一种岩黄连总碱的质量检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种岩黄连总碱的质量检测方法，该方法包括对该有效部位的薄层鉴别，水分、炽灼残渣、重金属及砷盐的检查，采用紫外分光光度法测定总生物碱含量以及采用高效液相色谱法同时测定去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。该方法具有较强的专属性和良好的重现性，能有效控制岩黄连总碱的质量，确保产品的安全有效、质量可控。
【专利说明】一种岩黄连总碱的质量检测方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于中药分析领域，涉及一种中药有效部位的质量检测方法，具体涉及一种岩黄连总生物碱的质量检测方法。
【背景技术】[0003]岩黄连为S粟科植物石生黄堇Corydalis saxicola Bunting的全草,是龄、桂高寒山区珍贵的中草药材。本品味苦、性凉，具清利湿热，散瘀消肿功效。用于疮疖肿毒，肝炎，肝硬化，肝癌。
[0004]迄今为止对岩黄连的化学成分的研究不多，报道的现已分离鉴定出的化合物主要是生物碱，尚未有其他类化合物的报道。1980年，柯珉珉最早对岩黄连的化学成分进行研究，应用PH梯度分离，在强碱性部位分得水溶性季铵碱类生物碱小檗碱(berberine)及脱氢卡维丁 (岩黄连碱，dehydrocavidine)。K.H.Janbaz等于2003年报道,水溶性季铵碱类化合物，如小檗碱，具有肝损伤保护作用。
[0005]岩黄连中主要有效成分是以脱氢卡维丁为代表的生物碱类化合物，而这类化合物具有潜在的抗HBV活性和肝保护活性。
[0006]经检索，目前关于岩黄连的专利主要集中在岩黄连生物碱的制备工艺上，没有关于质量控制的相关专利。中药长期以来，质量难以有效控制，有效控制中药产品的质量是一个重大的课题，现有技术中采用的方法不完整，少数针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制质量的目的。以上岩黄连总碱由于缺少系统的质量控制方法，难以控制其质量，以致正常的临床用药及疗效无法保证。
[0007]目前有关岩黄连制剂的质量标准研究中，上市品种岩黄连注射液的质量标准是采用薄层色谱定性鉴别脱氢卡维丁和盐酸小檗碱，采用高效液相色谱法测定脱氢卡维丁的含量。文献报道的岩黄连片和岩黄连直肠栓都是采用的与岩黄连注射液同样的方法建立的质量标准。本发明针对现有技术的不足，采用新的手段对岩黄连总碱的质量进行控制，特别是采用高效液相色谱法同时测定该药物中多种成分的含量，解决了岩黄连总碱质量控制的难题，本发明提供了一种实用的质量控制方法。该方法提供了薄层鉴别，水分、炽灼残渣、重金属含量等检查，紫外分光光度法测定药物中岩黄连总碱和高效液相色谱法测定药物中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱成分的含量等质量控制方法，提高后的质量标准能更好地控制岩黄连总碱的质量，本发明的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现中药安全有效、质量可控。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供一种岩黄连的质量控制方法。为了达到这个目的，采用如下技术方案:[0009]一种岩黄连总碱的质量检测方法，该方法包括以下步骤:
[0010](I)以岩黄连为对照药材，以脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品，对岩黄连总碱进行薄层鉴别；
[0011](2)对岩黄连总碱的水分、炽灼残渣、重金属及砷盐进行检查；
[0012](3)采用紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量；
[0013](4)采用高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。
[0014]上述岩黄连总碱的质量检测方法，岩黄连总碱的薄层鉴别方法步骤为:
[0015]a.供试品溶液的制备:取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；
[0016]b.对照药材溶液的制备:取岩黄连对照药材0.1g,加5ml甲醇，超声处理30分钟，滤过,滤液作为对照药材溶液；
[0017]c.对照品溶液的制备:取脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml含脱氢卡维丁 0.2mg、盐酸巴马汀0.2mg、盐酸小檗碱0.1mg的混合液,作为混合对照品溶液；
[0018]d.薄层条件及结果:照中国药典2010年版一部附录VI B记载的薄层色谱法进行试验，吸取上述三种溶液各5 μ 1，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为9: 2: 5: 3的乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液，及比例为7: I: 2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，吹干，置波长为365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0019]上述岩黄连总碱的质量检测方法，岩黄连总碱水分、炽灼残渣、重金属及砷盐的检查方法步骤为:
[0020]a.照中国药典2010年版一部附录IX H第一法记载的水分测定法对岩黄连总碱的水分进行测定，岩黄连总碱中水分不得超过5.0% ；
[0021]b.照中国药典2010年版一部附录IX J记载的炽灼残渣测定法对岩黄连总碱的炽灼残渣进行测定，岩黄连总碱中炽灼残渣不得过2.0% ；
[0022]c.中国药典2010年版一部附录IX E第二法记载的重金属检查方法进行测定，砷盐的检查按中国药典2010年版一部附录IX F记载的第一法古蔡氏法进行测定，岩黄连总碱中重金属不得过百万分之十，砷盐不得过百万分之二。
[0023]上述岩黄连总碱的质量检测方法，紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量步骤为:
[0024]a.对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥过夜的脱氢卡维丁对照品约10mg，精密称定，置IOOml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为贮备液，备用；
[0025]b.标准曲线的制备精密量取对照品贮备液0.3ml, 0.4ml, 0.5ml, 0.6ml, 0.8ml，1.0ml，分别置IOml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度,摇匀；以1%盐酸甲醇溶液为空白，照中国药典2010年版一部附录V A记载的紫外-可见分光光度法，在347nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线；
[0026]c.供试品溶液的制备取本品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，作为样品贮备液，备用；精密吸取样品贮备液1.0ml置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即得；
[0027]d.测定法:取供试品溶液，以1%盐酸甲醇溶液为空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中脱氢卡维丁的量，计算，即得。本品含总生物碱以脱氢卡维丁C21H2304N 计，不得少于 50.0%。
[0028]上述岩黄连总碱的质量检测方法，高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量步骤为:
[0029]a.色谱条件与系统适用性试验米用Hanbon 0DS-2C18,规格为250mmX4.6mm,5μπι的色谱柱，以比例为18.5: 81.5的乙腈-0.0lmol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，柱温30°C,检测波长347nm,流速1.0ml/min,进样量10 μ I,采样时间50min ；
[0030]b.对照品溶液的制备精密称取去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液，分别精密取各储备液适量，配制成混合标准品储备液，以上6个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为 0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292，0.0174mg/mL ；
[0031]c.供试品溶液的制备供试品溶液制备取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇至刻度，摇匀，过0.45 μ m直径微孔滤膜，取续滤液，即得；
[0032]d.测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得，本品含去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维汀、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱总量不得少于32.0%。
[0033]有益效果:
[0034]本发明对岩黄连总碱提出了质量控制方法，该方法提供了鉴别、检查、紫外分光光度法和高效液相色谱法同时测定药物中岩黄连总碱及去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量，提高后的质量标准能更好地控制岩黄连的质量，本发明的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现中药安全有效、质量可控。
【专利附图】
【附图说明】
[0035]图1为本发明供试样品在乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(9: 2: 5: 3)展开条件下的薄层色谱图，其中条带从左至右依次为:混合对照品、岩黄连对照药材、样品I (批号:20071014)、样品 I (批号:20071018)、样品 I (批号=20071022)；
[0036]图2为本发明供试样品在正丁醇-冰醋酸-水(7: I: 2)展开条件下的薄层色谱图，其中条带从左至右依次为:混合对照品、岩黄连对照药材、样品I (批号:20071014)、样品 I (批号:20071018)、样品 I (批号=20071022)；
[0037]图3为本发明去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱混合对照品液相色谱图(图中I为去氢碎叶紫堇碱，2为脱氢甲卡维汀，3为药根碱，4为脱氢卡维丁,5为盐酸巴马汀,6为盐酸小檗碱)；
[0038]图4为本发明岩黄连总碱供试品(批号:20071014)液相色谱图(标号同图3)。【具体实施方式】
[0039]本发明所述的倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法是经过大量筛选试验得到的最优方案，结合【具体实施方式】，对本发明进一步说明如下:
[0040]1.岩黄连总碱薄层鉴别:
[0041]L I仪器、试药与试剂
[0042]FAl 104型万分之一电子分析天平(上海天平仪器厂)；紫外分析仪WD-9403C型(北京市六一仪器厂)；水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)；硅胶G、H薄层板(青岛海洋化工厂)；岩黄连总碱(批号:20071014、20071018、20071022);脱氢卡维丁对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:111667-200601)；盐酸巴马汀对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:110732-200506);盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:110713-200508)。正丁醇为分析纯(上海实意化学试剂有限公司，批号:20080227);乙酸乙酯为分析纯(国药集团化学试剂有限公司，批号:T20090406);氨水为分析纯(南京化学试剂有限公司，批号:080920759);冰醋酸为分析纯(国药集团化学试剂有限公司，批号:T20090305);浓硫酸为分析纯(上海久亿化学试剂有限公司，批号:091022)；乙醇为分析纯(南京化学试剂有限公司，批号:09081310871);乙醚为分析纯(上海中试化工总公司，批号:20100415);正己烷为分析纯(上海试四赫维化工有限公司，批号:0904102)；二氯甲烷为分析纯(上海凌峰化学试剂有限公司，批号:042101);水为双重蒸馏水。
[0043]1.2鉴别实验方法
[0044]岩黄连总生物碱薄层色谱鉴别条件为:取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取岩黄连对照药材0.lg，加5ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取脱氢卡维丁对照品、盐酸巴马汀对照品、盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml含脱氢卡维丁 0.2mg、盐酸巴马汀0.2mg、盐酸小檗碱0.1mg的混合液，作为混合对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 μ 1，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(9: 2: 5: 3)及正丁醇-冰醋酸-水(7: I: 2)为展开剂，展开，取出，吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1、2。
[0045]2 检查:
[0046]参照《中国药典》及相关技术要求，对本品的水分、炽灼残渣、重金属及砷盐进行了检查和测定。
[0047]2.1水分照水分测定法(2010年版《中国药典》一部附录IX H第一法)测定，结果见表I。
[0048]表I岩黄连总生物碱水分测定值
[0049]
【权利要求】
1.一种岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤: (1)以岩黄连为对照药材，以脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品，对岩黄连总碱进行薄层鉴别； (2)对岩黄连总碱的水分、炽灼残渣、重金属及砷盐进行检查； (3)采用紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量； (4)采用高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。
2.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于岩黄连总碱的薄层鉴别方法步骤为: a.供试品溶液的制备:取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液； b.对照药材溶液的制备:取岩黄连对照药材0.lg，加5ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液； c.对照品溶液的制备:取脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每Iml含脱氢卡维丁 0.2mg、盐酸巴马汀0.2mg、盐酸小檗碱0.1mg的混合液,作为混合对照品溶液； d.薄层条件及结果:照中国药典2010年版一部附录VIB记载的薄层色谱法进行试验，吸取上述三种溶液各5 μ 1，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为9: 2: 5: 3的乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液，及比例为7:1: 2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，吹干，置波长为365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于岩黄连总碱水分、炽灼残渣、重金属及砷盐的检查方法步骤为: a.照中国药典2010年版一部附录IXH第一法记载的水分测定法对岩黄连总碱的水分进行测定，岩黄连总碱中水分不得超过5.0% ； b.照中国药典2010年版一部附录IXJ记载的炽灼残渣测定法对岩黄连总碱的炽灼残渣进行测定，岩黄连总碱中炽灼残渣不得过2.0% ； c.中国药典2010年版一部附录IXE第二法记载的重金属检查方法进行测定，砷盐的检查按中国药典2010年版一部附录IX F记载的第一法古蔡氏法进行测定，岩黄连总碱中重金属不得过百万分之十，砷盐不得过百万分之二。
4.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于紫外分光光度法测定岩黄连总碱中总生物碱的含量步骤为: a.对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥过夜的脱氢卡维丁对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为贮备液，备用； b.标准曲线的制备精密量取对照品贮备液0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml,0.8ml, 1.0ml，分别置IOml量瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀；以1%盐酸甲醇溶液为空白，照中国药典2010年版一部附录V A记载的紫外-可见分光光度法，在347nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线； c.供试品溶液的制备取本品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，作为样品贮备液，备用；精密吸取样品贮备液1.0ml置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即得； d.测定法:取供试品溶液，以1%盐酸甲醇溶液为空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中脱氢卡维丁的量，计算，即得。本品含总生物碱以脱氢卡维丁 C21H2304N计，不得少于50.0%。
5.根据权利要求1所述岩黄连总碱的质量检测方法，其特征在于高效液相色谱法同时测定岩黄连总碱中去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量步骤为: a.色谱条件与系统适用性试验米用Hanbon0DS-2C18,规格为250mmX4.6mm, 5 μ m的色谱柱，以比例为18.5: 81.5的乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液为流动相，柱温30°C，检测波长347nm,流速1.0ml/min,进样量10 μ I,采样时间50min ； b.对照品溶液的制备精密称取去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液，分别精密取各储备液适量，配制成混合标准品储备液，以上6个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为.0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292,0.0174mg/mL ； c.供试品溶液的制备供试品溶液制备取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加1%盐酸甲醇至刻度，摇匀，过0.45 μ m直径微孔滤膜，取续滤液，即得； d.测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得，本品含去氢碎叶紫堇碱、脱氢甲卡维汀、药根碱、脱氢卡维汀、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱总量不得少于32.0%。
【文档编号】G01N33/15GK103575849SQ201310408106
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年9月9日 优先权日:2013年9月9日
【发明者】季德, 陆兔林, 池玉梅, 毛春芹, 谢辉, 李林, 殷放宙, 周渊, 刘会珍, 李惠连 申请人:南京中医药大学