谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素含量的方法。具体为：待测样品粉碎或者切成小块后用萃取溶剂萃取得到供试品；供试品和黄曲霉毒素标准样品分别点加在相同的薄层硅胶板或滤纸上，在紫外灯下比较供试品和黄曲霉毒素标准样品的荧光颜色和荧光强度，以判断供试品中黄曲霉毒素的含量和所含的黄曲霉毒素种类。本发明的检测方法步骤简单，检测时间短，也可以适用于大量样品的同时检测，且检测成本低，使用溶剂量极少，环保，产业应用价值高。
【专利说明】谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素含量的方法
【技术领域】
本发明涉及在谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素的方法，属于食品安全检验【技术领域】。
【背景技术】
黄曲霉毒素(Aflatoxin)是真菌毒素的ー种。在结构上，黄曲霉毒素是ー类由氨基酸、莽草酸、以及丙二酰-COA通过特殊途径而合成的分子量低的小分子化合物。它们可以在真菌菌丝或分泌到周围的环境中而积累。这些毒素基本上是在农业产品食物中由被黄曲霉菌和寄生曲霉囷污染所广生的。寄生曲霉囷广生四种王要的黄曲霉韋素:B1，B2，Gl和G2，而黄曲霉只产生BI和B2两种黄曲霉毒素。黄曲霉毒素最初是从黄曲霉菌中鉴定分离出来的。B型黄曲霉毒素在紫外光线下显示蓝色(Blue)荧光，而G型黄曲霉毒素在紫外光线下显示绿色(Green)突光。 黄曲霉毒素是致癌毒素极强的毒素，广泛存在于花生、玉米，大米、小麦、坚果类等人类常用食品和动物饲料中，严重影响人类的身体健康和畜牧生产力。
为了把黄曲霉毒素在食物中的潜在含量降低到最小，许多食品中黄曲霉毒素的最高允许含量现已有明确規定。美国食品药品管理局(FDA)的法律条文特别规定禁止销售被黄曲霉毒素污染超标的食品。FDA规定美国洲际贸易食品和饲料允许总量不得高于20ppb。
目前精确定性定量測定黄曲霉毒素的技术和分析方法包括:薄层色谱法、高压液相色谱法(HPLC)、气相色谱分析法(GC)。用于快速检测黄曲霉毒素的方法主要为:在含量精确到每毫升中I毫微克的方法[I]、用血清抗体的原理快速检测的免疫分析法(RIA)和酶联免疫吸附測定法(ELISA) [2，3]。另外，对检查各种各样农产品中黄曲霉毒素的体外试剂盒已发展成不少于十种。
但是，目前大多数检验检测方法都需要专用仪器和复杂程序[4，5]，检测时间长，检测费用闻等缺点。
參考文献:
[0001]J.Public.Health Manag.Pract.1997，3:61-69.[0002]Arch.Environ.Contam.Toxicol.1989，18:308-314.[0003]Int.J.Food Microbiol.2005，99:185-194.[0004]Crit.Rev.Food Sc1.Nutr.2014，54:64-83.[0005]Crit.Rev.Food Sc1.Nutr.1991，30:403-439.
【发明内容】
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素含量的方法，该检测方法不需要特殊的检测仪器，检测步骤简单易行，检测成本低，检测时间短。本发明的方法适用于快速检测各种谷物、食品和动物饲料中的黄曲霉毒素的含量。本发明的目的是由如下的技术方案来实现的。 一种谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素的方法，包括如下步骤:
(1)将待测样品粉碎或者切成小块，置于试管中，加入萃取溶剂搅拌或振摇萃取，取萃取液，得供试品；
(2)将步骤(I)的供试品和黄曲霉毒素标准样品分别点加在相同的薄层硅胶板或滤纸上，其中点加供试品和黄曲霉毒素标准样品时，均以点加量递增的顺序依次点加；
(3)待步骤(2)的薄层硅胶板或滤纸上的溶剂挥干后，在波长366nm的紫外灯下比较供试品和黄曲霉毒素标准样品的荧光颜色和荧光强度，确定荧光顔色和荧光强度均为相似的标准样品点样斑点B和供试品点样斑点A，认为斑点B和斑点A中含有的黄曲霉毒素总含量相同；
(4)计算待测样品中黄曲霉毒素含量yg，计算公式为:待测样品中加入的萃取溶剂总体积y IX斑点B所含的黄曲霉毒素总量U g/斑点A的供试品点加体积U I。
本发明中，步骤(I)中所述萃取溶剂为三氯甲烷、丙酮、甲醇中的ー种，所述待测样品与萃取溶剂的质量体积比(g:ml)为1:1-5，优选为1:1-2，萃取时间为5-10min，优选为5min。
在本发明中，所述黄曲霉毒素标准样品为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素Gl、黄曲霉毒素G2、混合黄曲霉毒素中的ー种或多种。
在本发明的技术方案中，所述混合黄曲霉毒素为黄曲霉毒素毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2按质量比1:1:1:1混合的混合物。在本发明的技术方案中，所述待测样品优选为花生、玉米，大米、小麦、棉籽、坚果类、饲料中的ー种。所述待测样品也可以为其他谷物、各种食品以及动物饲料。
在本发明的技术方案中，所述黄曲霉毒素标准样品溶于三氯甲烷，浓度为0.1 y g/yl。
在本发明的技术方案中，在步骤(2)中所述供试品和黄曲霉毒素标准样品点样直径在不大于Icm,点样一次性完成或分多次完成，点加量1-80 ii I。
本发明的有益效果:
(1)本发明的检测方法步骤简单，不需要特殊的设备和实验场所，检测时间短，每次检测时间15-20min，也可以大量样品的同时检测，便于产业上应用。
(2)本发明的检测方法，检测成本低，使用溶剂量极少，环保，产业应用价值高。
(3)本发明的检测方法，适用于快速检测各种谷物、食品和动物饲料中的黄曲霉毒素的含量以及可以初步判断样品中所含的黄曲霉毒素的种类。
(4)本发明的检测方法，简单易学、便于培训和推广。
【专利附图】
【附图说明】
本发明共有3个附图。
图1为本发明实施例1中点加在薄层硅胶板上的供试品和黄曲霉毒素标准样品在紫外灯下的荧光检测结果；其中a (上面的一行样品斑点)为供试品点样斑点，其中斑点1-7的点样量依次为l、2、4、8、16、32、64ii I ；b (下面的一行斑点)为黄曲霉毒素标准样品点样斑点，其中斑点1-7的点样量依次为1.25,2.5、5、10、20、40、80iil。
图2为本发明实施例2中生长在培养基上的寄生曲霉(Yl)和生长在培养基上的黄曲霉菌(Y2)的照片。
图3为本发明实施例2中点加在薄层硅胶板上的供试品和黄曲霉毒素标准样品在紫外灯下的荧光检测结果；其中斑点Y1-1、Y2-1、Y3-1、Y4-1、E-1分别为点加量为I 的Yl供试品、Y2供试品、Y3供试品、Y4供试品和黄曲霉毒素标准样品；Y1-10、Y2-10、Y3-10、Y4-10、E-1O分别为点加量为10 ill的Yl供试品、Y2供试品、Y3供试品、Y4供试品和黄曲霉毒素标准样品。
【具体实施方式】
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用试剂等均可从化学试剂公司购买。
实施例1花生中生长的黄曲霉毒素含量的測定
(1)取发霉花生I粒，称重，0.45g，将其切成小块，置于试管中，加入800iU三氯甲烷，搅拌萃取5分钟，取萃取液，得供试品；
(2)将步骤(1)的供试品和黄曲霉毒素标准样品分别点加在相同的薄层硅胶板，其中点加供试品和黄曲霉毒素标准样品时，均以点加量递增的顺序依次点加，供试品和黄曲霉毒素标准样品的点加量如表1。
表1.供试品和黄曲霉毒素标准样品在薄层硅胶板上的点样量
【权利要求】
1.一种谷物和食品中快速检测黄曲霉毒素含量的方法，包括如下步骤: (1)将待测样品粉碎或者切成小块，置于试管中，加入萃取溶剂搅拌或振摇萃取，取萃取液，得供试品； (2)将步骤(I)的供试品和黄曲霉毒素标准样品分别点加在相同的薄层硅胶板或滤纸上，其中点加供试品和黄曲霉毒素标准样品时，均以点加量递增的顺序依次点加； (3)待步骤(2)的薄层硅胶板或滤纸上的溶剂挥干后，在波长366nm的紫外灯下比较供试品和黄曲霉毒素标准样品的荧光颜色和荧光强度，确定荧光顔色和荧光强度均为相似的标准样品点样斑点B和供试品点样斑点A，认为斑点B和斑点A中含有的黄曲霉毒素总含量相同； (4)计算待测样品中黄曲霉毒素含量yg，计算公式为:待测样品中加入的萃取溶剂总体积y IX斑点B所含的黄曲霉毒素总量U g/斑点A的供试品点加体积U I。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中所述萃取溶剂为三氯甲烷、丙酮、甲醇中的ー种，所述待测样品与萃取溶剂的质量体积比(g:ml)为1:1-5，萃取时间为5_10mino
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述黄曲霉毒素标准样品为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、混合黄曲霉毒素中的ー种或多种。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述混合黄曲霉毒素标准样品为黄曲霉毒素毒素B1、黄曲霉毒素毒素B2、黄曲霉毒素毒素Gl、黄曲霉毒素毒素G2按质量比1:1:1:1的混合物。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为花生、玉米，大米、小麦、棉籽、坚果类、饲料中的ー种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，黄曲霉毒素标准样品溶于三氯甲烷，浓度为 0.1 u g/ u I。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中所述供试品和黄曲霉毒素标准样品的点样直径在不大于Icm,点样一次性完成或分多次完成，点加量1-80 ii I。
【文档编号】G01N30/90GK103604902SQ201310660329
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】张淑金, 孙家琪 申请人:张淑金