一种药物组合物的检测及质量控制方法
【专利摘要】本发明公开了一种药物组合物的检测及质量控制方法，所述的药物组合物为含有贯叶金丝桃的组合物，利用液相色谱法对金丝桃苷、芦丁、紫丁香苷的含量检测，所用液相色谱测定条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为NaH2PO4缓冲液，流动相B为乙腈与甲醇的混合溶液，采用梯度洗脱。该方法具有快速、高效、稳定、准确等优点，能够快速、有效的对药物其组合物进行质量控制。
【专利说明】一种药物组合物的检测及质量控制方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物的质量控制，具体涉及一种药物组合物的检测及质量控制方法。
【背景技术】
[0002]抑郁症已迅速成为全球疾病中给人类造成严重负担的第二位重要疾病，对患者及其家属造成的痛苦和对社会造成的损失是其他疾病所无法比拟的。因此，社会对抑郁症治疗的药物需求是巨大的。相对于西医使用特定作用靶点药物治疗来讲，中医使用活性物质群，能够作用于多靶点，呈现多效性，而调整是其主要作用机制，显示出传统医药的独特性。舒肝解郁胶囊是国内首个SFDA批准的用于治疗抑郁的中成药，由贯叶金丝桃、刺五加两味中药组成。主要的功效为健脾安神，适用于轻、中度单相抑郁症属肝郁脾虚证者，症见情绪低落、兴趣下降、迟滞、入睡困难、早醒、多梦、紧张不安、急躁易怒、食少纳呆、胸闷、疲乏无力、多汗、疼痛、舌苔白或腻，脉弦或细。
[0003]舒肝解郁胶囊由贯叶金丝桃、刺五加两味中药组成。其中贯叶金丝桃已经有2400年的使用历史，近年来对贯叶金丝桃的研究热点放在抗抑郁功效方面。贯叶金丝桃经醇提取后获得的主要成分为6类:萘并二蒽酮类(naphtho1-anthrones)、间苯三酌.类(phloroglucinols)、黄丽类(flavonoids)、双黄丽类(biflavones)、苯丙烯酸类(phenylpropanes)、原花青素(proanthocyanidins)。另外，还有少量的单宁酸、氧杂蒽酮、挥发油和氨基酸等。其中黄酮类成分在贯叶金丝桃中含量高达
9.25%，有研究报道称其为有效的抗抑郁成分，已经被确认的黄酮苷类主要包括山柰酌'(kaempferol)、木犀草素(luteolin)、杨梅素(myricetin)、槲皮素(quercetin)、金丝桃苷(hyperoside, hyperin)、芦丁(rutin)、槲皮苷(quercitrin)、异槲皮苷(isoquercitrin)、miquelianin (quercetin-3-0-glucuronide,懈皮素-3-0-葡萄糖醒酸苷)、astilbin (taxifolin-3-O-rhamnopyranoside,紫杉叶素-3-0-鼠李糖苷)[A review of the antibacterial activity of Hypericum perforatumL, Journal ofEthnopharmacology, ZebSaddiqe, 2010, 131:511 - 521]。刺五加始见于《神农本草经》，其性温，味辛、苦，归肝、肾经，具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、通淤血、利水肿、镇痛解热等功效。文献报道其主要的包含刺五加皂苷、黄酮类、多糖类、三萜皂苷类、木脂素和咖啡酰奎宁酸类等多种化学成分，其中紫丁香苷是其的主要活性成分，具有抗疲劳、免疫调节等多种生理作用。金丝桃苷和芦丁作为贯叶金丝桃中较为重要的两种黄酮类化合物，常被用于做为该药材的质量评价指标。例如，《中国药典》2010年版中以金丝桃苷和芦丁为评价指标，采用薄层色谱法对贯叶金丝桃进行质量鉴别，《欧洲药典》7.0版和《英国药典》2009版中，均选取芦丁、金丝桃苷和金丝桃素作为质量控制的指标，对贯叶金丝桃进行薄层色谱鉴别。《中国药典》2010版中以紫丁香苷含量测定，对刺五加药材及其浸膏进行质量控制。
[0004]在中药质量控制方法中，色谱法是在中药材提取物的研究中应用时间最长，范围最广，应用技术最有成就的一种技术，它可以很好地反映化学组成及含量情况，主要包括高效液相色谱(HPLC)法、薄层色谱(TLC)法、薄层扫描技术和气相色谱(GC)法等，已成为中药质量控制的最主要方法，HPLC的分离效能高、检测手段多、分析速度快等特点，使其越来越多地应用于中药质量控制当中。
[0005]然而，由于贯叶金丝桃和刺五加二种中药材的提取物中均含有大量的药物活性物质，其中贯叶金丝桃的主要活性物质金丝桃苷、芦丁、异槲皮苷母核结构相同、性质相似，要利用HPLC方法准确将目标物质同其他杂质有效分离并且定量分析存在较大难度，因此，建立一种简单、有效、灵敏度高的高效液相色谱检测方法，对于舒肝解郁胶囊的质量控制来说具有十分重要的意义。
[0006]目前，利用高效液相色谱法对含有贯叶金丝桃和刺五加的药物组合物(如舒肝解郁胶囊)的药品质量控制方法未见报道，虽然对于高效液相色谱法单独定量检测贯叶金丝桃中的金丝桃苷和/或芦丁或紫丁香苷有一定的报道，例如范之枫等报道了用高效液相色谱方法检测新疆贯叶金丝桃不同部位中金丝桃苷、芦丁的含量[范之枫，新疆贯叶金丝桃不同部位中金丝桃苷、芦丁和金丝桃素的含量及提取工艺对它们的影响，新疆中医药，2005，23，4:4-6]，然而 申请人:通过对比试验发现，该方法用于舒肝解郁胶囊的检测时虽然分离时间较短，但其出峰时间过早，分离度差，主要物质峰中包含大量杂质，同样难以舒肝解郁胶囊中对金丝桃苷和芦丁进行有效定量。
[0007]此外， 申请人:通过对其余中药材(非贯叶金丝桃)中金丝桃苷和芦丁含量的高效液相色谱方法[1_17]，进行分析发现其方法仅在检测一种药材提取物中金丝桃苷和芦丁含量时就存在如下问题:
[0008]I)方法的分析时间长，一般在40min?60min,参见文献[4,7-9]；
[0009]2)分离度达不到要求(分离度一般要求1.5以上)，目标峰中可见杂峰存在，参见文献[1-2，4-6，8-10，13，15-17]；
[0010]3)基线波动大，波长选择不合理，背景干扰严重，参见文献[2，4，6，8-9，13-17]；
[0011]4)各种分析方法的耐用性都没有进行初步的考察，参见文献[1-17]。
[0012]参考文献:
[0013][1]HPLC测定山枚注射液中牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁的含量，高辉，黑龙江中医药，2012,2:47-48;
[0014][2]HPLC测定山楂精中牡荆苷、牡荆苷-2" -O-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁的含量，王福成，豆文太，朱文学等，中成药，2002，24 (2): 122-124;
[0015][3]HPLC测定山楂叶中牡荆素-4"-O-葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁、金丝桃苷的含量，赵彩云，王强，中成药，2011,33 (3): 494-497;
[0016][4] HPLC法测定安神颗粒中金丝桃苷和芦丁，兰静，中草药，2009，40 (10)，1583-1585;
[0017][5]HPLC法测定刺玫果中芦丁和金丝桃苷的含量，王光函，张振秋，张颖等，辽宁中医药大学学报，2010，12(6):248-249;
[0018][6]HPLC法同时测定夏枯草中芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚，黄兹英，王继良，黄敏洁等.中成药，2012，34 (3):520-523;
[0019][7].HPLC法同时测定宣木瓜中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量，丁姗姗，吕凌，张毅等，安徽医药，2012，6 (4): 450-452;
[0020][8]RP-HPLC法测定天山花楸果实中苦杏仁苷、芦丁、金丝桃苷和橙皮苷的含量，张薇，常军民，沈美英等，药物分析杂志，2011，31 (5): 935-937;
[0021][9]RP_HPLC法测定小花鬼针草中原儿茶酸、芦丁、金丝桃苷和槲皮苷的含量，李玉兰，李军，王乃利等，沈阳药科大学学报，2009，26 (8):639-643;
[0022][10]RP_HPLC同时测定天山花揪中绿原酸、芦丁和金丝桃苷含量，芮鸣，张疗，唐辉等，中药材，2009，32 (2): 232-234 ；
[0023][11]大叶白麻中芦丁、金丝桃苷和槲皮素含量的测定，叶菊，马敏，林鹏程等，湖北农业科学，2010,49 (6): 1454-1455;
[0024][12]多波长RP-HPLC测定山楂叶中芦丁、金丝桃苷及槲皮素含量，张雪莹，张杨，张建逵等，中华中医药学刊，2011，29 (9):1987-1989;
[0025][13]高效液相色谱法测定山楂总黄酮提取物中芦丁和金丝桃苷的含量，王光忠，肖锦，闻磊等，湖北中医学院学报，2009，11 (3):32-34;
[0026][ 14]毛细管电泳法同时检测刺五加叶中的芦丁和金丝桃苷含量，郑春英，刘松梅，李宏涛等，中国药学杂志，20084，3 (10): 783-785;
[0027][15]新疆贯叶金丝桃不同部位中金丝桃苷、芦丁和金丝桃素的含量及提取工艺对它们的影响，范之枫，张瑞欣，黄毅，新疆中医药，2005,23(4):4-7 ；
[0028][16]Phytochemical and ant1xidant characterizat1n of Hypericumperforatum alcoholic extracts, Bruno A.Silva a, Federico Ferreres b,Joa0.Malvac,etal.Food Chemistry90(2005) 157-167 ；
[0029][17]Ant1xidant activity and b1active components of the aerialparts of Hypericum perforatum L.from Epirus, Eleni M.G1ti, YiannisC.Fiamegos, Dimitris C.Skalkos, etal.
[0030]Greece.Food Chemistryl17(2009)398 - 404 ；
【发明内容】
[0031]为了更好控制药物组合物质量，提供一种快速、准确的药物质量控制方法，本发明提供了如下方法。
[0032]本发明提供一种药物组合物的检测方法,采用液相色谱法对药物组合物中的金丝桃苷和芦丁进行含量测定，其中所述液相色谱测定条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为NaH2PO4缓冲液，流动相B为乙腈与甲醇的混合溶液，采用梯度洗脱；其中所述药物组合物为含有贯叶金丝桃的药物组合物。
[0033]本发明提供的药物组合物的检测方法，其所述的梯度洗脱条件为:
[0034]
【权利要求】
1.一种药物组合物的检测方法，其特征在于采用液相色谱法对药物组合物中的金丝桃苷和芦丁进行含量测定，其中所述液相色谱测定条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为NaH2PO4缓冲液，流动相B为乙腈与甲醇的混合溶液，采用梯度洗脱；其中所述药物组合物为含有贯叶金丝桃的药物组合物。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述梯度洗脱条件为:
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述流动相A的pH值为2.0-6.0,优选为3.0 ;流动相B中乙腈与甲醇的比例为9:1 ;供试品溶液的制备方法为取适量供试品，用乙醇/水混合溶液溶解，超声提取，过滤后即得；优选为取适量供试品，用25-75%乙醇/水混合溶液溶解，超声提取10-90min，过滤后即得。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述液相色谱条件中，柱温为15-40°C，优选为 35°C ;流速为 0.5-1.5ml/min，优选为 0.8ml/min ;检测波长为 254_360nm，优选为360nm。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于包含以下步骤: 1)对照品溶液的制备 取芦丁对照品、金丝桃苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含芦丁 0.07mg、金丝桃苷.0.03mg的溶液； 2)供试品溶液的制备 取药物组合物适量，用50%乙醇/水混合溶液溶解，超声，过滤，取滤液，即得，其中所述药物组合物为舒肝解郁胶囊内容物； 3)含量检测 对照品溶液、供试品溶液各10 μ I注入液相色谱柱,进行含量测定； 其中色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为NaH2PO4缓冲液，pH值为3.0,流动相B为乙腈:甲醇为9:1的混合溶液；柱温:35°C，流速:0.8ml/min,检测波长为360nm，所述梯度洗脱条件为:
6.一种药物组合物的质量控制方法，其特征在于包含权利要求1-5中任一项所述的药物组合物中金丝桃苷和芦丁的含量检测方法，所述药物组合物为含有贯叶金丝桃的药物组合物。
7.根据权利要求6所述的质量控制方法，其特征在于所述药物组合物中金丝桃苷的含量不低于5mg/g,芦丁的含量不低于8mg/g,所述药物组合物为舒肝解郁胶囊内容物。
8.根据权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于所述药物组合物中紫丁香苷的含量不低于1.25mg/g。
9.根据权利要求8中所述的质量控制方法，其特征在于所述紫丁香苷的检测的液相色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为甲醇，流动相B为水，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱条件优选为:
柱温优选为20-40°C，更优选为35°C ;流速优选为0.5-1.5ml/min，更优选为1.0ml/min ;检测波长214-338nm,优选为265nm,所述供试品溶液的制备方法为取舒肝解郁胶囊内容物适量，使用甲醇溶液溶解，超声提取，过滤即得。
10.根据权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于所述紫丁香苷的含量检测方法包含以下步骤: 1)对照品溶液的制备 取紫丁香苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液； 2)供试品溶液的制备 取舒肝解郁胶囊内容物适量，加甲醇溶解，超声、过滤，取滤液即得； 3)含量检测 取对照品溶液与供试品溶液各5 μ 1，注入液相色谱仪测定，其中液相检测条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为甲醇，流动相B为水，采用梯度洗脱，柱温3(TC，流速1.0ml/min，检测波长为265mn，梯度洗脱条件为:
【文档编号】G01N30/02GK104076099SQ201310108369
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2013年3月29日 优先权日:2013年3月29日
【发明者】柯潇, 邬智刚, 乔怀耀 申请人:成都康弘药业集团股份有限公司