一种中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的测定方法
【专利摘要】本发明提供一种中药龙胆中抗老年痴呆有效成分苯甲酸酯类化合物的测定方法，属于化学分析领域。本方法特征在于：以龙胆为原料，经粉碎过筛，采用95%乙醇溶液超声萃取，过滤，从中提取苯甲酸酯类化合物，采用液相色谱-串联质谱联用仪实现龙胆中主要苯甲酸酯类化合物的测定。本发明中采用的LC-MS/MS法，灵敏度高，稳定性好，方便快速，适合复杂基质中超低含量目标物的批量分析。
【专利说明】一种中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于化学分析领域，具体涉及一种中药龙胆中抗老年痴呆有效成分苯甲酸酯类化合物的测定方法。
【背景技术】
[0002]中药龙胆(GentianaeRadix et Rhizoma)为龙胆科植物:条叶龙胆manshurica Kitag.,Jii^BGentiana scabra Bge.，三花龙胆(Sfefliiaaa triflora Pall.或滇龙胆rigescens Franch.的干燥根和根莖。滇龙胆，别名:滇龙胆草(滇南本草)、坚龙胆(中国高等植物图鉴)、苦草、青鱼胆、小秦艽(云南)、蓝花根、炮仗花，是《中国药典》收录的龙胆品种之一，也是云南著名道地药材，并收载于《滇南本草》。龙胆在《神农本草经》中作为上品收载，苦、寒；归肝、胆经；具有清热燥湿，泻肝胆火的功效；用于治疗湿热黄疸，阴肿阴痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，胁痛，口苦，惊风抽搐等症。龙胆中主要成分为环烯醚萜苷类化合物，以龙胆苦苷、獐牙菜苦苷等为代表。该类物质具有保肝、健胃、镇痛、抗病毒、促进细胞分裂、加快伤口愈合等多种功效。
[0003]从滇龙胆提取物中发现了十余种具有显著类似神经生长因子活性的2，3- 二羟基苯甲酸酯类新化合物，命名 为gentisides。具有显著的类似神经生长因子活性，神经营养作用和保护作用，是一种高效低毒的抗老年痴呆症中药活性组分。关于2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物只有化学合成的脂肪链含碳数低于11或16个碳的文献报道；欧洲专利(EP I930 002 Al)描述了苯甲酸酯类化合物式在治疗和预防病毒感染方面的应用；中国专利(CN1411339A)和美国专利所描述的苯甲酸类化合物主要用于抑菌，作为食品添加剂等。此外，龙胆具有来源广泛，取材便利等优点，容易获得大量的2，3- 二羟基苯甲酸酯类化合物。对研发预防和治疗老年痴呆症等神经退行性疾病的新药具有重要意义。
[0004]目前文献多集中在龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷等的高效液相色谱(HPLC)测定上，而对龙胆中的2，3- 二羟基苯甲酸酯类活性成分未见报道。液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)联用技术具有灵敏度高、专属性好、快速、高效的特点，已逐渐成为中药微量成分定量分析的有效手段。因此，本专利采用LC-MS/MS负离子多反应监测(MRM)扫描模式，同时测定滇龙胆中4种苯甲酸酯类化合物的含量，为其开发利用和质量控制提供必要的保证和依据。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对目前仍未有检测中药龙胆中的主要抗老年痴呆的活性成分的方法，而提供一种液相色谱-串联质谱法检测龙胆中苯甲酸酯类化合物的方法。
[0006]本发明通过以下技术方案实现。
[0007]本发明的检测方法采用95%乙醇溶液超声萃取龙胆中的苯甲酸酯类化合物，并通过微孔滤膜过滤处理，采用液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS)实现龙胆中主要苯甲酸酯类化合物的测定，具体步骤如下。
[0008]a、龙胆中主要苯甲酸酯类活性成分的提取:将龙胆干燥样品粉碎过筛，置于锥形瓶中并加入95%乙醇溶液，经超声萃取、过滤后，滤液经0.22m微孔滤膜处理，制备样品溶液。
[0009]b、样品的分析:
取不同部位的龙胆样品，按步骤a所述的方法制备供试品溶液，采用LC-MS/MS测定，记录峰面积，分别计算样品中 gentiside A, gentiside J, gentiside B, gentiside K 的含量，结果见表1。
【权利要求】
1.一种中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的测定方法，其特征是将中药龙胆样品干燥粉碎过筛，置于锥形瓶中并加入95%乙醇溶液，超声萃取，过滤得溶液后，滤液经0.22 μ m微孔滤膜处理，采用液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS)测定龙胆中苯甲酸酯类化合物的种类和含量。
2.根据权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法检测中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的方法，其特征在于:筛孔径为100目。
3.根据权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法检测中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的方法，其特征在于:龙胆样品为1.5g。
4.根据权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法检测中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的方法，其特征在于:95%乙醇溶液体积为10mL。
5.根据权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法检测中药龙胆中苯甲酸酯类化合物的方法，其特征在于:超声萃取时间为40min。
6.根据权利要求1所述的中药龙胆中苯甲酸酯类化合物，其特征在于:中药龙胆中四种主要苯甲酸酯类化合物包括 gentiside A, gentiside J, gentiside B 和 gentiside K。
【文档编号】G01N30/02GK103743828SQ201310503770
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年10月24日 优先权日:2013年10月24日
【发明者】潘俊, 肖丹, 李晚谊, 沈锐 申请人:云南省农业科学院药用植物研究所