一种检测Anti-IgG浓度的方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测Anti-IgG浓度的方法。以3,5-二溴水杨醛缩二乙烯三胺双席夫碱镍配合物为电活性物质，通过涂滴法制备Anti-IgG电化学免疫传感器，Anti-IgG浓度在0.01~260μg/L范围内与还原峰电流具有良好的线性关系，求得线性回归方程y（μA）=154.3-0.353c(μg/L),R=0.993，据此利用循环伏安方法，测定Anti-IgG浓度。本发明的检测方法具有操作简单、分析快速、灵敏度高、体系稳定和重现性好等优点。
【专利说明】—种检测Ant 1-1 gG浓度的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用电化学免疫传感器快速检测Ant1-1gG浓度的方法。
【背景技术】
[0002]IgG是机体抗感染免疫的主力抗体，在结合补体、增强免疫细胞吞噬病原微生物和 中和细菌毒素的能力方面，具有重要作用，能有效地抗感染。因此发展快速可靠的检测IgG 含量的方法是急需解决的问题。席夫碱化合物用于分析测试已有许多报道，但是双席夫碱 做为电活性物质在分析化学中的应用研究则相对地较少，考虑到双席夫碱配合物中较多的 配位点，有望成为良好的修饰电极中配合物修饰剂。利用石墨烯和氧化石墨烯独特的电学 性质与一些材料进行修饰以及制备性能更好的复合新材料是当前的研究热点，采用石墨烯 和氧化石墨烯与一些材料进行复合，复合后具有很好的导电性及生物相容性，在化学传感 器的制备及应用中有着广泛的前景。本发明制备了 3，5-二溴水杨醛双席夫碱镍配合物， 将此双席夫碱镍配合物与氧化石墨烯结合研制了电化学免疫传感器，利用循环伏安法和交 流阻抗法对免疫传感器制备过程进行电化学性表征，结果表明该传感器适合检测Ant1-1gG 浓度。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种用电化学免疫传感器快速检测Ant1-1gG浓度的方法。
[0004]本发明方法检测Ant1-1gG浓度的原理:以3，5_ 二溴水杨醛缩二乙烯三胺双席夫 碱镍配合物为电活性物质，通过涂滴法制备Ant1-1gG电化学免疫传感器，Ant1-1gG浓度在
0.0f260呢/1范围内与还原峰电流具有良好的线性关系，求得线性回归方程，据此利用循 环伏安方法，测定Ant1-1gG浓度。
[0005]具体步骤为:
(I)制备3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器
a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩尔3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超声分散2小时制得3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯 悬浮液。
[0006]b.将金电极在放有Al2O3粉末的麂皮上抛光后用二次水淋洗，再依次在无水乙醇 和二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干，然后在金电极上滴加步骤(I)第a步制得的 3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯悬浮液，经红外烘干，制得3，5- 二溴水杨醛 席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为LI电极。
[0007]c.滴加10微升浓度为1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3_ 二甲氨基丙烷)_3_乙 基碳二亚胺与NHS即羟基琥珀酰亚胺的混合溶液到步骤(I)第b步制得的LI电极上，水平 放置2小时，得到活化的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为 L2电极，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0008]d.用10微升浓度为1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步骤(I)第c步制得的L2电极上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为L3电极，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0009]e.在步骤⑴第d步制得的L3电极表面滴加10微升浓度为I毫克/毫升的BSA 即牛血清白蛋白溶液，对L3电极表面的活性位点进行封闭，红外烘干，记为L4电极，置于 4°C的冰箱中保存待用，L4电极即为3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器。
[0010](2)取5只步骤⑴制得的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器，在室温下，分别滴涂不同浓度的Ant1-1gG进行特异性结合，所滴涂的 Ant1-1gG的质量与固定在3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器上的h-1gG质量比为0~1: 1，用二次水洗涤晾干备用。
[0011](3)以步骤⑵处理过的传感器为工作电极，并以饱和甘汞电极为参比电极、钼金电极为辅助电极，在PH值为6.0的PBS缓冲溶液中进行循环伏安扫描，记录不同浓度 Ant1-1gG的循环伏安图中对应的还原峰电流，结果表明Ant1-1gG浓度在0.0f260微克/ 升的范围内，还原峰电流与Ant1-1gG浓度具有良好的线性关系，随着Ant1-1gG浓度增加， 电流逐渐减小，以Ant1-1gG浓度为横纵标，以还原峰电流为纵坐标，绘制工作曲线，其线性回归方程为 y (MA) =154.3-0.353c (l^g/L)，R=0.993，检出限为 0.006Pg/L (S/N=3)。[0012](4)另取一定量的Ant1-1gG待测溶液，同步骤(3)中的方法测定还原峰电流，再根据步骤(3)所得的线性回归方程计算待测溶液中Ant1-1gG的浓度。
[0013]本发明方法检测Ant1-1gG浓度具有操作简单、分析快速、灵敏度高、体系稳定和重现性好的优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1为本发明实施例中以Ant1-1gG浓度为横纵标和以还原峰电流为纵坐标绘制的工作曲线图。
【具体实施方式】
[0015]实施例:
(I)制备3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器
a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩尔3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超声分散2小时制得3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯悬浮液。
[0016]b.将金电极在放有Al2O3粉末的麂皮上抛光后用二次水淋洗，再依次在无水乙醇和二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干，然后在金电极上滴加步骤(1)第a步制得的 3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯悬浮液，经红外烘干，制得3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为LI电极。
[0017]c.滴加10微升浓度为1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3_ 二甲氨基丙烷)_3_乙基碳二亚胺与NHS即羟基琥珀酰亚胺的混合溶液到步骤(1)第b步制得的LI电极上，水平放置2小时，得到活化的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为 L2电极，置于4°C的冰箱中保存待用。[0018]d.用10微升浓度为1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步骤(1)第c步制得的 L2电极上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为L3电极，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0019]e.在步骤⑴第d步制得的L3电极表面滴加10微升浓度为I毫克/毫升的BSA 即牛血清白蛋白溶液，对L3电极表面的活性位点进行封闭，红外烘干，记为L4电极，置于 4°C的冰箱中保存待用，L4电极即为3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器。
[0020](2)取5只步骤(1)制得的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器，在室温下，分别滴涂10微升浓度分别为I微克/升、37.5微克/升、105微克 /升、175微克/升、260微克/升的Ant1-1gG进行特异性结合，用二次水洗涤晾干备用。
[0021](3)以步骤⑵处理过的传感器为工作电极，并以饱和甘汞电极为参比电极、钼金电极为辅助电极，在PH值为6.0的PBS缓冲溶液中进行循环伏安扫描，记录不同浓度 Ant1-1gG的循环伏安图中对应的还原峰电流，结果表明Ant1-1gG浓度在0.0f260微克/ 升的范围内，还原峰电流与Ant1-1gG浓度具有良好的线性关系，随着Ant1-1gG浓度增加， 电流逐渐减小，以Ant1-1gG浓度为横纵标，以还原峰电流为纵坐标，绘制工作曲线，其线性回归方程为 y (MA) =154.3-0.353c (l^g/L)，R=0.993，检出限为 0.006Pg/L (S/N=3)。
[0022](4)另取一定量的Ant1-1gG待测溶液，同步骤(3)中的方法测定还原峰电流，再根据步骤(3)所得的线性回归方程计算待测溶液中Ant1-1gG的浓度为87.63 5微克/升。
【权利要求】
1.一种检测Ant1-1gG浓度的方法，其特征在于具体步骤为:(1)制备3，5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩尔3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超声分散2小时制得3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯悬浮液；b.将金电极在放有Al2O3粉末的麂皮上抛光后用二次水淋洗，再依次在无水乙醇和二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干，然后在金电极上滴加步骤(1)第a步制得的3，5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯悬浮液，经红外烘干，制得3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为LI电极；c.滴加10微升浓度为1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3- 二甲氨基丙烷)-3-乙基碳二亚胺与NHS即羟基琥珀酰亚胺的混合溶液到步骤(1)第b步制得的LI电极上，水平放置 2小时，得到活化的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为L2电极，置于4°C的冰箱中保存待用；d.用10微升浓度为1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步骤(1)第c步制得的L2电极上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯修饰金电极，记为L3电极，置于4°C的冰箱中保存待用；e.在步骤(1)第d步制得的L3电极表面滴加10微升浓度为I毫克/毫升的BSA即牛血清白蛋白溶液，对L3电极表面的活性位点进行封闭，红外烘干，记为L4电极，置于4°C 的冰箱中保存待用，L4电极即为3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器；(2)取5只步骤(1)制得的3，5-二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器，在室温下，分别滴涂不同浓度的Ant1-1gG进行特异性结合，所滴涂的Ant1-1gG的质量与固定在3，5- 二溴水杨醛席夫碱镍配合物-氧化石墨烯电化学免疫传感器上的h-1gG 质量比为(Tl:l，用二次水洗涤晾干备用；(3)以步骤⑵处理过的传感器为工作电极，并以饱和甘汞电极为参比电极、钼金电极为辅助电极，在PH值为6.0的PBS缓冲溶液中进行循环伏安扫描，记录不同浓度Ant1-1gG 的循环伏安图中对应的还原峰电流，结果表明Ant1-1gG浓度在0.0f260微克/升的范围内，还原峰电流与Ant1-1gG浓度具有良好的线性关系，随着Ant1-1gG浓度增加，电流逐渐减小，以Ant1-1gG浓度为横纵标，以还原峰电流为纵坐标，绘制工作曲线，其线性回归方程为 y (似)=154.3-0.353。(吒/1)，1?=0.993，检出限为 0.006吒/1 (S/N=3)；(4)另取一定量的Ant1-1gG待测溶液，同步骤(3)中的方法测定还原峰电流，再根据步骤(3)所得的线性回归方程计算待测溶液中Ant1-1gG的浓度。
【文档编号】G01N27/48GK103499630SQ201310478363
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年10月14日 优先权日:2013年10月14日
【发明者】刘峥, 赖丽燕, 李巍 申请人:桂林理工大学