一种检测雌酚的电化学免疫检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种能检测雌酚，包括三种人工合成的具有类似雌性激素作用的化合物，即己烯雌酚、己烷雌酚和双酚A的电化学免疫检测方法。所述的检测方法为：首先制备纳米金沉积并采用石墨烯/雌酚/壳聚糖复合物修饰的电化学传感器，然后以K3[Fe(CN)6]为探针，基于己烯雌酚抗体对己烯雌酚、己烷雌酚和双酚A的交叉免疫反应，实现对这三种雌酚的检测。本发明提供的方法检测己烯雌酚的检测限为0.1ng/mL，线性范围为1~2500ng/mL；检测己烷雌酚的检测限为0.3ng/mL，线性范围为1~3000ng/mL；检测双酚A的检测限为0.2ng/mL，线性范围为1~3000ng/mL。
【专利说明】一种检测雌酚的电化学免疫检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品安全检测和分析化学【技术领域】，涉及一种能检测三种人工合成的具有类似雌性激素作用的化合物，即己烯雌酚、己烷雌酚和双酚A (以下简称雌酚)的检测方法，具体的说是一种基于抗体交叉反应的电化学免疫检测方法。
【背景技术】 [0002]己烯雌酌.(diethylstiIbestroI, DES)和己烧雌酌.(hexestrol, HEX)(结构见式I)属于1，2-二苯乙烯类药物，它们是人工合成的雌激素类物质。二苯乙烯类激素具有促进动物生长、提高饲料转化率和减少脂肪合成等作用，20世纪60年代曾为各国官方批准使用的促生长剂，用于畜牧业生产。但是滥用1，2-二苯乙烯类药物会导致动物生理系统功能失调，甚至不可逆的病变，并通过食物链最终危害人类健康，长期摄入会干扰人体正常的激素平衡，导致机体代谢紊乱、发育异常肿瘤、女性乳腺癌和子宫内膜异位、胎儿畸形等严重的问题，在我国和欧美等国家都禁止在动物养殖过程中使用。
[0003]双酚A (bisphenol A，BPA)(结构见式I)在工业上被用来合成聚碳酸酯(PC)和环氧树脂等材料。60年代以来就被用于制造塑料(奶)瓶、幼儿用的吸口杯、食品和饮料(奶粉)罐内侧涂层。BPA无处不在，从矿泉水瓶、医疗器械到食品包装的内里，都有它的身影。每年，全世界生产2700万吨含有BPA的塑料。BPA能导致内分泌失调，威胁着胎儿和儿童的健康。癌症和新陈代谢紊乱导致的肥胖也被认为与此有关。欧盟认为含双酚A的奶瓶会诱发性早熟，从2011年3月2日起，禁止生产含双酚A的婴儿奶瓶。
【权利要求】
1.一种检测雌酚的电化学免疫检测方法，包括以下步骤: 1)电化学免疫传感器的制备:首先在经过打磨、抛光和清洗的玻碳电极表面沉积金纳米粒子；然后将石墨烯/雌酚/壳聚糖混合液滴涂于纳米金沉积的玻碳电极表面，制得所述的电化学免疫传感器； 2)标准溶液的配制:配制一组包括空白标样在内的含有不同已知浓度的待测雌酚、pH为7.4的磷酸缓冲溶液为标准溶液，且其中含有相同浓度的己烯雌酚抗体； 3)工作曲线的建立:将所述免疫传感器分别浸入雌酚标准溶液中孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗免疫传感器，在K3 [Fe (CN)6]溶液中进行差分脉冲伏安(DPV)扫描，记录响应电流；空白标样的响应电流为Itl,含有待测雌酚的标样的响应电流为Ix，响应电流的增加值Λ I等于Ix与Itl的差值；将所述Λ I与标准溶液中雌酚的浓度C绘制成Λ 1-C工作曲线，采用线性回归法得到△ ι-c线性回归方程； 4)雌酚的测定:将待测样品配制为含有与步骤2)相同浓度的己烯雌酚抗体的磷酸缓冲溶液，按照与步骤3)相同的方法对所述免疫传感器进行孵育和差分脉冲伏安扫描，记录响应电流；根据响应电流的增加值△ I和△ 1-C线性回归方程，得到雌酚的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的雌酚为己烯雌酚、己烷雌酚和双酚Α。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的方法中，步骤4)采用标准加入法测定。.
【文档编号】G01N33/53GK103472118SQ201310444291
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月26日 优先权日:2013年9月26日
【发明者】邵科峰, 王传现, 赵波, 张芹, 吴珺 申请人:南京师范大学