乙肝扶正胶囊的质量检测方法
【专利摘要】本发明提供一种乙肝扶正胶囊的质量检测方法，其是一种方法简化、省时节能的、可操作性强的质量控制方法，十分有利于工业化生产的应用。
【专利说明】乙肝扶正胶囊的质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中成药的质量检测方法，具体涉及乙肝扶正胶囊的质量检测方法。 【背景技术】
[0002]乙肝扶正胶囊收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第一册I页，标准代号为WS3-B-0001-89，具补肝肾，益气活血的功能。用于乙型肝炎，辨证属于肝肾两虚证候。临床表现为:肝区隐痛不适，全身乏力，腰膝酸软，气短心悸，自汗，头晕、纳少，舌淡脉弱。乙肝扶正胶囊在临床上应用多年，取得比较令人满意的疗效。乙肝扶正胶囊处方由中药材何首乌15g、虎杖25g、贯众50g、肉桂5g、明帆10g、石槽皮6g、当归10g、丹参15g、
沙苑子10g、人参10g、麻黄6g组成,按以下工艺制成:以上^--味，当归、肉桂、丹参、明帆
粉碎为细粉，其余何首乌等七味加水煎煮二次，每次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液滤过成稠膏，加入上述粉末，混匀，于70~80°C干燥，粉碎成细粉，过筛，装胶囊，即得。处方中何首乌为寥科植物何首乌Polygotum multi florum Thunb.的干燥块根；虎杖为寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根莖和根；贯众为紫萁蕨科植物华南紫萁Osmunda vachellii Hook.、乌毛厳科植物乌毛厳Blechnum orientale L.或苏铁蕨Brainea insignis (Hook.) J.Sm.的干燥根状莖；肉桂为樟科植物肉桂Cinnamomumcassia Presl的干燥树皮；明矾为硫酸盐类矿物明矾石经加工提炼制成，含含水硫酸铝钾[AlK(SO4)2.12H20]不少于99.5% ;石槽皮为石槽科植物石槽Punica granatum L.的干燥果皮；当归为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv) Diels.的干燥根；丹参为唇形科植物丹参Salvia milt1rrhiza Bge.的干燥根和根茎；沙苑子为豆科植物扁茎黄芪Astragalus complanatus R.Br.的干燥成熟种子；人参为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的干燥根和根茎；麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf.、中麻黄Ephedraintermedia Schrenk et C.A.Mey.或木贼麻黄 Ephedra equisetina Bge.的干燥草质茎。
[0003]乙肝扶正胶囊原质量标准仅用显微鉴别对产品质量进行控制，故需对其质量控制方法进行研究，制定确实可行的方法保证产品质量和临床疗效。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种方法简化、省时节能的、可操作性强的乙肝扶正胶囊的质量检测方法，十分有利于工业化生产的应用。
[0005]本发明以如下技术方案解决上述技术问题:
[0006]乙肝扶正胶囊的质量检测方法包括以下检测中的一种或多种:
[0007]A、用薄层色谱法对药物中的虎杖进行定性鉴别
[0008]取本品内容物适量，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙醚振摇提取，取乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.1g,同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液,作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各I?6μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚60?90°C -乙酸乙酯-甲酸14?16: 2?4: 0.5?1.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置波长为365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变成红色。
[0009]B、用薄层色谱法对药物中的当归进行定性鉴别
[0010]取本品内容物2.5g，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9: I为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置波长为365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0011]C、用薄层色谱法对药物中的丹参进行定性鉴别
[0012]取本品内容物加乙醚超声处理，滤过，弃去滤液，药渣挥干乙醚，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加I %盐酸溶液使溶解，用乙醚振摇提取，取乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材同法制成对照药材溶液；再取丹酚酸B对照品，加甲醇制成对照品溶液；吸取上述对照药材溶液、对照品溶液、供试品溶液各I?6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸2: 3: 4: 0.5: 2为展开剂，展开，取出，晾干；喷以I %三氯化铁溶液与I %铁氰化钾溶液1:1的混合溶液，临用前混合，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。D、用高效液相色谱法测定该药物中丹参特征成分丹酚酸B的含量
[0013]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水24?28: 7?9: 0.8?1.2: 62?68为流动相；检测波长280?290nm ;
[0014]对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每Iml含30?80 μ g的溶液，即得；
[0015]供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取0.1?lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇30?100ml，密塞，称定重量，加热回流0.5?3小时，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
[0016]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10?20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0017]乙肝扶正胶囊的质量检测方法包括以下检测中的一种或多种:
[0018]Α、用薄层色谱法对药物中的虎杖进行定性鉴别
[0019]取本品内容物lg，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml分次使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液；另取虎杖对照药材0.1g,同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照品溶液I μ 1，对照药材溶液、供试品溶液各3?6 μ I,分别点于同一娃胶G薄层板上，以石油醚60?90°C -乙酸乙酯-甲酸15: 3: I的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置波长为365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变成红色。
[0020]B、用薄层色谱法对药物中的当归进行定性鉴别
[0021]取本品内容物2.5g，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9: I为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置波长为365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0022]C、用薄层色谱法对药物中的丹参进行定性鉴别
[0023]取本品内容物3g，加乙醚40ml，超声处理10分钟，滤过，弃去滤液，药渣挥干乙醚，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加I %盐酸溶液15ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；吸取上述对照药材溶液I μ 1，对照品溶液、供试品溶液各3?6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸2: 3: 4: 0.5: 2为展开剂，展开，取出，晾干；喷以I %三氯化铁溶液与I %铁氰化钾溶液1:1的混合溶液，临用前混合，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。D、用高效液相色谱法测定该药物中丹参特征成分丹酚酸B的含量
[0024]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水26: 8: I: 65为流动相；检测波长286nm ；
[0025]对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每Iml含50 μ g的溶液，即得；
[0026]供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，取1ml以每分钟3000转的转速离心10分钟，取上清液，即得；
[0027]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0028]本发明乙肝扶正胶囊的质量检测方法，是通过大量试验研究对比而得出的，是一种方法简化、省时节能的、可操作性强的乙肝扶正胶囊的质量检测方法，十分有利于工业化生产的应用。
【具体实施方式】
[0029]虽然本说明书通过特别指出并清楚要求保护本发明的权利要求书作出结论，但应该相信下列说明将更好地理解本发明。
[0030]除非另外指明，本文中所涉及展开剂及流动相的比例均为体积比。
[0031]本文中“1%盐酸溶液”是指质量体积比，即Ig盐酸配制成100ml。
[0032]本文中“I %三氯化铁溶液与I %铁氰化钾溶液1:1的混合溶液”所述的I %均是指重量的比例，I: I是指体积的比例。[0033]本文中“ 75 %甲醇”为体积比。
[0034]如本文所用，单词“优选的”及变体是指在特定环境下能够提供特定有益效果的本发明的实施方案。然而，其它的实施方案在相同或其它的环境下也可以是优选的。此外，一个或多个优选实施方案的详述并不表示其它实施方案是无用的，并且不旨在从本发明的范畴排除其它的实施方案。
[0035]本发明的质量检测方法是经过大量的试验筛选得到的，以下试验研究为本发明的优选过程。
[0036]一、虎杖的薄层色谱鉴别
[0037]供试品溶液的制备方法除本发明方法外，还比较了以下两种方法:
[0038]①取本品内容物2.5g，加无水乙醇10ml，置水浴上温热10分钟，滤过，滤液浓缩至约Iml,作为供试品溶液。
[0039]②取本品内容物lg，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加
2.5mol/L硫酸溶液20ml使溶解，置水浴中加热30分钟，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。
[0040]试验结果:①斑点不够清晰，②分离效果与本发明方法相当，但其制备方法较复杂。
[0041]另试用了不同的展开系统:①石油醚(60?90°C )-乙酸乙酯(8: 2) 石油醚(30?60°C)_甲酸乙酯-甲酸(15: 5: I)上层液；③正己烷-甲苯-乙酸乙酯-冰乙酸(18: 2: 2: 0.5);④甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:1: 0.3) 正己烷-乙酸乙酯_甲酸(15: 5:1)。结果①比移值偏低，斑点不够清晰，②③④⑤斑点不够圆整，分离效果不好，而本发明收载系统展开效果好，比移值适中，斑点清晰，重现性好。
[0042]考察了展开剂石油醚60?90°C-乙酸乙酯-甲酸不同配比的分离效果，为取得较好的比移值及斑点圆整性，展开剂优选为石油醚60?90°C-乙酸乙酯-甲酸14?16: 2?4: 0.5?1.5，更优选为石油醚60?90°C -乙酸乙酯-甲酸15: 3:1。
[0043]二、当归的薄层色谱鉴别
[0044]供试品溶液的制备方法除本发明方法外，还比较了以下两种方法:
[0045]①取本品内容物2.5g，加乙醚10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。
[0046]②取本品内容物2.5g，加无水乙醇10ml，置水浴上温热10分钟，滤过，滤液浓缩至约Iml,作为供试品溶液。
[0047]结果结果方法①②供试品色谱中特征斑点均不够明显清晰，杂质干扰大，故不采用。
[0048]检视方法曾试用了直接在紫外光灯(365nm)下检视，结果阴性供试品在对照药材主斑点相应位置有杂质干扰，而采用氨气熏后，可以很好地消除杂质干扰。
[0049]三、丹参及丹参特征成分丹酚酸B的薄层色谱鉴别
[0050]供试品溶液的制备方法除本发明方法外，还比较了以下二种方法:
[0051]①取本品内容物4.0g，加乙醚20ml，振摇，放置I小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。
[0052]②取本品内容物1.0gJP 75%甲醇50ml，加热回流I小时，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。
[0053]结果供试品色谱中的特征斑点均不明显。而本发明收载方法分离效果较好，斑点较清晰。
[0054]展开剂除本发明方法外，还考察了以下展开剂:①甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5: 3:1);②甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(5: 2:1:1);③甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(4: 3: 2:1)。结果展开系统①②比移值偏小，斑点不够圆整，③斑点不够圆
難
iF.0
[0055]检识方法还试用了:①置紫外光灯(254nm)下检视；②置紫外光灯(365nm)下检视；③喷以5%三氯化铁溶液后日光下检识。结果:①色谱背景较深，杂质斑点较多，分离效果不好，②特征斑点不明显，③斑点不够清晰；以本发明方法为好。
[0056]还对丹参的另一特征成分丹参酮IIA进行了鉴别，供试品制备:①取本品内容物
4.0g，加乙醚20ml，振摇，放置I小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液！②取本品内容物3.5g，加乙醚40ml，超声10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。展开系统试用了①石油醚(60~90°C)_乙酸乙酯(4: I);②甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10: 2: 4: 2)逾正己烷-乙酸乙酯-甲酸(6: 2: 0.1);④甲苯-甲醇(10: I)。结果特征斑点均不明显。 [0057]本发明收载方法展开效果好，比移值适中，薄层分离好，斑点清晰，重现性好。
[0058]四、丹参特征成分丹酚酸B的含量测定方法学试验
[0059]I供试品溶液制备方法选择
[0060]1.1对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸B对照品，加75%甲醇配制成适当浓度的对照品溶液，摇匀，即得。
[0061]适当的对照品溶液浓度可以节约对照品，并具有符合规定的测定精密度，其浓度优选为每1ml含30~80 μ g,更优选为每1ml含50 μ g。
[0062]1.2供试品溶液的制备:取本品内容物，研细，取适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75 %甲醇适量，密塞，称定重量，加热回流，放冷，再称定重量，用75 %甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。
[0063]取适量的样品有利于准确检测样品，其取样量优选为0.1~lg，更优选为0.3g。
[0064]提取溶剂75%甲醇适量加入有利于准确检测样品，其加入量优选为30~100ml，更优选为50ml。
[0065]加热回流适当时间有利于有效成分提取出来，其加热回流时间优选为0.5~3小时，更优选为I小时。
[0066]1.3阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是取不含丹参的阴性样品按上述“供试品溶液的制备”方法制备不含丹参的阴性样品溶液。
[0067]2色谱条件与系统适用性试验
[0068]色谱柱:十八烷基键合硅胶色谱柱(Thermo C18250 X 4.6mm), PhenomenexC184 X 3.0mm保护柱；以甲醇-乙腈-甲酸-水(26: 8: I: 65)为流动相；流速:1.0ml/min，柱温:30°C ;检测波长:286nm。
[0069]适当的流动相可以节约检验时间，并得到较好的分离效果，流动相优选为甲醇-乙腈-甲酸-水24~28: 7~9: 0.8~1.2: 62~68，更优选为甲醇-乙腈-甲酸-水 26: 8:1: 65。
[0070]适当的检测波长可以使检测具有较好的灵敏度，检测波长优选为280~290nm，更优选为286nm。
[0071]分别吸取丹酚酸B对照品溶液、供试品溶液及不含丹参的阴性样品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，绘制色谱图。此条件下丹酚酸B与其它组分达到基线分离，分离度R >1.5，理论塔板数按丹酚酸B计算大于2000，丹酚酸B保留时间约为13分钟，见表1。阴性样品溶液在对照品色谱相应位置无吸收峰，可见阴性无干扰。
[0072]表1理论塔板数、分离度、保留时间数据
[0073]
【权利要求】
1.一种具有补肝肾，益气活血的乙肝扶正胶囊的质量检测方法，其中该胶囊由中药材何首乌15g、虎杖25g、贯众50g、肉桂5g、明帆10g、石槽皮6g、当归10g、丹参15g、沙苑子10g、人参10g、麻黄6g组成,该胶囊按以下工艺制成:以上十一味，当归、肉桂、丹参、明帆粉碎为细粉，其余何首乌等七味加水煎煮二次，每次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液滤过成稠膏状，加入上述粉末，混匀，于70~80°C干燥，粉碎成细粉，过筛，装胶囊，即得。该药物的质量检测方法其特征在于:该方法包括以下全部或部分内容:虎杖的薄层色谱定性鉴别、当归的薄层色谱定性鉴别、丹参的薄层色谱定性鉴别、丹参特征成分丹酚酸B的含量测定。 a、虎杖的薄层色谱定性鉴别: 取该药物内容物lg，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml分次使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材0.lg，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述对照品溶液I μ 1，对照药材溶液、供试品溶液各3~6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90°C)_乙酸乙酯-甲酸(15: 3:1)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变成红色。 b、当归的薄层色谱定性鉴别: 取该药物内容物2.5g，加乙醇1ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 C、丹参的薄层色谱定性鉴别: 取该药物内容物3g，加乙醚40ml，超声处理10分钟，滤过，弃去滤液，药渣挥干乙醚，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加I %盐酸溶液15ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述对照药材溶液I μ 1，对照品溶液、供试品溶液各3~6 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2: 3: 4: 0.5: 2)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以1%三氯化铁溶液与1%铁氰化钾溶液(I: I)的混合溶液(临用前混合)，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 D、丹参特征成分丹酚酸B的含量测定: 照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(26: 8:1: 65)为流动相；检测波长286nm;理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含50 μ g的溶液，即得。 供试品溶液的制备取该药物内容物，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，取1ml离心10分钟(3000转/分)，取上清液，即得。 测定法分别精密吸 取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【文档编号】G01N1/28GK104034839SQ201310072533
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2013年3月7日 优先权日:2013年3月7日
【发明者】廖展苇, 陈晓军, 丘伟业, 黄园, 周凯华, 邓昶, 阮碧芳, 梁霞, 梁月钊 申请人:广西灵峰药业有限公司