快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒及使用方法
【专利摘要】快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒由玻璃管、药膜及棉塞构成。所述的药膜是将500μL浓度为啶虫脒0.19mg/L的丙酮溶液均匀涂抹于指形管内壁及底部，滚动晾干后形成，将晾干的指形管塞上棉塞制成。本发明的使用方法是将准备好的诊断试剂盒带到田间，打开棉塞，把20头大小一致的苹果黄蚜成虫轻扫入指形管内，然后再塞上棉塞，60分钟后检查死亡率。用苹果黄蚜死亡率确定对啶虫脒的敏感度，从敏感度的高低决定施用农药的种类和用量。采用本发明的诊断试剂盒，能在2小时内快速、简便的判断苹果黄蚜对啶虫脒的敏感性，为科学有效地指导田间防治苹果黄蚜提供科学依据。
【专利说明】快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒及使用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及害虫敏感性快速 检测【技术领域】，具体地说涉及一种快速、简便测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒及使用方法。
【背景技术】
[0002]苹果黄姆citricola von der (Sboi)属半翅目 Hemiptera姆科Aphididae,又名绣线菊蚜，以成虫、若虫刺吸叶和枝梢的汁液，叶片被害后向背面横卷，影响新梢生长及树体发育，是苹果树上的主要害虫之一。为有效控制苹果黄蚜的危害，需要明确其对常用药剂的敏感性，便于科学选药和用药。目前常用点滴法或浸虫法，通过比较田间品系和敏感品系对常用药剂的致死中量(LD5tl)的区别，来确定其敏感度。一是专业技术性强，二是工作量大，三是耗费时间较长，不能及时为指导用药提供依据。
[0003]近年来，一种更为简便的研究病虫害敏感性的方法逐渐受到研究人员的重视，即诊断剂量法。诊断剂量法亦分两种，一种为平坡诊断法，另一种为区分剂量法。黄斌、郭莹、尤民生等人采用平坡诊断法分别研究了小菜蛾、黄曲条跳甲的敏感性，吕要斌等人亦采用平坡诊断法研究了田间小菜蛾种群对茚虫威的敏感性，结果表明诊断剂量法与浸液法具有相似结论，并发现平坡诊断法比浸液法更简便，在定性判别是否产生抗药性时具有较高可信度；高希武、罗万春、李国清等人分别采用区分剂量法研究了盲蝽、棉蚜、马铃薯甲虫、小菜蛾、棉铃虫的抗药性，确定了部分害虫的敏感基线和抗性诊断剂量。诊断剂量法相比传统方法更为简便，尤其是区分剂量法在确定区分剂量后，研究病虫害敏感性时较为便捷。但是，在现有相关技术方面未见采用诊断剂量法研究苹果黄蚜对农药敏感性的报道；现有对苹果黄蚜敏感性的检测常用点滴法或浸虫法，其通过比较田间品系和敏感品系对常用药剂的致死中量(LD50)的区别，来确定其敏感度，现有技术存在如下问题:一是专业技术性强，须专业技术人员操作；二是检测设施复杂，工作量大；三是耗费时间较长，检测时间均在10小时以上，不能及时为指导用药提供依据。为指导田间科学用药，增强其实用性和便捷性，供基层科技人员或农民使用，发明人研究了快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的方法，并开发出了诊断试剂盒。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种快速、简便测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒及使用方法，使用该诊断试剂盒，能在2小时内快速测定和判断苹果黄蚜对啶虫脒的敏感性，为指导田间科学用药提供简便快捷的用具和方法。
[0005]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
[0006]本发明的快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒由玻璃管、药膜及棉塞构成。所述的玻璃管为长7.5-10 cm、直径1.5-2.5 cm的指形管；所述的药膜是将500μ?浓度为啶虫脒0.19 mg/L的丙酮溶液均匀涂抹于指形管内壁及底部，滚动晾干后形成；所述的棉塞是经消毒处理后的脱脂棉制成；将晾干的指形管塞上棉塞即制成诊断试剂盒。
[0007]本发明的快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒的使用方法是:将准备好的啶虫脒诊断试剂盒带到田间，打开棉塞，把20头大小一致的苹果黄蚜成虫轻扫入指形管内，然后再塞上棉塞，60分钟后检查死亡率。若死亡率大于等于60%，表明被测试的苹果黄蚜对啶虫脒敏感度较高，可以用常规的啶虫脒浓度及用量进行防治；若死亡率低于60%，则表明被测试的苹果黄蚜对啶虫脒敏感度较低，应改用其他敏感度较高的农药。
[0008]采用本发明的快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒，能在2小时内快速、简便的判断苹果黄蚜对啶虫脒的敏感性，与现有诊断方法相比，诊断试剂盒操作简单，使用方便，普通农民经过简单的培训即会操作；极大地简化了诊断设施，诊断工作量也减少到最小；大大缩短了诊断时间，在2小时内便可得出诊断结果。为科学有效地指导田间防治苹果黄蚜提供科学依据，避免造成常规用量的农药防治效果差，造成果园的经济损失，或超常规用药造成环境污染。
[0009]药膜中农药的浓度及用量试验 1、试验药剂:啶虫脒原药。
[0010]2、试验种群和材料:
苹果黄蚜敏感品系(S):温室内自然继代生长4年，期间未接触过任何药剂。
[0011]苹果黄蚜抗性品系(R):田间采集。
[0012]供试昆虫:苹果黄虫牙citricola。
[0013]敏感品系(S):采集于太原市小店区孙家寨温室大棚。
[0014]抗性品系(R):采集于太原市小店区孙家寨果园，啶虫脒抗性倍数为3.01倍。
[0015](抗性倍数=抗性品系LC5tl/敏感品系LC5tl，其中LC5tl为致死中浓度，即致死50%个体的药剂浓度。)
供试试剂:丙酮。
[0016]适用的靶标作物为苹果树。
[0017]适合的害虫为苹果黄蚜。
[0018]3、试验方法:
通过药膜法测定啶虫脒的杀虫活性物质对苹果黄蚜的毒力，利用毒力回归方程计算苹果黄蚜死亡率在50%、60%、70%、80%、90%时所对应的剂量(LC5(1、LC6C1、LC7tl、LC8tl、LC9tl)，从而确定防治苹果黄蚜的药剂及用量，并据此制备诊断试剂盒。
[0019](I)试验种群敏感度测定:
采用指形管药膜法。用微量移液器在长7.5 cm、直径2.5 cm的指形管中加入500 μ?的药液(用500μ?丙酮溶解后的药液)，缓慢倾斜转动使药液在指形管底面及管壁内不同高度范围内形成均匀药膜；晾干后每管中接入大小一致的苹果黄蚜20头，然后将棉塞推至药膜边缘处，放于温度25±1 °C、光周期L: D = 14:10 h的光照培养箱中。I小时后调查蚜虫死亡数，计算死亡率，绘制毒力回归曲线。药剂浓度设置参照表1。
[0020](2)回归方程的建立:采用药膜法，测试啶虫脒对苹果黄蚜敏感品系的毒力。药剂浓度设置见表1。
[0021]表1诊断试剂盒药剂设置
【权利要求】
1.一种快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒，其特征在于，它由玻璃管、药膜和棉塞构成，所述的玻璃管为长7.5-10 Cm、直径1.5-2.5 cm的指形管；所述的药膜是将500μ?浓度为啶虫脒0.19 mg/L的丙酮溶液均匀涂抹于指形管内壁及底部，滚动晾干后形成；所述的棉塞是经消毒处理后的脱脂棉制成；将晾干的指形管塞上棉塞即可； 快速测定苹果黄蚜对啶虫脒敏感性的诊断试剂盒的使用方法如下: 将准备好的啶虫脒诊断试剂盒带到田间，打开棉塞，把20头大小一致的苹果黄蚜成虫轻扫入指形管内，然后再塞上棉塞，60分钟后检查死亡率，若死亡率大于等于60%，表明被测试的苹果黄蚜对啶虫脒敏感度较高，可以用常规的啶虫脒浓度及用量进行防治；若死亡率低于60%，则表明 被测试的苹果黄蚜对啶虫脒敏感度较低，应改用其他敏感度较高的农药。
【文档编号】G01N33/50GK103675249SQ201310636371
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月3日 优先权日:2013年12月3日
【发明者】范仁俊, 高越, 封云涛, 张润祥, 庾琴, 刘中芳, 郭瑞峰, 史高川, 郭晓君 申请人:山西省农业科学院植物保护研究所