一种清肝片的定性定量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种清肝片的定性定量检测方法，改进了原有清肝片中茵陈的定性鉴定方法，增加了：（1）采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；（2）采用薄层色谱法，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有板蓝根；（3）采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量。与现有技术相比，本发明方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，本发明方法精密度高，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了清肝片的质量可控性和稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明的清肝片的定性定量检测方法，既可以用于控制清肝片的质量，又可以用来控制相同处方的其他剂型如胶囊、颗粒等剂型的质量。
【专利说明】一种清肝片的定性定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药【技术领域】，具体涉及一种清肝片的质量控制方法。
【背景技术】
[0002] 清肝片由板蓝根、茵陈、甘草组成，具有清热解毒，除湿利胆的功效，可用于感冒发 热，咽喉肿痛，腮腺炎，湿热黄疸等病症。该产品的质量标准收载于《中华人民共和国卫生部 药品标准》中药成方制剂第3册，标准编号WS3-B-0626-91，该标准中仅有茵陈和甘草的定性 鉴别方法，没有任何定量检测方法，不利于控制清肝片的产品质量。国家中成药标准汇编内 科肝胆分册中收载了清肝片，该标准中有茵陈、甘草的定性鉴别方法和甘草酸的含量测定 方法，但是对君药板蓝根既没有进行定性鉴别也没有定量研究，且仅有甘草酸1个有效成 份的含量测定。时珍国医国药2007年第18卷第1期《清肝片的质量标准研究》记载了清 肝片的质量控制方法，对板蓝根、茵陈、甘草进行了定性鉴别研究，对甘草酸进行了含量测 定，但没有对原粉入药的板蓝根进行显微鉴别，板蓝根与茵陈是分开进行鉴别，且仅有1个 有效成份的含量测定。现有质量标准不能有效的控制清肝片的质量，从而将影响该产品的 生产和质量保证及其临床疗效。
[0003]
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于：提供一种清肝片的定性定量检测方法。本发明针对现有控制 标准的不足，对清肝片的质量控制方法进行了研究，改进了原有清肝片中茵陈的定性鉴定 方法，增加了 ：（1)采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；（2)采用薄层色谱法，以茵陈药材 为对照药材，以靛玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；（3)采用高效液相色谱法 测定茵陈中绿原酸和甘草中甘草酸的含量。本发明所提供的定性定量检测方法，提高了清 肝片的质量控制标准，从而保证了该药的质量和临床疗效。
[0005]本发明是这样实现的： 一种清肝片的定性定量检测方法，包括甘草的薄层色谱法的定性鉴别，还包括①采用 显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；②采用薄层色谱法，以茵陈药材为对照药材，以靛玉红为 对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；③采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸和甘草 中甘草酸的含量；所述定性定量检测方法包含如下步骤： (1) 取本品，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干， 残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0. 3~lg，同法制成对照药材溶液；照 薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5~15iU，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液=4飞：1. 51. 5:0. 51. 5为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与 对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2) 取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细 短，导管直径疒51ym;木纤维多成束或单个散在，直径14~20ym，微木化，纹孔及孔沟明 显； (3) 取本品，除去包衣，研细，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解， 作为供试品溶液。另取茵陈对照药材l~3g，同法制成茵陈对照药材溶液。再取靛玉红对照 品，加乙醇制成溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三 种溶液各5~15yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙酯-丙 酮=5~9:0. 2、. 7:1. 5~3. 5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与 靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以5%氢氧化钾溶液，置紫外光灯 (365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点； (4) 甘草酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙 腈-0. 01?0. 03mol/L磷酸溶液（30?50:70?50)为流动相；流速为0. 5?I.OmL/min;检测波长 为250nm;柱温25~35°C;理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70%乙醇制成每Iml含甘草酸铵 40Ug的溶液，即得(折合甘草酸为39. 2yg); 供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50~80%乙醇， 称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用5(T80%乙醇补足减失的重量， 摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10Ul，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16)计，不得少于0. 4mg; (5)绿原酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测 定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙 腈-0. 01~0. 03mol/L磷酸溶液（5~15:95~85)为流动相；流速为0. 5~1.OmL/min;检测波长 为327nm;柱温25~35°C;理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000 ; 对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70 %乙醇制成每Iml含 绿原酸〇.Olmg的溶液；即得； 供试品溶液的制备：取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入5(T80%乙醇， 称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用5(T80%乙醇补足减失的重量， 摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10Ul，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含茵陈以绿原酸（C16H18O9)计，不得少于0. 12mg。
[0006] 为更好的实现本发明，本发明清肝片的的定性定量检测方法，可进一步优化为： (1)取本品5~15片，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇5~15ml，放置0. 5~1. 5小时，时 时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇l~3ml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照 药材〇. 3~lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB) 试验，吸取上述两种溶液各5~15yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试 液=4飞：I. 5?2. 5:0. 5?1. 5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105°C加 热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2) 取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细 短，导管直径疒51ym;木纤维多成束或单个散在，直径14~20ym，微木化，纹孔及孔沟明 显； (3) 取本品5?15片，除去包衣，研细，加乙醇15飞0ml，超声处理3(T60分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加乙醇l~3ml使溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材l~3g，同法制成茵陈 对照药材溶液。再取靛玉红对照品，加乙醇制成每Iml中含0. 05~0. 2mg的溶液。照薄层色 谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5?15ia，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以石油醚（60?90°C)-乙酸乙酯-丙酮=5、: 0. 2、. 7:1. 5?3. 5为展开 齐IJ，展开，取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；喷以5%氢氧化钾溶液，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在 与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4) 甘草酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙 腈：0. 01?0. 03mol/L磷酸溶液（30?50:70?50)为流动相；流速为0. 5?I.OmL/min;检测波长 为250nm;柱温25~35°C;理论板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70 %乙醇制成每Iml含甘草酸铵 40Ug的溶液，即得(折合甘草酸为39. 2yg); 供试品溶液的制备：取本品5~20片，除去包衣，研细，取约0. 2~1.Og，置具塞锥形瓶中， 精密加入50?80%乙醇2(T50ml，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷， 用50~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10Ul，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16)计，不得少于0. 4mg; (5)绿原酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测 定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙 腈-0. 01~0. 03mol/L磷酸溶液（5~15:95~85)为流动相；流速为0. 5~1.OmL/min;检测波长 为327nm;柱温25~35°C;理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000 ; 对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70%乙醇制成每Iml含 绿原酸〇.Olmg的溶液；即得； 供试品溶液的制备：取本品5~20片，除去包衣，研细，取约0. 2~1. 0g，置具塞锥形瓶中， 精密加入50?80%乙醇2(T50ml，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷， 用50~80%乙醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10Ul，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含茵陈以绿原酸（C16H18O9)计，不得少于0. 12mg。
[0007] 为更好的实现本发明，本发明清肝片的的定性定量检测方法，可再进一步优化 为： (1) 取本品10片，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇10ml，放置1小时，时时振摇，滤 过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇Iml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0. 3g，同 法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述 两种溶液各10U1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液=5:2:1为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱 中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2) 取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细 短，导管直径疒51ym;木纤维多成束或单个散在，直径14~20ym，微木化，纹孔及孔沟明 显； (3) 取本品10片，除去包衣，研细，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材I. 5g，同法制成茵陈对照药材 溶液。再取靛玉红对照品，加乙醇制成每Iml中含0.Img的溶液。照薄层色谱法（中国药 典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10yl，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙酯-丙酮=7:0. 5:2. 5为展开剂，展开，取出，晾干，置日 光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以 5%氢氧化钾溶液，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4) 甘草酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈：〇. 〇17mol/L 磷酸溶液（35:65)为流动相；流速为0. 7mL/min;检测波长为250nm;柱温30°C;理论板数按 甘草酸铵峰计算应不低于2000 ; 对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品适量，加70%乙醇制成每Iml含甘草酸铵 40Ug的溶液，即得(折合甘草酸为39. 2yg); 供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，研细，取约0. 5g，置具塞锥形瓶中，精密加 入70%乙醇25ml，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用70%乙醇补 足减失的重量，摇匀，用〇. 45ym滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10Ul，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含甘草以甘草酸（C42H62O16)计，不得少于0. 4mg; (5) 绿原酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测 定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈：〇. 〇17mol/L磷酸溶液（10:90)为流动相；流速为0. 8mL/min;检测波长为327nm;柱温30°C;理论板数按 绿原酸峰计算应不低于5000 ; 对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加70%乙醇制成每Iml含 绿原酸〇.Olmg的溶液；即得； 供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，研细，取约0. 5g，置具塞锥形瓶中，精密加 入70%乙醇25ml，称定重量，在功率250W，频率50kHz条件下超声处理，放冷，用70%乙醇补 足减失的重量，摇匀，用〇. 45ym滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10Ul，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含茵陈以绿原酸（C16H18O9)计，不得少于0. 12mg。
[0008] 为更好的表明本发明的实质，将本发明的方法学考察详述如下： 1、取本品粉末，用水合氯醛透化后装片，置显微镜下观察：网纹导管较多见，网孔较细 短，导管直径疒51ym;木纤维多成束或单个散在，直径14~20ym，微木化，纹孔及孔沟明 显。见图1。
[0009] 2、取本品10片，除去包衣，研细，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。按处方称取缺茵陈的其他药材，制成缺茵陈的阴 性对照样品，同法制成缺茵陈的阴性对照溶液。按处方称取缺板蓝根的其他药材，制成缺板 蓝根的阴性对照样品，同法制成缺板蓝根的阴性对照溶液。另取茵陈对照药材I. 5g，同法制 成茵陈对照药材溶液。再取靛玉红对照品，加乙醇制成每Iml中含0.Img的溶液。照薄层 色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述五种溶液各10yl，分别点于同 一娃胶G薄层板上，以石油醚（60?90°C)_乙酸乙酯-丙酮=7:0. 5:2. 5为展开剂，展开， 取出，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与靛玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点；喷以5%氢氧化钾溶液，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对 照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2、3。
[0010] 3、取本品10片，除去包衣，研细，加水饱和的正丁醇10ml，放置1小时，时时振摇， 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。按处方称取缺甘草的其他药材， 制成缺甘草的阴性对照样品，同法制成缺甘草的阴性对照溶液。另取甘草对照药材〇. 3g，同 法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述 三种溶液各IOu1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙醇-氨试液（5 : 2 : 1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试 品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图4。
[0011] 4、甘草酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测 定； (1)仪器与试药：Watersl525高效液相色谱仪，Wasters2487检测器，AY220电子分析 天平，CP22? 电子分析天平，C18 柱Inertsil0DS-2 ( 250mm\4.6臟，5|^)，柱温301：，流 动相乙腈-0. 〇17mol/L磷酸溶液（35 : 65)，流速为0. 7ml/min，Empower2色谱工作站；乙 腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
[0012] 甘草酸铵（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110731-200614)。
[0013] (2)对照品溶液的制备： 取甘草酸单铵盐对照品适量，加70%乙醇制成每Iml含甘草酸铵40yg的溶液，即得 (折合甘草酸为39.2yg); (3)流动相的选择 采用高效液相色谱法测定甘草酸的含量时，常用流动相有：①乙腈-〇. 〇17mol/L磷酸 溶液（35:65)、②甲醇-水-醋酸（60:30:5)。分别以两种流动相试验，流动相①所得甘草 酸色谱峰的理论板数高、峰对称性较好，故选择乙腈-o. 017mo1/L磷酸溶液（35:65 )为流动 相。见表1。
[0014]表1流动相选择结果比较表
【权利要求】
1. 一种清肝片的定性定量检测方法，包括甘草的薄层色谱法的定性鉴别，其特征在于 还包括①采用显微鉴定法鉴别清肝片中板蓝根；②采用薄层色谱法，W茵陈药材为对照药 材，W說玉红为对照，鉴别清肝片中含有茵陈和板蓝根；③采用高效液相色谱法测定茵陈中 绿原酸和甘草中甘草酸的含量；所述定性定量检测方法包含如下步骤： (1) 取本品，除去包衣，研细，加水饱和的正下醇，时时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干， 残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0. 3^1g，同法制成对照药材溶液；照 薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5^15 y 1，分别 点于同一娃胶G薄层板上，W正下醇-己醇-氨试液=4?6:1. 5?2. 5:0. 5?1. 5为展开剂，展 开，取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶液，于105C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与 对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2) 取本品粉末，用水合氯酵透化后装片，置显微镜下观察；网纹导管较多见，网孔较细 短，导管直径广51 ym;木纤维多成束或单个散在，直径ir20 ym，微木化，纹孔及孔沟明 显； (3) 取本品，除去包衣，研细，加己醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加己醇使溶解， 作为供试品溶液；另取茵陈对照药材广3g，同法制成茵陈对照药材溶液；再取說玉红对照 品，加己醇制成溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述H 种溶液各5?15 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，W石油離（60?9(TC )-己酸己醋-丙 丽=5、:0. 2^0. 7:1. 5^3. 5为展开剂，展开，取出，瞭干，置日光下检视，供试品色谱中，在与 說玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷W 5%氨氧化钟溶液，置紫外光灯 (365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光 斑点； (4) 甘草酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；己 膳-0. (U?0. 03mol/L磯酸溶液（30?50:70?50)为流动相；流速为0. 5-1. 0血/min ;检测波长 为250nm ;柱温25?35C ;理论板数按甘草酸馈峰计算应不低于2000 ; 对照品溶液的制备；取甘草酸单馈盐对照品适量，加70%己醇制成每1ml含甘草酸馈 40 y g的溶液，即得(折合甘草酸为39. 2 y g); 供试品溶液的制备；取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入5(T80%己醇， 称定重量，在功率250W，频率50曲Z条件下超声处理，放冷，用50?80%己醇补足减失的重量， 摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含甘草W甘草酸（C42He2〇ie)计，不得少于〇.4mg; (5)绿原酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测 定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；己 膳-0.0广0.03111〇1/1磯酸溶液巧?15:95?85)为流动相；流速为0.5?1.0血/111111;检测波长 为327nm ;柱温25^35°C ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000 ; 对照品溶液的制备；取绿原酸对照品适量，置踪色量瓶中，加70%己醇制成每1ml含绿 原酸0. Olmg的溶液；即得； 供试品溶液的制备；取本品，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入5(T80%己醇， 称定重量，在功率250W，频率50曲Z条件下超声处理，放冷，用50?80%己醇补足减失的重量， 摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含茵陈W绿原酸（CieHi8〇9)计，不得少于0. 12mg。
2.根据权利要求1所述清肝片的定性定量检测方法，其特征在于所述定性定量检测方 法包含如下步骤： (1) 取本品5?15片，除去包衣，研细，加水饱和的正下醇5?15ml，放置0. 5?1. 5小时，时 时振摇，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇广3ml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照 药材0. 3^1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液各5^15 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，W正下醇-己醇-氨试 液=4?6:1. 5?2. 5:0. 5?1. 5为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶液，于105°C加 热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2) 取本品粉末，用水合氯酵透化后装片，置显微镜下观察；网纹导管较多见，网孔较 细短，导管直径广51 ym;木纤维多成束或单个散在，直径ir20 ym，微木化，纹孔及孔沟 明显； (3) 取本品5?15片，除去包衣，研细，加己醇15?50ml，超声处理30?60分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加己醇广3ml使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈对照药材广3g，同法制成茵陈 对照药材溶液；再取說玉红对照品，加己醇制成每1ml中含0. 05^0. 2mg的溶液；照薄层色 谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述H种溶液各5?15 y 1，分别点于同 一娃胶G薄层板上，W石油離（60?9(TC )-己酸己醋-丙丽=5?9:0. 2?0. 7:1. 5?3. 5为展开 齐U，展开，取出，瞭干，置日光下检视，供试品色谱中，在与說玉红对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；喷W 5%氨氧化钟溶液，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在 与茵陈对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点； (4) 甘草酸含量测定；照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；己 膳：0.0广0.03111〇1/1磯酸溶液（30?50:70?50)为流动相；流速为0.5?1.0血/111111;检测波长 为250nm ;柱温25?35C ;理论板数按甘草酸馈峰计算应不低于2000 ; 对照品溶液的制备；取甘草酸单馈盐对照品适量，加70%己醇制成每1ml含甘草酸馈 40 y g的溶液，即得(折合甘草酸为39. 2 y g); 供试品溶液的制备；取本品5^20片，除去包衣，研细，取约0. 2^1. Og，置具塞锥形瓶中， 精密加入50?80%己醇20?50ml，称定重量，在功率250W，频率50曲Z条件下超声处理，放冷， 用5(T80%己醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含甘草W甘草酸（C42He2〇ie)计，不得少于〇.4mg; (5)绿原酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；己 膳-0. 01?0. 03mol/L磯酸溶液巧?15:95?蝴为流动相；流速为0. 5?1. 0血/min ;检测波长 为327nm ;柱温25^35°C ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000 ; 对照品溶液的制备；取绿原酸对照品适量，置踪色量瓶中，加70%己醇制成每1ml含绿 原酸0. Olmg的溶液；即得； 供试品溶液的制备；取本品5^20片，除去包衣，研细，取约0. 2^1. Og，置具塞锥形瓶中， 精密加入50?80%己醇20?50ml，称定重量，在功率250W，频率50曲Z条件下超声处理，放冷， 用5(T80%己醇补足减失的重量，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含茵陈W绿原酸（CieHi8〇9)计，不得少于0. 12mg。
3.根据权利要求2所述清肝片的定性定量检测方法，其特征在于所述定性定量检测方 法包含如下步骤： (1) 取本品10片，除去包衣，研细，加水饱和的正下醇10ml，放置1小时，时时振摇，滤 过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0. 3g，同 法制成对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述 两种溶液各10 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，W正下醇-己醇-氨试液=5:2:1为展 开剂，展开，取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶液，于105C加热至斑点显色清晰；供试品色谱 中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2) 取本品粉末，用水合氯酵透化后装片，置显微镜下观察；网纹导管较多见，网孔较 细短，导管直径广51 ym;木纤维多成束或单个散在，直径ir20 ym，微木化，纹孔及孔沟 明显； (3) 取本品10片，除去包衣，研细，加己醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加己醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取茵陈对照药材1. 5g，同法制成茵陈对照药材 溶液；再取說玉红对照品，加己醇制成每1ml中含0. Img的溶液；照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述H种溶液各lOy 1，分别点于同一娃胶G薄层板上， W石油離化0?9(TC )-己酸己醋-丙丽=7:0. 5:2. 5为展开齐U，展开，取出，瞭干，置日光下 检视，供试品色谱中，在与說玉红对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷W 5% 氨氧化钟溶液，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与茵陈对照药材色谱相应的 位置上，显相同颜色的英光斑点； (4) 甘草酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；己膳-0. 〇17mol/L 磯酸溶液（35:65)为流动相；流速为0. 7mL/min ;检测波长为250nm ;柱温3(TC;理论板数按 甘草酸馈峰计算应不低于2000 ; 对照品溶液的制备；取甘草酸单馈盐对照品适量，加 70%己醇制成每1ml含甘草酸馈 40 y g的溶液，即得(折合甘草酸为39. 2 y g); 供试品溶液的制备；取本品20片，除去包衣，研细，取约0. 5g，置具塞锥形瓶中，精密加 入70%己醇25ml，称定重量，在功率250W，频率50曲Z条件下超声处理，放冷，用70%己醇补 足减失的重量，摇匀，用0. 45 y m滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含甘草W甘草酸（C42He2〇ie)计，不得少于〇.4mg; (5)绿原酸含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；己膳-0. 〇17mol/L 磯酸溶液（10:90)为流动相；流速为0. 8mL/min ;检测波长为327nm ;柱温3(TC;理论板数按 绿原酸峰计算应不低于5000 ; 对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，置踪色量瓶中，加70%己醇制成每1ml含 绿原酸0. Olmg的溶液；即得； 供试品溶液的制备；取本品20片，除去包衣，研细，取约0. 5g，置具塞锥形瓶中，精密加 入70%己醇25ml，称定重量，在功率250W，频率50曲Z条件下超声处理，放冷，用70%己醇补 足减失的重量，摇匀，用0. 45 y m滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 本品每片含茵陈W绿原酸（CieHi8〇9)计，不得少于0. 12mg。
【文档编号】G01N30/06GK104345108SQ201310319584
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年7月29日 优先权日:2013年7月29日
【发明者】郗瑞云, 谷陟欣, 张妮瑜, 欧金秀, 辛秀, 刘淑妦, 袁莉, 朱丽 申请人:九芝堂股份有限公司