一种复方矮地茶片的定性定量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种复方矮地茶片的定性定量检测方法，改进了复方矮地茶片中矮地茶的显微鉴别，增加了复方矮地茶片中矮地茶、野菊花、甘草的薄层鉴别，建立了复方矮地茶片中岩白菜素的含量测定方法；鉴别：采用显微鉴别法鉴别矮地茶，薄层色谱法鉴别矮地茶、野菊花、甘草；含量测定：采用高效液相色谱法测定矮地茶中岩白菜素的含量；每片含矮地茶以岩白菜素(C14H16O9)计，不得少于1.5mg。本发明方法可增加该产品的质量可控性，克服现有技术的不足，以便能够更好的保证疗效，更好的为广大患者服务。
【专利说明】一种复方矮地茶片的定性定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种复方矮地茶片的质量控制方法。
【背景技术】
[0002] 复方矮地茶片是清热解毒，化痰止咳的药品，临床上用于肺热咳嗽及慢性气管炎 等症。其原质量标准为部颁标准，标准编号：WS3-B-1793-94,原标准中仅有1项显微鉴别和 2项化学鉴别，该标准难以有效控制产品质量。中国药事2010年第24卷第10期《HPLC法 测定复方矮地茶片中岩白菜素含量》记载了采用HPLC法测定复方矮地茶片中岩白菜素含 量的方法，中国药业2009年第18卷第22期《反相高效液相色谱法测定复方矮地茶胶囊中 岩白菜素含量》建立了一种复方矮地茶胶囊中岩白菜素含量的RP-HPLC法，湖南中医杂志 2009年第25卷第6期《HPLC法测定复方矮地茶片中岩白菜素的含量》记载了HPLC法测定 复方矮地茶片中岩白菜素的含量的方法，发明人经过提取溶剂对比考察，这三篇文献中采 用甲醇的提取率次于本发明中采用的80%甲醇的提取率。中国实验方剂学杂志2010年第 16卷第9期《HPLC测定复方矮地茶片中岩白菜素的含量》记载了HPLC法测定复方矮地茶 片中岩白菜素的含量的方法。上述方法都是只建立了岩白菜素含量测定方法，无法对制剂 质量进行全面可靠的控制。
[0003] 总得来说，现有的定性定量检测方法不能有效的控制复方矮地茶片的质量，从而 将影响该产品的生产和质量保证及其临床疗效。
[0004]
【发明内容】
： 本发明的目的是提供一种复方矮地茶片的定性定量检测方法，包括复方矮地茶片中 矮地茶的显微鉴别，矮地茶、野菊花、甘草的薄层鉴别，复方矮地茶片中岩白菜素的含量 测定方法；鉴别：采用显微鉴别法鉴别矮地茶、薄层色谱法鉴别矮地茶、野菊花、甘草；含 量测定：采用高效液相色谱法测定矮地茶中岩白菜素的含量；每片含矮地茶以岩白菜素 (C14H16O9)计不得少于1.5mg。本发明方法可增加产品的质量可控性，克服现有技术的不足， 以便能够更好的保证疗效，更好的为广大患者服务。
[0005] 本发明的目的是通过如下技术方案实现的：一种复方矮地茶片的定性定量检测方 法，（1)采用显微鉴别矮地茶，采用薄层色谱法鉴别矮地茶、野菊花、甘草；（2)采用高效液 相色谱法测定矮地茶中岩白菜素的含量，包含如下步骤： (1)鉴别： 矮地茶的显微鉴别包括下列步骤：取本品，置显微镜下观察：螺纹导管直径7. 5? 25ym，纤维成束，壁较厚，草酸興方晶直径7. 5?26ym(矮地茶)。
[0006] 矮地茶的薄层鉴别包括下列步骤：取本品2片，除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声 处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取岩白菜素对照品适量，加甲 醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附 录VIB)试验，吸取上述两种溶液3?5W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60? 90°C)_乙酸乙酯-甲醇（9 : 8 : 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁-1%铁 氰化钾（I: 1)的混合溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点。
[0007] 野菊花的薄层鉴别包括下列步骤：取本品3片，除去包衣，研细，加甲醇15ml，超声 处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取蒙花苷对照品适量，加甲醇 制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附 录VIB)试验，吸取上述两种溶液1?2W，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁 酮-三氯甲烷-甲酸-水（15 : 15 : 6 : 4 : 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三 氯化铝溶液，在l〇5°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0008] 甘草的鉴别包括下列步骤：取本品20片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，超声处理 15分钟，滤过，弃去乙醚液，药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 40ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁 醇饱和的水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为 供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各3?5iU，分别点于同一硅胶G薄层板 上，使成条状，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试 品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0009] (2)含量测定： 矮地茶中岩白菜素的含量测定方法包括下列步骤：照高效液相色谱法（中国药典2010 年版一部附录VID)测定。
[0010] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (20 : 80)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于3000。
[0011] 对照品溶液的制备取岩白菜素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每Iml 含50吒的溶液，即得。
[0012] 供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0. 15g，精密称 定，置25ml量瓶中，加80%甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40kHz) 45分钟，放冷，力口 80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0013] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yi，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0014] 复方矮地茶片每片含矮地茶以岩白菜素（C14H16O9)计，不得少于I. 5mg。
[0015] 为更好的表明本发明的实质，将本发明的方法学考察详述如下： (1)矮地茶的显微鉴别 取本品，置显微镜下观察：螺纹导管直径7. 5~25ym，纤维成束，壁较厚，草酸钙方晶直 径7. 5?26iim(矮地茶)。结果见图1。
[0016](2)矮地茶的薄层色谱鉴别 ①供试品溶液的制备：取本品2片，除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤 过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。
[0017]②对照品溶液的制备：取岩白菜素对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的溶液， 作为对照品溶液。
[0018] ③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去矮地茶的其他味药材，按制法项下的 工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
[0019] ④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试 验，取上述三种溶液3?5W，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙 酯-甲醇（9 : 8 : 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁-1%铁氰化钾（1 : 1) 的混合溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺矮地茶 的阴性对照无干扰，结果见图2。
[0020] (3)野菊花的薄层色谱鉴别 ①供试品溶液的制备：取本品3片，除去包衣，研细，加甲醇15ml，超声处理30分钟，滤 过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。
[0021]②对照品溶液的制备：取蒙花苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液， 作为对照品溶液。
[0022] ③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去野菊花的其他味药材，按制法项下的 工艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
[0023] ④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试 验，吸取上述三种溶液1?2W，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯_ 丁酮-三氯甲 烷-甲酸-水（15 : 15 : 6 : 4 : 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝溶液， 在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺野菊花的阴性对照无干扰，结果见图3。
[0024] (4)甘草的薄层色谱鉴别 ①供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，超声处理15分钟， 滤过，弃去乙醚液，药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶 解，用以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的 水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶 液。
[0025] ②对照药材溶液的制备：取甘草对照药材lg，加乙醚40ml，超声处理15分钟，滤 过，弃去乙醚液，药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解， 用以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗 涤3次，每次20ml，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。
[0026] ③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去甘草的其他味药材，按制法项下的工 艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
[0027] ④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验， 吸取上述三种溶液各3?5yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙酯-甲 酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液， l〇5°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺甘草的阴性对照无干扰，结果见图4。
[0028](3)岩白菜素含量测定 ①仪器与试药=Wasters1525高效液相色谱仪；CG-300超声清洗仪（300W，25kHz);天 平：AE240，CP22? ;WasterS 2996 (PDA);岩白菜素（中国药品生物制品检定所提供，供含量 测定用，批号=111532-200202)。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
[0029]②系统适应性：色谱柱：Agient C18( DB) ( 250mm X4. 6mmX5Mm)，Agilent公司； 柱温：35°C;流动相：甲醇一水（20 : 80);流速l.Oml/min;检测波长275nm;色谱工作站 Empower。
[0030] ③对照品溶液的制备：精密称取岩白菜素对照品24. 79mg，置50ml量瓶中，力口 80%甲醇适量使溶解，加80%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得对照品贮备液（C=0. 4958mg/ml)。 精密量取贮备液l〇ml，置IOOml量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液 (C=0. 04958mg/ml)。精密吸取lOiil，注入液相色谱仪，测定，见图5。
[0031] ④供试品溶液的制备 取本品适量(批号=20110714)，除去包衣，研细，备用。
[0032] ⑤提取溶剂的选择 取上述粉末〇. 15g，共8份，精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇、80%甲醇、50%甲醇、 20%甲醇20ml，超声45分钟，放冷，补充相应的溶剂至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。精 密吸取对照品溶液10 与供试品溶液10Ul，注入液相色谱仪，测定并计算，结果见表1。
[0033]表1提取溶剂选择结果比较表
【权利要求】
1. 一种复方矮地茶片的定性定量检测方法，其特征在于包括（1)采用显微鉴别矮地 茶，采用薄层色谱法鉴别矮地茶、野菊花、甘草，（2)采用高效液相色谱法测定矮地茶中岩白 菜素的含量，所述定性定量检测方法包含如下步骤： (1) 鉴别： 矮地茶的显微鉴别包括下列步骤；取本品，置显微镜下观察；螺纹导管直径7. 5? 25 y m，纤维成束，壁较厚，草酸巧方晶直径7. 5?26 y m (矮地茶）； 矮地茶的薄层鉴别包括下列步骤；取本品2片，除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声处 理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液；另取岩白菜素对照品适量，加甲醇 制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录 VI B)试验，吸取上述两种溶液3?5W，分别点于同一娃胶G薄层板上，W石油離（60? 9(TC)-己酸己醋-甲醇（9 : 8 : 2)为展开剂，展开，取出，瞭干，喷^1%立氯化铁-1%铁 氯化钟（1 : 1)的混合溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点； 野菊花的薄层鉴别包括下列步骤；取本品3片，除去包衣，研细，加甲醇15ml，超声处理 30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液；另取蒙花巧对照品适量，加甲醇制成每 1ml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液1?2W，分别点于同一聚醜胺薄膜上，W己酸己醋-下丽-H氯甲 焼-甲酸-水（15 : 15 : 6 : 4 : 1)为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W 2% H氯化铅溶液， 在105C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； 甘草的鉴别包括下列步骤；取本品20片，除去包衣，研细，加己離40ml，超声处理15分 钟，滤过，弃去己離液，药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使 溶解，用W水饱和的正下醇振摇提取3次，每次20ml，合并正下醇提取液，用W正下醇饱和 的水洗涂3次，每次20ml，弃去水液，取正下醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品 溶液；另取甘草对照药材Ig，加己離40ml，超声处理15分钟，滤过，弃去己離液，药渣加甲 醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用W水饱和的正下醇振摇 提取3次，每次20ml，合并正下醇提取液，用W正下醇饱和的水洗涂3次，每次20ml，弃去水 液，取正下醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各3?5 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板 上，使成条状，W己酸己醋-甲酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)为展开剂，展开，取出，瞭 干，喷W 10%硫酸己醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视；供试 品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； (2) 含量测定： 矮地茶中岩白菜素的含量测定方法包括下列步骤：照高效液相色谱法（中国药典2010 年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W甲醇-水 (20 : 80)为流动相；检测波长为275nm，理论板数按岩白菜素峰计算应不低于3000; 对照品溶液的制备；取岩白菜素对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含50嗦 的溶液，即得； 供试品溶液的制备；取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0. 15g，精密称定，置 25ml量瓶中，加80 %甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率40曲Z )45分钟，放冷，加80 %甲 醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得： 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 复方矮地茶片每片含矮地茶W岩白菜素（CwHieOg)计，不得少于1.5mg。
【文档编号】G01N30/02GK104345117SQ201310318365
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年7月26日 优先权日:2013年7月26日
【发明者】辛秀, 谷陟欣, 张妮瑜, 欧金秀, 郗瑞云, 袁莉, 朱丽, 颜冬兰 申请人:九芝堂股份有限公司