含量；
[0009]步骤⑷:确定糖化血红蛋白HbAlc的浓度。
[0010]本发明还提供了一种用于液相层析检测糖化血红蛋白的洗脱方法，所述洗脱液包括:
[0011]用于树脂清洗、平衡和洗脱糖化血红蛋白HbAla和HbAlb的洗脱液A，所述洗脱液 A 按重量百分比，包括:NaH2P04 0.178-0.186 %, Na2HP040.056-0.076 %, NaCl0.116-0.120%, KCl 0.024-0.026%, NaN3 0.039-0.041%，余量为去离子水；
[0012]用于洗脱糖化血红蛋白HbAlc的洗脱液B，所述洗脱液B按重量百分比，包括:NaH2P04 0.148-0.168 %, Na2HP04 0.054-0.060 %、NaCl 0.584-0.596 %、KCl0.040-0.044%,NaN3 0.039-0.041%、余量为去离子水；
[0013]用于洗脱非糖化血红蛋白HbAO及树脂的再生的洗脱液C，所述洗脱液C按重量百分比，包括:NaH2P04 0.141-0.143%,Na2HP04 0.082-0.088%,NaCl 1.479-1.619%,NaN30.039-0.041 %、余量为去尚子水。
[0014]本发明还提供了一种用于液相层析检测糖化血红蛋白的检验设备，包括:
[0015]控制装置，用于发出指令控制采样系统；
[0016]采样装置，开始进行样本采样，并将采样样本放置到混育杯中进行溶血；
[0017]蠕动泵，用于提供管路中液体流动所需动力；
[0018]电子隔离阀，用于切换待测样本、洗脱液A、洗脱液B和洗脱液C ;
[0019]检测装置，包括光度计、层析柱和比色池，当样本通过层析柱进入比色池后，光度计进行电压采样。
[0020]一种采用该设备的用于液相层析检测糖化血红蛋白的洗脱方法，包括以下几个步骤:
[0021]步骤(I):控制装置发出指令控制采样装置开始进行采样，放置到混育杯中进行溶血；
[0022]步骤(2):控制装置发出指令使蠕动泵运转，并对电子隔离阀发出指令，分别切换样本、洗脱液A、洗脱液B和洗脱液C ；
[0023]步骤(3):控制装置实时对层析柱的温度进行监视控制，当样本通过层析柱进入比色池后，光度计进行电压采样并返回给控制装置。
[0024]优选的，还包括:所有的参数在显示屏上显示，当完成测试后，控制装置通过电压值的计算最终得出测量结果。
[0025]优选的，蠕动泵包括第一蠕动泵和第二蠕动泵，所述第一蠕动泵的转速大于所述第二蠕动泵的转速。
[0026]本发明的有益效果是:本发明不但解决了两种离子浓度的洗脱液检验时易交叉污染的问题，而且相对于四种离子浓度的洗脱液而言，简化了检验设备的结构和检测程序、提高了设备运行可靠性、降低了设备成本，大大提高了检测的准确性和稳定性。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1为本发明提供的一种液相层析检测糖化血红蛋白的检验设备的结构示意图。
[0028]图2为本发明方法实施例所采用的检验设备的原理图。
【具体实施方式】
[0029]下面结合附图，对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明:
[0030]实施例1
[0031]在图1所示的结构示意图中，设置三种不同离子浓度的洗脱液，S卩4洗脱液1、8洗脱液2、C洗脱液3，三种洗脱液容器的出口管路分别由各自的电子隔离阀14控制，并可分别在第一蠕动泵4、第二蠕动泵7的作用下经过吸附有待检样本的树脂5，洗脱后进入比色池7进行色谱分析，最终得出糖化血红蛋白的浓度。
[0032]在图2所示的检验设备原理图中，电源11给整个系统进行供电，控制装置8检测到操作者发出的开始测试指令后，进样装置10开始进行采样，放置到混育杯17进行溶血，然后控制装置8发出指令使第一蠕动泵4和第二蠕动泵7按照同一方向进行运转，其中第一蠕动泵4的转速大于第二蠕动栗7的转速，然后控制装置8对电子隔离阀14发出指令，分别切换待测样本、A洗脱液1、B洗脱液2、C洗脱液3，控制装置8实时对层析柱5的温度进行监视控制，当样本通过层析柱5进入比色池6后，光度计12进行电压采样并返回给控制装置8，所有的参数在显示屏13上显示。当完成测试后，控制装置8通过电压值的计算最终得出测量结果。
[0033]实施例2
[0034]1.配置相应的洗脱液如表1所示:
[0035]表1
[0036]
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【权利要求】
1.一种液相层析的洗脱方法，主要用于检测糖化血红蛋白HbAlc的浓度，其特征在于，包括以下几个步骤: 步骤(I):配置三种离子浓度的洗脱液； 步骤(2):将所述三种离子浓度的洗脱液对吸附有待测样本的离子交换树脂进行洗脱； 步骤(3):对所述被洗脱后的液体进行色谱分析，确定被洗脱成份的含量； 步骤(4):确定糖化血红蛋白HbAlc的浓度。
2.如权利要求1所述的用于液相层析的洗脱方法，其特征在于，所述洗脱液包括: 用于树脂清洗、平衡和洗脱糖化血红蛋白HbAla和HbAlb的洗脱液A，所述洗脱液 A 按重量百分比，包括:NaH2P04 0.178-0.186 %, Na2HP040.056-0.076 %, NaCl0.116-0.120%, KCl 0.024-0.026%, NaN3 0.039-0.041 %，余量为去离子水; 用于洗脱糖化血红蛋白HbAlc的洗脱液B，所述洗脱液B按重量百分比，包括:NaH2P040.148-0.168%,Na2HP04 0.054-0.060%,NaCl 0.584-0.596%,KCl 0.040-0.044%,NaN30.039-0.041 %、余量为去尚子水； 用于洗脱非糖化血红蛋白HbAO及树脂的再生的洗脱液C，所述洗脱液C按重量百分比，包括:NaH2P04 0.141-0.143%, Na2HP04 0.082-0.088%, NaCl1.479-1.619%, NaN30.039-0.041 %、余量为去尚子水。
3.一种采用权利要求1所述方法的检验设备，包括: 采样装置，开始进行采样，放置到混育杯中进行溶血； 控制装置，用于发出指令控制所述采样装置； 蠕动泵，用于提供管路中液体流动所需动力； 电子隔离阀，用于切换待测样本、洗脱液A、洗脱液B和洗脱液C ； 检测装置，包括光度计、层析柱和比色池，当样本通过层析柱进入比色池后，光度计进行电压米样。
4.一种采用如权利要求3所述设备的洗脱方法，其特征在于，包括以下几个步骤: 步骤(I):控制装置发出指令控制采样装置开始进行样本采样，并将采样样本放置到混育杯中进行溶血； 步骤(2):控制装置发出指令使蠕动泵运转，并对电子隔离阀发出指令，分别切换待测样本、洗脱液A、洗脱液B和洗脱液C ； 步骤(3):控制装置实时对层析柱的温度进行监视控制，当样本通过层析柱进入比色池后，光度计进行电压采样并返回给控制装置。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,还包括:所有的参数在显示屏上显示；当完成测试后，控制装置通过电压值的计算最终得出测量结果。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，蠕动泵包括第一蠕动泵和第二蠕动泵，所述第一蠕动泵的转速大于第二蠕动泵的转速。
【文档编号】G01N30/74GK103969375SQ201310031435
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年1月29日 优先权日:2013年1月29日
【发明者】徐岩, 刘先成, 彭国庆, 胡文雍, 梅林祥 申请人:深圳普门科技有限公司