专利名称：一种测定养胃颗粒中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂的含量测定方法，具体涉及一种测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法。背景技术：
养胃颗粒的处方组成为炙黄芪500g、党参333g、白芍500g、甘草281g、陈皮250g、香附500g、乌梅167g、山药500g。其制法为陈皮提取挥发油，药渣备用；其余七味药加水煎煮二次，第一次2小时，第二次I小时，第二次煎煮时加入上述陈皮药渣，滤过，合并滤液，静置，取上清液浓缩至相对密度1.16^1.19 (20°C)的清膏，加蔗糖粉446.7g及适量糊精，制成颗粒，干燥，喷入陈皮挥发油，混匀，制成3000g ;或清膏加适量的糊精制成颗粒，干燥，喷入陈皮挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。本品为棕黄色至棕色的颗粒，气香，味甜、微苦；或味微苦(无蔗糖)。功能与主治为:养胃健脾，理气和中。用于脾虚气滞所致的胃痛，症见胃脘不舒、胀满疼痛、嗳气食少；慢性萎缩性胃炎见上述证候者。
养胃颗粒在《中华人民共和国药典》2010年版一部中含量测定项下只是测定了白芍中的芍药苷这一个成 分，难以反应出整个药品的质量，有一定的不足。
发明内容
本发明针对目前养胃颗粒含量测定方法的不足，提供了一种更加合理有效的含量测定方法用于产品的质量控制，在测定白芍中芍药苷含量的基础上，增加测定陈皮中的橙皮苷含量和甘草中的甘草酸含量。
本发明采用高效液相色谱法，在同一色谱条件下，采用流动相梯度洗脱，使用DAD紫外检测器，在不同波长处同时测定芍药苷、橙皮苷、甘草酸的含量。
本发明采用的技术方案是:
本发明提供一种测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，所述方法为:(I)待测样品:将养胃颗粒研细混匀后加入体积浓度(Γ100%乙醇水溶液a或体积浓度50 100%甲醇水溶液a中制成混合液a，将混合液a在超声频率25KHz、超声功率8(Tl00W的条件下超声处理10 30分钟，放冷，取超声处理后的混合液a加入体积浓度(Γ100%乙醇水溶液b或体积浓度5(Γ100%甲醇水溶液b制成混合液b，使混合液b与混合液a质量相同，将混合液b摇匀、过滤，取滤液，获得待测样品；所述乙醇水溶液b与乙醇水溶液a相同，所述甲醇水溶液b与甲醇水溶液a相同；(2)含量测定:将步骤(I)制备的待测样品注入高效液相色谱仪进行测试，获得待测样品的高效液相色谱谱图；将芍药苷标准品用体积浓度(Γ100%乙醇水溶液或体积浓度5(Γ100%甲醇水溶液配制成芍药苷标准品溶液，取不同体积的芍药苷标准品溶液在同样条件下(与待测样品测试条件相同)进行测试，获得芍药苷标准品溶液的高效液相色谱谱图，以芍药苷标准品溶液的高效液相色谱谱图中吸收峰的峰面积为横坐标，以芍药苷准品溶液进样量为纵坐标制作芍药苷标准曲线，橙皮苷标准曲线和甘草酸铵标准曲线的制作同芍药苷标准曲线，根据待测样品的高效液相色谱谱图中相应吸收峰的峰面积及各个标准品的标准曲线计算待测样品中芍药苷、橙皮苷和甘草酸(甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207)含量；高效液相色谱仪测试条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为(TlOmin时流动相A为85%，l(T30min时流动相A为85 80%，3(T65min时流动相A为80 50%，分别在230nm、283nm和252nm处检测吸收峰。
进一步，步骤(I)所述乙醇水溶液a为体积浓度50%乙醇水溶液，乙醇水溶液b为体积浓度50%乙醇水溶液。
进一步，步骤(I)所述甲醇水溶液a为体积浓度50%甲醇水溶液或70%甲醇水溶液，甲醇水溶液b为体积浓度50%甲醇水溶液或70%甲醇水溶液。
进一步，步骤(I)所述超声处理时间为2(Γ30分钟。
进一步，步骤(2)所述填充剂的粒径为5μηι。
进一步,步骤(2)所述色谱柱长为250mm,内径为4.6mm。
本发明所述养胃颗粒配方为炙黄芪、党参、陈皮、香附、白芍、山药、乌梅、甘草，厂家:正大青春宝药业有限公司。
本发明所述乙醇水溶液a、乙醇水溶液b均为乙醇水溶液，甲醇水溶液a、甲醇水溶液b均为甲醇水溶液，为了便于区分不同步骤所用量不同而命名，混合液a和混合液b均为混合液，为了便于区分不同步骤所获得混合液不同而命名，字母本身没有含义。
与现有技术相比，本发明的优势体现在:《中华人民共和国药典》2010年版一部中养胃颗粒含量测定项下只是测定了白芍中的芍药苷，本发明方法不仅测定芍药苷的含量，又增加测定陈皮中的橙皮苷含量和甘草中的甘草酸含量，大大提高了养胃颗粒的质量控制标准。且采用同一色谱条件，在流动相梯度洗脱的方法下，利用DAD紫外检测器同时在230nm处测定芍药苷、在283nm处测定橙皮苷、在252nm处测定甘草酸。该方法含量测定方法学验证完全符合规定，是一种先进的质量控制方法。相对于一般中药固体制剂如果要用高效液相色谱法检测不同成分的含量需要不同的色谱条件，因此需要大量的检测时间及检测成本，采用本发明则能节约时间和检测成本，且能更加有效控制产品的质量。
图1为实施例1中芍药 苷标准曲线图2为实施例1中橙皮苷标准曲线图3为实施例1中甘草酸铵标准曲线图4为实施例1中芍药苷标准品溶液的色谱图，峰a为芍药苷；
图5为实施例1中橙皮苷标准品溶液的色谱图，峰b为橙皮苷；
图6为实施例1中甘草酸铵标准品溶液的色谱图，峰c为甘草酸铵；
图7为实施例6中方法学验证中专属性考察缺白芍处方提取液色谱图8为实施例6中方法学验证中专属性考察有白芍处方的提取液色谱图，峰a为芍药苷。
图9为实施例6方法学验证中专属性考察缺陈皮处方提取液色谱图10为实施例6方法学验证中专属性考察有陈皮处方的提取液色谱图，峰b为橙皮苷；
图11为实施例6方法学验证中专属性考察缺甘草处方提取液色谱图12为实施例6方法学验证中专属性考察有甘草处方的提取液色谱图，峰c为甘草酸；
图13为实施例1中养胃颗粒的芍药苷含量测定色谱图14为实施例1中养胃颗粒的橙皮苷含量测定色谱图15为实施例1中养胃颗粒的甘草酸含量测定色谱图16为实施例2中养胃颗粒的芍药苷含量测定色谱图17为实施例2中养胃颗粒的橙皮苷含量测定色谱图18为实施例2中养胃颗粒的甘草酸含量测定色谱图19为实施例3中养胃颗粒的芍药苷含量测定色谱图20为实施例3中养胃颗粒的橙皮苷含量测定色谱图21为实施例3中养胃颗粒的甘草酸含量测定色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1:采用高效液相色谱法测定养胃颗粒中芍药苷、橙皮苷和甘草酸的含量
( I)高效液相色谱条件
仪器名称:安捷伦1100高效液相色谱仪
色谱条件:色谱柱=ZORBAX SB — C18 (柱长250mm，内径4.6mm)，填充剂:十八烷基硅烷键合硅胶(粒径5 μ m)，流速:1.0ml/min，柱温:25°C
DAD紫外检测器检测波长:230nm、283nm、252nm
以体积浓度0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按表I进行梯度洗脱。
表I梯度洗脱条件
权利要求
1.一种测定养胃颗粒中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，其特征在于所述方法为:(1)待测样品:将养胃颗粒研细混匀后加入体积浓度(TlOO%乙醇水溶液a或体积浓度50 100%甲醇水溶液a中制成混合液a，将混合液a在超声频率25KHz、超声功率8(Tl00W的条件下超声处理10 30分钟，放冷，取超声处理后的混合液a加入体积浓度(TlOO%乙醇水溶液b或体积浓度5(Γ100%甲醇水溶液b制成混合液b，使混合液b与混合液a质量相同，将混合液b摇匀、过滤，取滤液，获得待测样品；所述乙醇水溶液b与乙醇水溶液a相同，所述甲醇水溶液b与甲醇水溶液a相同；(2)含量测定:将步骤(I)制备的待测样品注入高效液相色谱仪进行测试，获得待测样品的高效液相色谱谱图，取不同量芍药苷标准品溶液在同样条件下进行测试，获得芍药苷标准品溶液的高效液相色谱谱图，以芍药苷标准品溶液的高效液相色谱谱图中吸收峰的峰面积为横坐标，以芍药苷标准品溶液进样量为纵坐标制作芍药苷标准曲线，橙皮苷标准曲线和甘草酸铵标准曲线的制作同芍药苷标准曲线，根据待测样品的高效液相色谱谱图中相应吸收峰的峰面积及各个标准品的标准曲线计算待测样品中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量；高效液相色谱仪测试条件为:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度0.5%冰乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为(TlOmin时流动相A为85%，l(T30min时流动相A为85 80%，30 65min时流动相A为80 50%，分别在230nm、283nm和252nm处检测吸收峰。
2.如权利要求1所述测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，其特征在于步骤(I)所述乙醇水溶液a为体积浓度50%乙醇水溶液，乙醇水溶液b为体积浓度50%乙醇水溶液。
3.如权利要求1所述测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，其特征在于步骤(I)所述甲醇水溶液a为体积浓度50%甲醇水溶液或70%甲醇水溶液，甲醇水溶液b为体积浓度50%甲醇水溶液或70%甲醇水溶液。
4.如权利要求1所述测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，其特征在于步骤(I)所述超声处理时间为2(Γ30分钟。
5.如权利要求1所述测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，其特征在于步骤(2)所述填充剂的粒径为5 μ m。
6.如权利要求1所述测定药物中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，其特征在于步骤(2)所述色谱柱长为25 0mm,内径为4.6mm。
全文摘要
本发明公开了一种测定养胃颗粒中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量的方法，所述方法为将养胃颗粒预处理制成待测样品，将待测样品注入高效液相色谱仪进行测试，获得待测样品的高效液相色谱谱图，根据待测样品的高效液相色谱谱图中相应吸收峰的峰面积及各个标准品的标准曲线计算待测样品中芍药苷、橙皮苷和甘草酸含量；本发明方法不仅测定《中华人民共和国药典》2010年版一部中养胃颗粒含量测定项下芍药苷的成分，又增加测定陈皮中的橙皮苷含量和甘草中的甘草酸含量，大大提高了养胃颗粒的质量控制标准，该方法含量测定方法学验证完全符合规定，是一种先进的质量控制方法；本发明则能节约时间和检测成本，且能更加有效控制产品的质量。
文档编号G01N30/02GK103175915SQ20131005022
公开日2013年6月26日 申请日期2013年2月8日 优先权日2013年2月8日
发明者林徐剑, 吴碧元, 柴建国, 施晓萍, 沈莹 申请人:正大青春宝药业有限公司