中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱的制作方法
【专利摘要】本发明首次建立了中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立及指纹图谱，属于医药【技术领域】，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相以乙腈-0.4％的1-庚烷磺酸钠溶液(醋酸调pH至4.0)梯度洗脱，柱温为45℃，流速为1.0ml/min，紫外检测波长为205nm；(4)测定本发明的有益效果在于：以吐根的有效特征成分盐酸吐根碱为对照，采用高效液相色谱法建立了吐根的标准指纹图谱，能有效、准确的监控吐根及其制剂的质量，方法具有简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点。
【专利说明】中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱。
【背景技术】
[0002]吐根为菌草科植物Cephaelis ipecacuanha (Brot.) A.Rich.或 Cephaelisacuminate Karsten的干燥根莖,原产于巴西,在其他热带气候地区也有栽培；具有止咳化痰、催吐、抗阿米巴病等功效；有研究表明其主要药理活性成分为生物碱类化学成分。目前吐根药材、吐根粉和吐根糖浆的质量标准在美国药典、日本药典和欧洲药典均有收载。各国药典中多以吐根碱和吐根酚碱的含量做为吐根药材及其制剂的主要质量评价指标，其中在美国药典及欧洲药典中主要是采用示差折光光度法检测吐根碱和吐根酚碱的含量、采用酸碱滴定的方法测定总生物碱的含量；日本药典(JP16)则采用了高效液相色谱法检测吐根碱和吐根酚碱的含量。但是，吐根作为一种中草药，其药效并不是来自任何单一的活性成分，其药效作用应是多种活性成分共同协作的结果。因此，对于吐根及其制剂目前多采用吐根碱和吐根酚碱成分进行质量控制的方法并不能准确全面反映产品的内在质量。
【发明内容】
[0003]为简便、快捷、科学、准确、多指标控制吐根药材及其制剂的质量，本发明提供了中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱，通过获取中药吐根及其制剂的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，以有效的控制中药吐根及其制剂的质量，保证临床疗效及安全用药。
[0004]本发明中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法及指纹图谱，所采用的步骤包括如下:
[0005](I)对照品溶液的制备
[0006]精密称取盐酸吐根碱对照品，用甲醇制成每Iml含盐酸吐根碱10-30 μ g的溶液，作为对照品溶液。
[0007](2)供试品溶液的制备
[0008]取吐根粉末，置于容量瓶中，加体积比为1: 200的盐酸-60%甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂置容量瓶中，加甲醇水溶液溶解并定容，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液。
[0009]进一步优化为:取吐根粉末0.1-0.5g，置于50_100ml容量瓶中，加体积比为
I: 200的盐酸-60%甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇勻，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.2-lml，加30-70%甲醇水溶液溶解并定容至50-100ml，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液。
[0010]更优化为:取吐根粉末0.25g，置于IOOml容量瓶中，加体积比为1: 200的盐酸-60%甲醇水溶液，密塞，静置浸润30分钟后，以功率250w，频率40kHz超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇勻，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.5ml，加60%甲醇水溶液溶解并定容至IOOml ;摇匀，离心，取上清即得供试品溶液。
[0011]⑶色谱条件
[0012]色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以乙腈-0.4%的1-庚烷磺酸钠溶液(醋酸调PH至4.0)梯度洗脱，梯度洗脱程序见表I，柱温为45 V，流速为1.0ml/min,紫外检测波长为205nm，；理论板数按盐酸吐根碱峰计算应不低于3000 ；
[0013]表1:乙腈-0.4%的1-庚烷磺酸钠溶液(醋酸调pH至4.0)梯度洗脱
[0014]
【权利要求】
1.中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)对照品溶液的制备:精密称取盐酸吐根碱对照品，用甲醇制成每Iml含盐酸吐根碱10-30 μ g的溶液，作为对照品溶液； (2)供试品溶液的制备:取吐根粉末，置于容量瓶中，加体积比为1: 200的盐酸-60%甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂置容量瓶中，加甲醇水溶液溶解并定容，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液； (3)色谱条件:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以乙腈-0.4%的1-庚烷磺酸钠溶液，梯度洗脱，柱温为45°C，流速为1.0ml/min,紫外检测波长为205nm ； (4)测定:精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按步骤(3)色谱条件测定，即得指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于: 步骤(2)供试品溶液的制备:取吐根粉末0.1-0.5g，置于50-100ml容量瓶中，加体积比为1: 200的盐酸-60%甲醇水溶液，密塞，静置浸润，超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.2-lml，加30-70%甲醇水溶液溶解并定容至50-100ml，摇匀，离心，取上清即得供试品溶液； 步骤(4)测定:精密吸取各供试品溶液5-25 μ 1，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，即得吐根指纹图谱。
3.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于: 步骤(2)供试品溶液的制备:取吐根粉末0.25g，置于IOOml容量瓶中，加体积比为I: 200的盐酸-60%甲醇水溶液，密塞，静置浸润30分钟后，以功率250w，频率40kHz超声处理，放冷后，加甲醇定容至刻度摇匀，离心，取上清即得供试品溶液；或取吐根制剂0.5ml，加60%甲醇水溶液溶解并定容至IOOml ;摇匀，离心，取上清即得供试品溶液； 步骤(4)测定:精密吸取各供试品溶液10 μ 1，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，即得吐根指纹图谱。
4.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于:步骤(3)中所述的梯度洗脱，程序如下:
5.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于:所述中药吐根及其制剂的指纹图谱有11个共有峰，其中11号峰盐酸吐根碱为参照峰，各峰相对保留时间和相对峰面积分别为:相对保留时间:1号峰:0.116~0.124，2号峰:0.135~0.142，3号峰:0.195~0.201，.4 号峰:0.221 ~0.229,5 号峰:0.285 ~0.291,6 号峰:0.348 ~0.356,7 号峰:0.496 ~.0.504，8 号峰:0.790 ~0.798，9 号峰:0.811 ~0.819，10:0.882 ~0.891，11 号峰:1.000 ；相对峰面积:1号峰:0.017~0.078，2号峰:0.008~0.030，3号峰:0.011~0.045，.4 号峰:0.013 ~0.020,5 号峰:0.710 ~1.421,6 号峰:0.066 ~0.082,7 号峰:0.019 ~.0.071，8 号峰:0.008 ~0.035，9 号峰:0.004 ~0.049，10 号峰:0.201 ~2.522，11 号峰:.1.000。
6.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于:其制剂指吐根流浸膏、吐根浸膏或吐根酊剂。
7.根据权利要求6所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于:吐根流浸膏每Iml相当Ig生药材。
8.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于:所述步骤(2)中离心条件为12000r/min离心10~15min。
9.根据权利要求1所述的中药吐根及其制剂高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于:所述指纹图谱的建立方法，采用国家药典委员会制定的《中药指纹图谱相似度计算软件》(2004)，经过多点校正，色谱峰的匹配，计算供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱的相似度；指纹图谱相似度计算参数设置为:时间宽度为0.5s ;校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰，5号峰:0.285~0.291，10号峰:0.882~0.891，11号峰:1.000。
【文档编号】G01N30/02GK103454353SQ201310336998
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年7月30日 优先权日:2013年2月6日
【发明者】贾放, 孙晔, 张志生, 边婧, 何珊珊, 杜丽丽, 朱长兵, 黄日羡 申请人:广东先强药业股份有限公司