多索茶碱注射液有关物质测定方法

多索茶碱注射液有关物质测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种多索茶碱注射剂的有关物质的测定方法，所述方法采用高效液相色谱法进行测定，本发明的有益效果在于：提供了一种耐用性好、操作简便快捷、系统适用性高的利用高效液相色谱法可以有效控制多索茶碱注射液的有关物质的方法，该方法采用至少含有茶碱、茶碱乙醇、茶碱乙醛在内的三种对照品用于有关物质的测定，同时本发明又提供了杂质A”、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质G、杂质咖啡因、三甲基黄嘌呤、杂质C’、杂质D’、杂质E’、杂质2和茶碱乙酸等用于多索茶碱有关物质测定的杂质对照品，可以控制由于不同合成路线、制剂制备过程和贮存过程带来的有关物质。本发明还提供了分离和合成包括杂质A、杂质A”、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质G等在内用于多索茶碱注射液有关物质测定的对照品的合成方法。
【专利说明】多索茶碱注射液有关物质测定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于注射液的有关物质测定领域，主要涉及一种多索茶碱注射剂的有关物质的测定方法。
【背景技术】
[0002]多索茶碱注射液(10ml: 0.2g、IOml:0.lmg,20ml:0.3mg)是以多索茶碱为原料的小
容量注射液。作为直接给予人体静脉给药的剂型，由于其存在较高的不良反应发生率等安全性问题，因此注射剂的安全性问题是广大医患人群和监管部门非常重视的重大问题。在影响注射剂的安全性问题的因素中，有关物质的确认和控制是至关重要的，因此良好的有关物质控制和检测方法，能够从根本上解决注射液的安全性问题。多索茶碱注射液的现有的质量标准中，只有规格10ml:0.2g的质量标准中规定了有关物质检测，且无单一杂质的限度要求，只规定总杂不得过0.8%，更没有杂质对照品的参与。在本领域中，研究注射液的有关物质时所用原料药的有关物质概况、制剂处方工艺、降解途径研究结果等因素都会对有关物质有影响，因此明确各有关物质的结构与溯源是比较困难的，现有技术的方法无法定性和定量多索茶碱注射液中的有关物质，虽然多索茶碱注射液已经上市多年，但是上述问题仍然没有得到解决。
[0003]另外，多索茶碱的合成路线较多，因此不同生产路线、储存条件和制剂工艺所带来的有关物质也不完全相同。因此，如何分离和确定不同合成路线的有关物质，用理想的检测方法来控制，一直是现有技术中存在的问题。

【发明内容】

[0004]本发明首先提供了一种耐用性好、操作简便快捷的、系统适用性高的利用高效液相色谱法有效控制多索茶碱注射液的有关物质的方法。本发明还提供了分离和合成用于多索茶碱注射液有关物质测定的对照品的方法。
[0005]本发明的一种多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定，所述方法是在如下色谱条件与系统适用性试验条件进行，并包括如下步骤:
[0006]色谱条件与系统适用性试验条件:填充剂包括十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括乙腈、甲醇、磷酸盐缓冲液中的一种或几种；检测波长240-295nm ;理论板数按多索茶碱峰计算不低于1000 ；
[0007]供试品溶液配制步骤:取所述多索茶碱用水稀释，作为供试品溶液；
[0008]对照溶液配制步骤:取所述供试品溶液用水稀释，作为对照溶液；
[0009]对照品配制步骤:取若干种对照品分别用水溶解并定量稀释制成对照品溶液，作为对照品溶液，所述对照品至少包括茶碱、杂质A、杂质B，所述杂质A为茶碱乙醇，所述杂质B为茶碱乙醛；
[0010]检测步骤:将所述对照品溶液、对照溶液、供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0011]判断步骤:供试品溶液的色谱图中与对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.2% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.4倍，杂质总和不得过0.7%。
[0012]本发明优选的用于多索茶碱注射液有关物质测定的色谱条件与系统适用性试验条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为12:88的乙腈和磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液PH值为5.8 ;检测波长为273nm ;理论板数按多索茶碱峰计算不低于2000。
[0013]采用上述的色谱条件与系统适用性方法，多索茶碱注射液有关物质测定方法为:
[0014]取所述多索茶碱注射液，用水稀释制成每Iml中含多索茶碱0.01-5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取0.5-5ml，置10-250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取茶喊对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、用水溶解并定量稀释制成每Iml中含茶碱、杂质A、杂质B各0.1-5 μ g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液进样1_50μ 1，各色谱峰之间的分离度均就符合要求，且连续进样6针，其相对标准偏差不得过2.0% ;另取对照溶液1-50 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10-30% ;再精密量取供试品溶液1-50 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中与茶碱对照品、杂质A对照品、杂质B对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.1% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍，杂质总和不得过0.5%。
[0015]进一步优选的多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述测定方法为:
[0016]取所述多索茶碱注射液，用水稀释制成每Iml中基本上含多索茶碱1.0mg或1.2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取氽喊对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、用水溶解并定量稀释制成每Iml中基本上含茶碱、杂质A、杂质B各0.5 μ g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液进样10μ 1，各色谱峰之间的分离度均就符合要求，且连续进样6针，其相对标准偏差不得过2.0% ;另取对照溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20% ;再精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中与茶碱对照品、杂质A对照品、杂质B对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.1% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍(0.1%)，杂质总和不得过(0.5%)ο
[0017]本发明的“基本上含”与本领域的“约含”的术语概念相同，一方面应理解为溶液中含有相应的溶质的数量是以实际称量数为准的，并且该称量数应符合有效数字保留位数的要求，另一方面，由于测量工具精度范围限制，必然存在测量误差，因而不可能正好称量或量取整数。比如，制备“用水稀释制成每Iml中基本上含多索茶碱1.0mg的溶液”，制备Iml含有0.90mg-l.1Omg的多索茶碱都是可以的，而且符合本发明的检测要求。
[0018]本发明的多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述对照品还包括杂质A”、杂质C、杂质D、杂质E和杂质G中的一种或若干种，各杂质的结构式如下:
[0019][0020]
【权利要求】
1.一种多索茶碱注射液有关物质测定方法，所述方法采用高效液相色谱法进行测定，其特征在于，所述方法是在如下色谱条件与系统适用性试验条件进行，并包括如下步骤: 色谱条件与系统适用性试验条件:填充剂包括十八烷基硅烷键合硅胶；流动相包括乙腈、甲醇、磷酸盐缓冲液中的一种或几种；检测波长240-295nm ;理论板数按多索茶碱峰计算不低于1000 ； 供试品溶液配制步骤:取所述多索茶碱用水稀释，作为供试品溶液； 对照溶液配制步骤:取所述供试品溶液用水稀释，作为对照溶液； 对照品配制步骤:取若干种对照品分别用水溶解并定量稀释制成对照品溶液，作为对照品溶液，所述对照品至少包括茶碱、杂质A、杂质B，所述杂质A为茶碱乙醇，所述杂质B为茶碱乙醛； 检测步骤:将所述对照品溶液、对照溶液、供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图； 判断步骤:供试品溶液的色谱图中与对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.2% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.4倍，杂质总和不得过0.7%。
2.如权利要求1所述的多索茶碱注射液有关物质测定方法，其特征在于，所述色谱条件与系统适用性试验条件为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为12:88的乙腈和磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液PH值为5.8 ;检测波长为273nm ;理论板数按多索茶碱峰计算不低于2000。
3.如权利要求2所述的多索茶碱注射液有关物质测定方法，其特征在于，所述测定方法为: 取所述多索茶碱注射液，用水稀释制成每Iml中含多索茶碱0.01-5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取0.5-5ml，置10-250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取茶喊对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、用水溶解并定量稀释制成每Iml中含茶喊、杂质A、杂质B各0.1-5 μ g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液进样1-50 μ 1，各色谱峰之间的分离度均就符合要求，且连续进样6针，其相对标准偏差不得过2.0% ;另取对照溶液1-50 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10-30% ;再精密量取供试品溶液1-50 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中与茶碱对照品、杂质A对照品、杂质B对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.1% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍，杂质总和不得过0.5%。
4.如权利要求3所述的多索茶碱注射液有关物质测定方法，其特征在于，所述测定方法为: 取所述多索茶碱注射液，用水稀释制成每Iml中基本上含多索茶碱1.0mg或1.2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取茶喊对照品、杂质A对照品、杂质B对照品、用水溶解并定量稀释制成每Iml中基本上含茶碱、杂质A、杂质B各0.5μ g的溶液，作为对照品溶液；照含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液进样10μ 1，各色谱峰之间的分离度均就符合要求，且连续进样6针，其相对标准偏差不得过2.0% ;另取对照溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20% ;再精密量取供试品溶液10 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍；供试品溶液的色谱图中与茶碱对照品、杂质A对照品、杂质B对照品保留时间相一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.1% ;其他未知杂质峰，其峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍(0.1%)，杂质总和不得过(0.5%)ο
5.如权利要求1所述的多索茶碱注射液有关物质测定方法，其特征在于，所述对照品还包括杂质Α”、杂质C、杂质D、杂质E和杂质G中的一种或若干种，各杂质的结构式如下:
6.如权利要求1所述的多索茶碱注射液有关物质测定方法，其特征在于，所述对照品还包括杂质咖啡因、三甲基黄嘌呤、杂质C’、杂质D’、杂质E’、杂质2和茶碱乙酸中的一种或若干种: 部分杂质的化学名如下: 杂质C’:N-(6-氨基-1，3- 二甲基-2，4- 二氧代-1，2，3，4-四氢嘧啶_5_基)甲酰胺、 杂质D’:N-甲基-5-(甲基氨基)-1H-咪唑-4-甲酰胺、 杂质 E’:1，3- 二甲基-7，9- 二氢-1H-嘌呤-2，6，8(3H)-三酮、 杂质2:1，3- 二甲基-2，6-酮-7-乙醒-1, 2, 3, 6-四氢批P定。
7.一种可以用如权利要求1-5所述的任意方法测定有关物质的多索茶碱注射液，其特征在于，制备所述多索茶碱注射液所用的多索茶碱按如下合成路线发生如下反应:
8.如权利要求7所述多索茶碱注射液的有关物质，其特征在于，所述有关物质包括杂质A”、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质A、杂质G、茶碱。
9.如权利要求8所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质A”按如下合成路线发生如下反应:
10.如权利要求8所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质B按如下合成路线发生如下反应:
11.如权利要求8所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质C按如下合成路线发生如下反应:
12.如权利要求7所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质D按如下合成路线发生如下反应:
13.如权利要求8所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质E的合成方法为:
14.如权利要求8所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质A按如下合成路线发生如下反应:
15.如权利要求8所述的有关物质的合成方法，其特征在于，所述杂质G按如下合成路线发生如下反应:
16.一种可以用如权利要求1-5所述的任意方法测定有关物质的多索茶碱注射液，其特征在于，所述注射液中含有氯化钠作为渗透压调节剂。
【文档编号】G01N30/02GK103837612SQ201310533945
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2013年11月3日 优先权日:2013年11月3日
【发明者】吴光彦 申请人:黑龙江福和华星制药集团股份有限公司