一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体位置和污染的胶体金膜，包括含有胶体金探针的金标垫、PVC胶板、滤样纸以及金探针复溶液。此外，本发明还公开了该胶体金膜的制备方法及其在敏化硝酸纤维素膜生产起始阶段检测中的应用。本发明的胶体金膜应用于检测敏化硝酸纤维素膜生产起始阶段中敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及两种抗体是否被相互污染，具有操作安全、简便、快速、准确、适合生产现场操作等优点。
【专利说明】一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药【技术领域】，具体涉及一种胶体金膜，尤其涉及一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，适用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及质控抗体和捕获抗体是否被相互污染。此外，本发明还涉及该胶体金膜的制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]将质控抗体、捕获抗体包被到硝酸纤维素膜上生产敏化硝酸纤维素膜是免疫层析试纸条生产制作中的关键环节之一。目前的喷膜技术即将抗体包被到硝酸纤维素膜上，分为两种，一种是接触划点工艺，即在接触喷点系统中，喷头划过硝酸纤维素膜表面，同时泵推动一定量的液体从喷头处释放到硝酸纤维素膜表面上；另一种是喷点工艺，使用电磁阀连接高精度步进泵，将喷点液体喷点到硝酸纤维素膜上且以紧密的交迭点构成连续的线条，喷点过程与成像系统连接，能检查喷点线条的质量同时标记任何不好的部分。这两种工艺均能够将质控抗体和捕获抗体分别均匀地喷点在硝酸纤维素膜上指定区域(分别为质控线区域、检测线区域)。
[0003]由于目前的喷膜技术均无法区分质控抗体和捕获抗体，不能够确定质控抗体和捕获抗体位置对调或者检测两种抗体之间相互污染(例如，因喷膜抗体与捕获抗体配制/使用时混料而导致的抗体污染)，从而导致整批敏化硝酸纤维素膜报废。
[0004]因此，亟需开发一种可用于快速检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调以及质控抗体和捕获抗体是否被相互污染的新产品。
【发明内容】
[0005]针对现有技术的不足，本发明要解决的技术问题之一是提供一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，用于检测敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调和两种抗体是否被相互污染。
[0006]本发明要解决的技术问题之二是提供该胶体金膜的制备方法。
[0007]本发明要解决的技术问题之三是提供该胶体金膜在敏化硝酸纤维素膜检测中的应用。
[0008]为解决上述技术问题，在本发明的一方面，提供一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，该敏化硝酸纤维素膜上设有包被质控抗体的质控线和包被捕获抗体的检测线，该胶体金膜包括含有胶体金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。在PVC胶板上依次叠合有滤样纸，含有胶体金探针的金标垫，以及待检敏化硝酸纤维素膜；金探针复溶液滴加在滤样纸上。
[0009]作为优选的技术方案，所述金标垫是包被金探针的玻璃纤维。所述含有胶体金探针的金标垫为兔抗体金标垫或羊抗鼠抗体金标垫；所述兔抗体金标垫是兔多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上，所述羊抗鼠抗体金标垫是羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上。
[0010]作为优选的技术方案，所述金探针是偶联抗体的胶体金颗粒，即所述胶体金探针采用胶体金颗粒与抗体分子通过物理吸附的作用偶联结合。
[0011]作为优选的技术方案，所述胶体金颗粒的直径范围是20-60nm。
[0012]作为优选的技术方案，所述抗体分子是兔多克隆抗体或羊抗鼠多克隆抗体。即所述兔抗体胶体金膜包括包被兔多克隆抗体标记的金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。所述羊抗鼠抗体胶体金膜包括包被羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针的金标垫以及配套使用的PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液。
[0013]作为优选的技术方案，所述金探针复溶液包括以下组分(质量百分比):
[0014]Triton X-100 0.05% ；
[0015]NaH2PO4.2H20 0.38% ；
[0016]Na2HPO4.12H20 2.95% ；
[0017]该金探针复溶液的ρΗ=8.0±0.I。
[0018]在本发明的另一方面，提供一种上述胶体金膜的制备方法，包括如下步骤:
[0019](I)胶体金颗粒的制备；
[0020](2)金探针复溶液的配制；
[0021](3)金探针的制备:取胶体金溶液，用0.1M碳酸钾溶液调整其PH为8.0-8.4，加入抗体，继续搅拌30分钟，加入终浓度为1%的牛血清白蛋白，继续搅拌30分钟，4°C 11000RTC转速离心，弃上清，沉淀用金探针复溶液重悬，2-8°C保存备用；
[0022](4)金探针稀释液的配制；
[0023](5)金标垫溶液的配制；测量上述步骤(3)制备的胶体金探针0D530值，用金探针稀释液稀释至0D530为1-2 ；
[0024](6)金标垫的制备:将30cm长的玻璃纤维浸泡在上述步骤(5)制备的金标垫溶液中，待玻璃纤维完全湿润后取出，37°C烘干后室温密封保存备用；
[0025](7)胶体金膜由滤样纸和PVC胶板及步骤(6)制得的金标垫和步骤(2)制得的金探针复溶液所组成。
[0026]作为优选的技术方案，步骤(2)中，所述金探针复溶液包括如下重量百分比的组分:
[0027]Triton X-100 0.05% ；
[0028]NaH2PO4.2H20 0.38%
[0029]Na2HPO4.12H20 2.95%
[0030]该金探针复溶液的pH=8.0±0.1 ;
[0031]步骤(4)中，所述金探针稀释液包括以下质量百分比的组分:
[0032]
【权利要求】
1.一种用于检测敏化硝酸纤维素膜上抗体的胶体金膜，该敏化硝酸纤维素膜上设有包被质控抗体的质控线和包被捕获抗体的检测线，其特征在于，该胶体金膜包括含有胶体金探针的金标垫，PVC胶板、滤样纸和金探针复溶液；在PVC胶板上依次叠合有滤样纸，含有胶体金探针的金标垫，以及待检敏化硝酸纤维素膜；金探针复溶液滴加在滤样纸上。
2.如权利要求1所述的胶体金膜，其特征在于，所述金标垫是包被金探针的玻璃纤维；所述含有胶体金探针的金标垫为兔抗体金标垫或羊抗鼠抗体金标垫；所述兔抗体金标垫是兔多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上，所述羊抗鼠抗体金标垫是羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针包被在玻璃纤维上。
3.如权利要求1所述的胶体金膜，其特征在于，所述胶体金探针采用胶体金颗粒与抗体分子通过物理吸附的作用偶联结合。
4.如权利要求3所述的胶体金膜，其特征在于，所述胶体金颗粒直径在20-60nm。
5.如权利要求3所述的胶体金膜，其特征在于，所述抗体分子是兔多克隆抗体或羊抗鼠多克隆抗体。
6.如权利要求1所述的胶体金膜，其特征在于，所述金探针复溶液包括如下重量百分比的组分:
Triton X-100 0.05% ；
NaH2PO4.2H20 0.38% ；
Na2HPO4.12H20 2.95% ； 该金探针复溶液的pH=8.0±0.1。
7.—种如权利要求1-6任一项所述的胶体金膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)胶体金颗粒的制备； (2)金探针复溶液的配制； (3)金探针的制备:取胶体金溶液，用0.1M碳酸钾溶液调整其PH为8.0-8.4，加入抗体，继续搅拌30分钟，加入终浓度为1%的牛血清白蛋白，继续搅拌30分钟，4°C 11000RTC转速离心，弃上清，沉淀用金探针复溶液重悬，2-8°C保存备用； (4)金探针稀释液的配制； (5)金标垫溶液的配制；测量上述步骤(3)制备的胶体金探针0D530值，用金探针稀释液稀释至0D530为1-2 ； (6)金标垫的制备:将玻璃纤维浸泡在上述步骤(5)制备的金标垫溶液中，待玻璃纤维完全湿润后取出，37°C烘干后室温密封保存备用； (7)胶体金膜由滤样纸和PVC胶板及步骤(6)制得的金标垫和步骤(2)制得的金探针复溶液所组成。
8.如权利要求7 所述的制备方法，其特征在于， 步骤(2)中，所述金探针复溶液包括如下重量百分比的组分:
Triton X-100 0.05% ；
NaH2PO4.2H20 0.38% ；
Na2HPO4.12H20 2.95% ； 该金探针复溶液的pH=8.0±0.1。步骤(4)中，所述金探针稀释液包括以下质量百分比的组分:
9.如权利要求1-6任一项所述的胶体金膜在敏化硝酸纤维素膜检测中的应用，其特征在于，所检测的敏化硝酸纤维素膜为在敏化硝酸纤维素膜启始生产时剪切下来的一小段敏化硝酸纤维素膜。
10.如权利要求9所述的胶体金膜在敏化硝酸纤维素膜检测中的应用，其特征在于，所述检测过程是当开始生产敏化硝酸纤维素膜时，将起始一小段敏化硝酸纤维素膜剪下，使用权利要求1-6任一项所述的胶体金膜检测，即先将裁剪下来的敏化硝酸纤维素膜粘贴在PVC胶板上，再将金标垫和滤样纸依次粘贴在此PVC胶板上，然后裁剪成试纸条，在试纸条的滤样纸上滴加金探针复溶液，3-5分钟内观察敏化硝酸纤维素膜上质控线和检测线的显色情况，以此判断敏化硝酸纤维素膜上质控抗体和捕获抗体位置是否对调、两种抗体是否被相互污染。
11.如权利要求9所述的应用，其特征在于，在所述敏化硝酸纤维素膜上质控抗体为羊抗兔多克隆抗体，捕获抗体为鼠单克隆抗体，检测用的胶体金膜是含有兔多克隆抗体标记的金探针的兔抗体胶体金膜或含有羊抗鼠多克隆抗体标记的金探针的羊抗鼠抗体胶体金膜。
12.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述敏化硝酸纤维素膜检测的结果判断方法如下:
【文档编号】G01N33/531GK103675264SQ201310653323
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】张展英, 杜昕光 申请人:美艾利尔（上海）诊断产品有限公司