一种复方α-酮酸片中五种钙盐的含量测定方法
【专利摘要】本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，检测波长为205～220nm，流动相由A相和B相组成，流动相A是pH2.0~4.0的水溶液，流动相B是乙腈，流动相A/流动相B(体积比)为85:15~99:1，A相的pH通过酸或缓冲盐调节。
【专利说明】-种复方Ct -酮酸片中五种钙盐的含量测定方法
[0001]
【技术领域】： 本发明涉及复方α-酮酸片中α-酮缬氨酸钙、α-酮异亮氨酸钙、α-酮亮氨酸钙、 α-羟蛋氨酸钙以及α-酮苯丙氨酸钙含量的测定方法。
[0002]
【背景技术】： 复方α-酮酸片是1996年由德国费森尤斯卡比公司首次在德国上市，临床上用于慢性 肾衰患者的营养，预防和治疗因慢性肾功能不全而造成蛋白质代谢失调引起的损害。本品 为含有五种钙盐（α -酮缬氨酸钙、α -酮异亮氨酸钙、α -酮亮氨酸钙、α -羟蛋氨酸钙以及 α -酮苯丙氨酸钙）和5种人体必需氨基酸（L-赖氨酸醋酸盐、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-组 氨酸、L-酪氨酸）的复方制剂。
[0003] 关于复方α-酮酸片中五种钙盐的含量测定方法的文献报道不多。陈菊在《中国 药师》，2010,第13卷，第10期报道了采用氢型强阳离子交换色谱柱对复方α-酮酸片中 的5种钙盐进行色谱分离，进而进行含量测定，基于的色谱分离原理是离子排斥。然而这种 方法的弊端是，对色谱柱的要求比较苛刻，不同的氢型强阳离子交换色谱柱对分离效果影 响较大，即方法的耐用性较差，在这篇文献中比较了菲罗门Rezex R0A-〇rganicAcid(H+8%) (300mm*7. 8mm)和 Varian METACARB 87H(300mm*7. 8mm)氢型阳离子交换色谱柱对 α -酮酸片中酮代氨基酸钙和羟代氨基酸钙的分离效果。结果表明，酮苯氨酸钙在Rezex R0A_organicAcid(H+8%) (300mm*7. 8mm)柱中色谱峰严重拖尾，影响定量的准确性，而在 Varian METACARB 87H(300mm*7. 8mm)柱中分离效果好，定量准确。另外，杨丹等在《沈阳药 科大学学报》，2011，第28卷，第4期报道了采用反相离子对色谱方法测定酮亮氨酸钙的含 量和有关物质，然而此文献也指出离子对色谱存在色谱体系不容易平衡，色谱重现性差的 固有缺点。
[0004]
【发明内容】
： 为克服现有技术中的上述缺陷，本专利应用目前使用最为普遍的反相C18柱为分离色 谱柱，采用反相色谱的流动相体系，实现了复方α-酮酸片中五种氨基酸钙盐的含量测定， 方法简便，准确，重复性好。
[0005] 本发明提供一种复方α -酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，检测波长为205? 220nm，流动相由Α相和Β相组成，流动相Α是ρΗ2. (Γ4. 0的水溶液，流动相Β是乙腈，流动 相Α/流动相Β (体积比）为85:15~99:1，Α相的pH通过酸或缓冲盐调节。
[0006] 本发明提供一种复方α -酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：优选梯度洗脱，采用梯度洗脱程序如下：
【权利要求】
1. 一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法，其特征 是：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，检测波长为205?220nm，流动相 由A相和B相组成，流动相A相是ρΗ2. (Γ4. 0的水溶液，流动相B相是乙腈，流动相A与流 动相B的体积比为85:15~99:1，A相的pH通过酸或缓冲盐调节。
2. 如权利要求1所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：梯度洗脱，采用梯度淋洗程序如下：
a=89:ll?94:6; b=94:6?98:2，b>a，Tl=3?6，Τ2=Τ1+0·5?2，Τ3 彡35，Τ4>Τ3，Τ5>Τ4。
3. 如权利要求2所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：采用梯度淋洗程序如下：
a=90:l(T93:7; b=95:5 ?97:3，b>a，Tl=3 ?5，Τ2=Τ1+0·5?2，Τ3>35，Τ4>Τ3+2， Τ5>Τ4+8。
4. 如权利要求1~3所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的 测定方法，其特征是：流动相Α相是ρΗ2. (Γ4. 0的磷酸缓冲体系，醋酸缓冲体系或柠檬酸缓 冲体系。
5. 如权利要求4所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：所用的检测波长为210nm。
6. 如权利要求4所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：所用的检测温度为25°C?40°C。
7. 如权利要求3所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是：色谱条件如下： 检测波长为210nm ; 检测温度为30°C ; 采用梯度淋洗程序如下： A 相：pH2. 5±0. 05 的 ΚΗ2Ρ04-Η3Ρ04 缓冲溶液 B相：乙腈
ο
8. 如权利要求1所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是： 检测波长为210nm ; 检测温度为30°C ; 流动相A是pH 2. 0±0. 05的Η3Ρ04水溶液，流动相B是乙腈，流动相A与流动相B的 体积比为98:2。
9. 如权利要求1所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测 定方法，其特征是： 检测波长为210nm ; 检测温度为30°C ; 流动相A是pH 2. 5±0. 05 KH2P04-H3P04水溶液，流动相B是乙腈，流动相A与流动相 B的体积比为94:6。
10. 如权利要求3所述的复方α -酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量 的测定方法，其特征是：色谱条件如下： 检测波长为210nm ; 检测温度为30°C ; 采用梯度淋洗程序如下： A 相：pH2. 5±0. 05 的 ΚΗ2Ρ04-Η3Ρ04 缓冲溶液 B相：乙腈 梯度条件：
〇
【文档编号】G01N30/89GK104101678SQ201310115260
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年4月3日 优先权日:2013年4月3日
【发明者】郭志强, 王宏玲 申请人:天津金耀集团有限公司