一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法
【专利摘要】本发明涉及一种用液相色谱法分离测定恩替卡韦及其全反式异构体的方法,该方法以多糖涂敷型色谱柱,以异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸溶液为流动相,异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸体积比为500∶500∶1,可以定量测定恩替卡韦的全反式异构体含量,从而有效控制药品质量。
【专利说明】一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及恩替卡韦片的检测【技术领域】，特别涉及一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法。
【背景技术】
[0002]慢性乙肝病毒感染一直是全球范围医学的难题，开发抗乙肝病毒药物也一直是个医学热点。恩替卡韦化学名为2-氨基-9_[(1S，3R, 4S)-4-羟基-3-羟甲基_2_亚甲基环戊基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮一水合物，是为鸟嘌呤核苷类似物，对乙型肝炎病毒多聚酶具有抑制作用。恩替卡韦片适用于病毒复制活跃、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)持续升高或肝脏组织学显示活动性病变的慢性成人乙型肝炎患者的治疗。
[0003]恩替卡韦有3个手性中心，可能产生多个光学异构体杂质，全反式异构体在有关物质检查条件下不能检出。
[0004]本发明采用手性色谱柱对恩替卡韦与全反式异构体进行分离，并对检测方法进行优化，从而建立了更有效的检测恩替卡韦片中全反式异构体的检测方法。关于本研究优化建立的恩替卡韦片中全反式异构体分离方法未见报道。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题在于针对现有恩替卡韦片检测方法所存在的诸多技术问题而提供一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法。
[0006]本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现:
[0007]—种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法，包括如下步骤:
[0008]( I)系统适用性溶液制备步骤
[0009]称取恩替卡韦全反式异构体3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇40mL,超声使溶解，放冷，无水乙醇稀释至刻度，摇匀作为恩替卡韦全反式异构体储备液；
[0010](2)系统适用性溶液制备步骤
[0011]称取恩替卡韦标准品约6.0mg，置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇约40mL，超声使溶解，放冷，精密量取步骤(I)制备的恩替卡韦全反式异构体储备液1.0mL加入，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液；
[0012](3)供试品溶液制备步骤
[0013]将恩替卡韦片研成细粉，精密称取细粉适量，将细粉完全转移至量瓶中，加无水乙醇使溶解并定容，滤过，取续滤液制成每ImL约含恩替卡韦0.15mg的溶液,摇勻,滤过,作为供试品溶液；
[0014](4)对照品溶液制备步骤
[0015]将步骤(I)制备的供试品溶液离心，从离心后的供试品溶液上清液中精密量取
1.0mL到IOOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得质量百分比浓度为1.0%的对照品溶液；
[0016](5)流动相制备步骤
[0017]将无水乙醇500ml和500ml异丙醇，加入Iml三氟乙酸，混匀，超声30分钟，即得；
[0018](6)色谱系统建立步骤
[0019]色谱柱:多糖涂敷型色谱柱250*4.6mm，柱温:30°C，检测器:紫外检测器，250nm，流速:1.0ml/min,进样体积:20 μ 1；
[0020](7)洗脱步骤
[0021]等度洗脱
[0022](8)分析过程步骤
[0023]照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定；
[0024]精密量取系统适用性溶液20 μ 1注入液相色谱仪中，出峰前后顺序为异构体和恩替卡韦，异构体和主峰的分离度应不小于2.0 ；
[0025]精密量取对照品溶液20 μ 1注入符合系统适用性要求的液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%。再精密量取20 μ 1的空白溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0026](9)计算步骤
[0027]依据步骤(8)记录的色谱图，用主成分自身对照法计算恩替卡韦片中全反式异构体，即得；具体计算公式如下:
[0028]%impurity A = Aspl/ Astd
[0029]注:Aspl=样品溶液中异构体峰面积；Astd=l%自身对照溶液主峰峰面积。
[0030]本发明可以定量测定恩替卡韦的全反式异构体含量，从而有效控制药品质量。
【专利附图】
【附图说明】
[0031]图1为恩替卡韦的全反式异构体结构图。
【具体实施方式】
[0032]通过下面给出的本发明的具体实施的方式可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定。
[0033]一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法，包括如下步骤:
[0034]( I)系统适用性溶液制备步骤
[0035]称取恩替卡韦全反式异构体3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇40mL,超声使溶解，放冷，无水乙醇稀释至刻度，摇匀作为恩替卡韦全反式异构体储备液；
[0036](2)系统适用性溶液制备步骤
[0037]称取恩替卡韦标准品约6.0mg,置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇约40mL，超声使溶解，放冷，精密量取步骤(1)制备的恩替卡韦全反式异构体储备液1.0mL加入，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液；
[0038](3)供试品溶液制备步骤
[0039]将恩替卡韦片研成细粉，精密称取细粉适量，将细粉完全转移至量瓶中，加无水乙醇使溶解并定容，滤过，取续滤液制成每ImL约含恩替卡韦0.15mg的溶液,摇匀,滤过,作为供试品溶液；
[0040]( 4 )对照品溶液制备步骤
[0041]将步骤(1)制备的供试品溶液离心，从离心后的供试品溶液上清液中精密量取
1.0mL到IOOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得质量百分比浓度为1.0%的对照品溶液；
[0042](5)流动相制备步骤
[0043]将无水乙醇500ml和500ml异丙醇,加入Iml三氟乙酸,混匀,超声30分钟，即得；
[0044](6 )色谱系统建立步骤
[0045]色谱柱:多糖涂敷型色谱柱250*4.6mm，柱温:30°C，检测器:紫外检测器，250nm，流速:1.0ml/min,进样体积:20 μ I ；
[0046](7)洗脱步骤
[0047]等度洗脱
[0048](8)分析过程步骤
[0049]照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定；
[0050]精密量取系统适用性溶液20 μ I注入液相色谱仪中，出峰前后顺序为异构体和恩替卡韦，异构体和主峰的分离度应不小于2.0 ；
[0051]精密量取对照品溶液20μ I注入符合系统适用性要求的液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%。再精密量取20 μ I的空白溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0052](9)计算步骤
[0053]依据步骤(8)记录的色谱图，用主成分自身对照法计算恩替卡韦片中全反式异构体，即得；具体计算公式如下:
[0054]
【权利要求】
1.一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)系统适用性溶液制备步骤 称取恩替卡韦全反式异构体3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇40mL,超声使溶解，放冷，无水乙醇稀释至刻度，摇匀作为恩替卡韦全反式异构体储备液； (2)系统适用性溶液制备步骤 称取恩替卡韦标准品约6.0mg，置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇约40mL，超声使溶解，放冷，精密量取步骤(1)制备的恩替卡韦全反式异构体储备液1.0mL加入，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液； (3)供试品溶液制备步骤 将恩替卡韦片研成细粉，精密称取细粉适量，将细粉完全转移至量瓶中，加无水乙醇使溶解并定容，滤过，取续滤液制成每ImL约含恩替卡韦0.15mg的溶液,摇匀,滤过,作为供试品溶液； (4)对照品溶液制备步骤 将步骤(1)制备的供试品溶液离心，从离心后的供试品溶液上清液中精密量取1.0mL到IOOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得质量百分比浓度为1.0%的对照品溶液； (5)流动相制备步骤 将无水乙醇500ml和500ml异丙醇,加入Iml三氟乙酸,混匀,超声30分钟，即得； (6)色谱系统建立步骤 色谱柱:多糖涂敷型色谱柱250*4.6mm，柱温:30°C，检测器:紫外检测器，250nm，流速:1.0ml/min,进样体积:20 μ I ； (7)洗脱步骤 等度洗脱 (8)分析过程步骤 照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定； 精密量取系统适用性溶液20 μ I注入液相色谱仪中，出峰前后顺序为异构体和恩替卡韦，异构体和主峰的分离度应不小于2.0 ； 精密量取对照品溶液20 μ I注入符合系统适用性要求的液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%。再精密量取20 μ I的空白溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图； (9)计算步骤 依据步骤(8)记录的色谱图，用主成分自身对照法计算恩替卡韦片中全反式异构体，SP得；具体计算公式如下:
【文档编号】G01N30/88GK103675185SQ201310666403
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月10日 优先权日:2013年12月10日
【发明者】叶湘武, 付爱玲, 邱永锋, 杨帅兵 申请人:上海景峰制药股份有限公司