专利名称：用联吡啶钌电致化学发光法测定痕量左旋咪唑的方法
技术领域：
本发明涉及一种利用联吡啶钌电致化学发光法测定痕量左旋咪唑的方法。
背景技术：
由于其质优价廉、广谱抗菌活性的特点，左旋咪唑是兽药和人用药品中常用的驱虫药之一。在血液和尿液中可以检测出左旋咪唑的药物残留。对于左旋咪唑最大的药物残余量，美国药典有规定。因此有必要在前有的基础上提高灵敏度来研究一种对左旋咪唑具有高选择性的检测方法。电致化学发光法是一种高灵敏度、高选择性的痕量分析方法。已报道测定左旋咪唑的方法存在灵敏度低、样品处理复杂、仪器昂贵或实际应用范围窄等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种高灵敏度、高选择性、线性范围宽、仪器简单、重现性好、容易控制的用联吡啶钌电致化学发光法测定痕量左旋咪唑的方法。构思如下:以联吡啶钌作为电致化学发光试剂，联吡啶钌具有水溶性好，化学性能稳定，氧化还原可逆，发光效率高，应用的PH范围较宽，可电化学再生和激发态寿命长等特点被广泛应用于电致化学发光法(ECL)研究中；联吡啶钌在其氧化电位下，有微弱的发光。左旋咪唑结构中含有叔胺 基，可以有效的增强联吡啶钌在其氧化电位下的发光强度；这样可以通过加入左旋咪唑后联吡啶钌溶液发光强度的变化直接检测左旋咪唑的含量。本发明利用电致化学发光法，左旋咪唑增强联吡啶钌发光强度，左旋咪唑浓度在2 X IO-10 I X IO-7 mol/L范围内与联吡啶钌发光增强成良好的线性关系。具体步骤如下:
(I)钼电极的处理:
将钼电极依次用1.0 i! m、0.3 i! m和0.05 u m的氧化招粉进行表面抛光处理,然后依次在硝酸(体积百分比浓度为50%)、无水乙醇和纯水中浸泡洗涤，取出后超声洗涤5分钟。(2)检测方法:
将步骤(I)处理好的钼电极放入含有2.0X10, 1.0X10_7 mol/L的左旋咪唑标准溶液的检测体系统中，直接测定发光强度；检测体系为:350 UL含有5 mmol/L联吡啶钌的12 mmol/L硼砂缓冲溶液，硼砂缓冲溶液pH=9.0 ^MP1-A电致化学发光检测仪进行电致化学发光检测，扫描电位0.2 1.3V，光电倍增管高压为800 V，放大倍数为4级。( 3)标准工作曲线的绘制:
在体积为350 u L的检测池中加入含有浓度为2.0X 10_1Q 1.0X 10_7 mol/L的左旋咪唑和5 mmol/L联批唳钌的12 mmol/L硼砂缓冲溶液,硼砂缓冲液pH=9.0,进行电致化学发光检测；左旋咪唑在2X10, 1X10_7 mol/L范围内，IgC与发光峰增强(AJ)呈良好的线性关系，其线性回归方程为-Al =269.6841gC-20.616，线性相关系数r =0.9977。本发明克服了已有技术在检测时存在灵敏度低、样品处理复杂、仪器昂贵或实际应用范围窄等缺点，更好地提高了灵敏度和选择性，对于低浓度的左旋咪唑的检测易于自动化。
图1为本发明实施例钼电极在pH=9的12 mmol/L的硼砂缓冲溶液，联吡啶钌浓度为5 mmol/L的发光图。其中:a为溶液中不包含左旋咪唑；b为溶液中包含左旋咪唑。图2为本发明实施例左旋咪唑含量与电致化学发光峰高增加量的关系图。
具体实施例方式实施例:
(I)钼电极的处理:
将钼电极依次用1.0 ii m、0.3 ii m和0.05 u m的氧化招粉进行表面抛光处理,然后依次在硝酸(体积百分比浓度为50%)、无水乙醇和纯水中浸泡洗涤，取出后超声洗涤5分钟。(2)检测方法:
将处理好的钼电极放入含有2.0X10, 1.0X IO^7 mol/L的左旋咪唑标准溶液的检测体系统中，直接测定发光强度。检测体系为:350 UL含有5 mmol/L联吡啶钌的12 mmol/L硼砂缓冲溶液，硼砂缓冲溶液pH=9.0 ;用MP1-A电致化学发光检测仪进行电致化学发光检测，扫描电位0.2 1.3V，光电倍增管高压为800 V，放大倍数为4级。(3)标准工作曲线的绘制:
在检测池中加入350 u L含有不同浓度左旋咪唑和5 mmol/L联吡啶钌的硼砂缓冲溶液(pH=9.0)，进行电致化学发光检测；左旋咪唑在2.0X10, l.0XlO—7 mol/L范围内，IgC与发光峰增强(AJ)呈良好的线性关系，其线性回归方程为-Al =269.6841g^-20.616，线性相关系数r=0.9977。(4)血清样中左旋咪唑含量的测定:
由桂林理工大学校医院提供血清样品中未检出左旋咪唑，故采用加标回收实验；取2mL血清样品,加入2 mL饱和(NH4)2SO4溶液于离心管中,样品在7000 rpm离心15分钟,去上清液置于磷酸盐缓冲溶液中(PH=7.4)透析过夜；在处理后的血清样中分别加入浓度为
3.0X 10_9 mol/L和7.5X 10, mol/L的左旋咪唑，摇匀后直加入检测池中，利用MP1-A电致化学发光检测仪对待测液进行电致化学发`光测定，扫描电位0.2 1.3 V，光电倍增管高压为800 V，放大倍数为4级，得到发光峰值I，根据校正曲线计算出左旋咪唑的浓度C，计算回收率，结果如表I所示:
表I加标固收试验数据
样品测得量加A左旋味唑量测出左旋味4总量 收率 mol Lmol 1.me 11%
~I3.0x10-:.S5-<10- P1~
I 未检出7.540-二7.90x10--105J
权利要求
1.一种用联吡啶钌电致化学发光法测定痕量左旋咪唑的方法，其特征在于具体步骤为: (1)钼电极的处理: 将钼电极依次用1.0 um>0.3 i! m和0.05 um的氧化招粉进行表面抛光处理,然后依次在体积百分比浓度为50%的硝酸、无水乙醇和纯水中浸泡洗涤，取出后超声洗涤5分钟； (2)检测方法: 将步骤(I)处理好的钼电极放入含有2.0X10, 1.0X10_7 mol/L的左旋咪唑标准溶液的检测体系统中，直接测定发光强度；检测体系为:350 UL含有5 mmol/L联吡啶钌的12 mmol/L硼砂缓冲溶液，硼砂缓冲溶液pH=9.0 ^MP1-A电致化学发光检测仪进行电致化学发光检测，扫描电位0.2 1.3V，光电倍增管高压为800 V，放大倍数为4级； (3)标准工作曲线的绘制: 在体积为350 u L的检测池中加入含有浓度为2.0X 10_1Q 1.0X 10_7 mol/L的左旋咪唑和5 mmol/L联批唳钌的12 mmol/L硼砂缓冲溶液,硼砂缓冲液pH=9.0,进行电致化学发光检测；左旋咪唑在2X10, 1X10_7 mol/L范围内，IgC与发光峰增强即AJ呈良好的线性关系，其线性回归 方程为-Al =269.6841gC-20.616，线性相关系数r =0.9977。
全文摘要
本发明公开了一种用联吡啶钌电致化学发光法测定痕量左旋咪唑的方法。以铂电极为工作电极，利用左旋咪唑中含有的叔胺基对联吡啶钌(Ru(bpy)32+)发光增强的原理，建立一种测定痕量左旋咪唑的方法。扫描电位0.2V-1.3V，光电倍增管高压为800V，放大倍数为4级。在pH=9.0的12mmol/L硼砂底液中，左旋咪唑浓度在2×10-10~1×10-7mol/L范围内，lgC与钌发光增强成良好的线性关系，检出限为1.76×10-11mol/L。本发明灵敏、简便、选择性好，对于低浓度左旋咪唑的检测易于自动化。
文档编号G01N21/76GK103196898SQ201310085879
公开日2013年7月10日 申请日期2013年3月18日 优先权日2013年3月18日
发明者李建平, 肖颖, 魏小平 申请人:桂林理工大学